热休克培养对bFGF转染骨髓间充质干细胞FGFRs及凋亡相关蛋白的影响

目的探讨热休克培养对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)及Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白的影响。方法 4周龄雄性SD大鼠处死后获取BMSCs,24h热休克培养,分别转染b FGF基因过表达腺病毒载体Ad-b FGF和空载体Ad-GFP,并设立阴性对照组,q RT-PCR和Western blot法分别鉴定3组细胞b FGF基因和蛋白的表达情况,Western blot法测定FGFRs、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果转染后48h,RT-PCR和Western blot结果显示,转染Ad-b FGF组细胞有b FGF基因和蛋白表达,而阴性对照组和空载体Ad-GFP组未检测;Western blot结果表明,与阴性对照组和空载体Ad-GFP组相比,转染Ad-b FGF组FGFRs、Bcl-2表达增高,而Bax、Caspase-3表达下降,Bax/Bcl-2比值下降(P<0.05),阴性对照组和空载体Ad-GFP组差异无统计学意义(P>0.05)。结论腺病毒介导的基因转染技术能实现b FGF转染到BMSCs中,借助于热休克培养能提高FGFRs表达水平,并增强细胞抗凋亡能力,有望成为基因治疗的理想载体。

共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响(R68)

目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/ml)处理组。主要观察指标:①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝,②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG相对浓度分别为7.410±1.738、8.844±1.981、22.4272±2.058、2.445±0.2517(P<0.05),对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞(OB-PBMs)共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收,CPN10通过对成骨细胞的作用,致其分泌的OPG/RANKL比例失调,并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。