基因重组人HSP73抗体的制备及对肿瘤细胞在温热作用后HSP70表达的检测

目的 用基因工程方法表达、提纯人热休克类似蛋白 73(HSP73) ,制备抗体 ,检测吐温 80协同 41℃温热对肿瘤细胞HSP70表达的影响。方法 用人HSP73基因构建原核细胞表达载体 pETHSP73,在大肠杆菌BL2 1中用半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,经电泳法和ATP亲和层析法提取HSP73并作检测。用提纯蛋白免疫新西兰兔 ,制备抗HSP70多克隆抗体 ,测定其活性 ,用此抗体作免疫组化法观察 41℃温热和吐温 80协同时BGC 82 3胃癌细胞及B16黑色素瘤细胞的热休克蛋白 70 (HSP70 )表达情况。结果 人基因重组构建的pETHSP73能很好地在大肠杆菌中表达出分子量为73kD的蛋白。两种提纯方法均能有效提取表达蛋白 ,用 3a3单抗作Westrnblot检测证明该蛋白具有人HSP70的抗原活性 ,所得蛋白氨基酸测定和N端测序的结果与有关报道一致。以此蛋白制成的抗体活性可达 1∶80 0 0以上。并可检测出吐温 80合并温热有明显抑制肿瘤细胞SHP70表达的作用。结论 2 .1kb的基因片段构建的高表达载体能很好表达人HSP73活性蛋白。该蛋白免疫新西兰兔所得多克隆抗体具有很高抗人和鼠HSP70活性。用该抗体免疫组化法检测表明吐温 80协同 41℃温热可明显抑制肿瘤细胞HSP70的表达和耐热性的产生。

基因重组人HSC73在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 用基因工程方法表达人的热休克类似蛋白 73 ( HSC73 )并提纯 HSC73蛋白 ,为研究该蛋白提供条件。方法 用人 HSC73基因构建原核细胞表达载体 p ETHSC73 ,在大肠杆菌 BL 2 1中用异丙基硫代 -β-D半乳糖苷 ( IPTG)诱导表达 ,ATP亲和层析法提取 HSC73。经 SDS-PAGE、3 .a.3抗体 Western blot作 ECL检测。结果 人HSC73基因构建的载体 p ETHSC73能很好地在大肠杆菌表达出分子量为 73 k D的蛋白 ,蛋白提取方法能有效提纯表达的蛋白 ,用 3 .a.3抗体作 Western blot检测证实该蛋白具有人 HSC73抗原特性。所得蛋白质氨基酸测定和 N端测序的结果与有关报道的一致。结论 人 2 .1kb的 HSC73基因片段构建的高表达载体能够很好表达人 HSC73 ,用 ATP亲和层析法可以有效提纯有活性的人