烫水蛭(蚂蟥)配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立烫水蛭(蚂蟥)及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据烫水蛭(蚂蟥)细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出烫水蛭(蚂蟥)的稳定引物区间;在区间内筛选获得烫水蛭(蚂蟥)的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,并设计烫水蛭(蚂蟥)特异性鉴别引物TSZ-F、TSZ-R;分别收集烫水蛭(蚂蟥)及其阴性样品,建立烫水蛭(蚂蟥)配方颗粒特异性PCR鉴别方法,并对PCR体系进行优化,对该方法的耐受性和适用性进行考察。结果:当退火温度为54℃、循环数为34次,烫水蛭(蚂蟥)及其配方颗粒经PCR和凝胶电泳后,可在约133bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别烫水蛭(蚂蟥)饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒,也为可其中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。

水蛭炮制前后质量分析

目的研究水蛭炮制前后的质量差异,建立其质量控制体系。方法参照2015版《中国药典》对产自全国主要产区的水蛭及烫水蛭进行质量标准研究,测定了其中的水分、灰分、酸不溶性灰分、p H值、抗凝活性,进行了TLC鉴别、HPLC指纹图谱及特征图谱的探索研究。结果水蛭的含水量为12. 49%~15. 29%(平均13. 71%),烫水蛭的含水量为6. 03%~8. 99%(平均7. 82%);水蛭的总灰分为1. 69%~5. 11%(平均3. 28%),烫水蛭的总灰分为2. 30%~6. 94%(平均4. 30%);水蛭的酸不溶性灰分为0. 61%~1. 62%(平均0. 97%),烫水蛭的酸不溶性灰分为0. 90%~1. 93%之间(平均1. 46%);水蛭的p H值4. 89~6. 44 (平均5. 60),烫水蛭的p H为4. 55~6. 23 (平均5. 42)。同时,TLC斑点清晰,HPLC指纹图谱特征峰明确。结论该方法操作简单,准确可靠,重复性好,可用于水蛭及烫水蛭的质量控制。

炮制对水蛭氨基酸成分的影响

按常规方法制备水解液 ,用氨基酸自动分析仪进行氨基酸定量分析。结果氨基酸总量烫制品高于水蛭生品。表明临床应用以烫水蛭为佳。