小鼠烧伤坏死真皮基质的制备方法及生物学评价

目的:探讨小鼠烧伤坏死真皮基质(BNDM)制备方法,并对其生物学性能进行评价。方法:水浴烫伤法制备昆明小鼠Ⅲ度烫伤模型,3 d后取烫伤部位皮肤,以0.25%Trypsin-0.5%TritonX-100溶液洗脱处理,制成BNDM。以正常小鼠脱细胞真皮基质(ADM)作对照,HE染色及DAPI染色后观察洗脱效果及胶原排列情况。将ADM和BNDM分别埋植入小鼠皮下,于埋植后1、2、3、4周观察真皮基质的外观及其与周围组织的关系,以及ADM和BNDM中胶原排列、细胞浸润及血管生成情况。结果:BNDM质地较ADM柔软,有一定的柔韧性和延展性。HE染色观察BNDM的胶原纤维结构模糊,呈均质玻璃样改变,嗜伊红性增强,经DAPI染色证实基质内无染色质成分存留。皮下埋植试验显示BNDM和ADM均无明显排斥反应和毒副作用。显微镜下观察埋植术后第1周即可见到ADM及BNDM中有成纤维细胞长入并有炎性细胞浸润。埋植后第3周,细胞浸润更多并可见毛细血管长入,较其他时间点更明显,而ADM较BNDM更明显(P<0.05);至埋植后第4周,炎症反应减轻。结论:烧伤坏死皮肤经Trypsin-TritonX-100溶液处理后,可以保持胶原纤维的连续性,无明显的不良反应,成纤维细胞和炎性细胞可以很好地浸润生长,并有毛细血管长入,能满足异体或自体皮肤移植的基本要求。