幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究

甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)是世界上重要的粮食、饲料和工业原料作物,作为生物反应器具有优势。幽门螺杆菌被世界卫生组织认定为一类致癌因子,其热休克蛋白(HSP)具有较强的免疫原性,存在着发展为疫苗成分的可能性。本研究构建了幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C植物表达载体,以根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转入4个甘薯品种诱导愈伤和再分化,通过PCR检测证明目的基因HspB-C已成功转化入甘薯品种南瑞苕中。

棉花粉蚧热休克蛋白基因的鉴定

热休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)是生物体或细胞受到热胁迫后新合成的一类遗传上高度保守的蛋白,在昆虫应对外界环境因子胁迫时起着重要作用。为了系统研究棉花粉蚧Phenacoccus solenopsis Hsp基因家族,对棉花粉蚧转录组基因注释信息进行分析、获得目标序列,并应用NCBI上Blast X等软件进行比对、共鉴定出24条热激蛋白(Hsp)基因,包括3个Hsp90、8个Hsp70、2个Hsp60和11个s Hsp(small heat shock protein,s Hsp)基因。对棉花粉蚧与模式昆虫家蚕Bombyx mori、黑腹果蝇Drosophila melanogaster、赤拟谷盗Tribolium castaneum系统进化关系分析显示,昆虫的小分子量热休克蛋白s Hsp具有很强的种属特异性,Hsp70家族的保守性比s Hsp强。棉花粉蚧热激蛋白基因的鉴定为深入研究该虫Hsp与生长发育、抗逆境的相互关系奠定了基础。

实验性脑梗塞(MCAO)模型大鼠热休克蛋白基因表达的动态观察

采用分子杂交技术观察了实验性脑梗塞大鼠缺血区皮质、纹状体、海马的HSP70mRNA转录水平的动态变化 ,从基因水平探讨了急性脑缺血发生发展的病理规律及机制。结果提示 :皮质、纹状体HSP70mRNA在大脑中动脉梗塞后 1h、3h、6h、2 4h和 4 8h显著表达 ,海马仅 2 4h和 4 8h显著表达 ,表明HSP70mRNA表达与脑梗塞关系非常密切。如果能针对性改变这些基因的表达 ,以提高机体对损伤的耐受能力 。

急性高温胁迫对翘嘴鳜幼鱼抗氧化酶和消化酶活性及热休克蛋白基因表达的影响

【目的】从抗氧化酶和消化酶活性及热休克蛋白基因表达层面明确高温胁迫对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)幼鱼生长及应激生理响应的影响,为实际生产中翘嘴鳜幼鱼培育提供可靠的参考依据。【方法】对2月龄翘嘴鳜幼鱼进行96 h的急性高温胁迫,通过预试验测试高起始致死温度(96 h-UILT50),采用突变升温方法设常温对照组(26.0℃)和急性高温胁迫组(36.0℃),分别于胁迫0、6、12、24、48和96 h后取样,使用生化试剂盒测定抗氧化酶和消化酶活性,并以实时荧光定量PCR检测热休克蛋白基因(HSP70α和HSP90α)的表达情况。【结果】翘嘴鳜幼鱼死亡率随水温的升高不断上升,其96 h-UILT50为36.22℃。在96 h的急性高温胁迫过程中,翘嘴鳜幼鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性呈降低—升高—降低的变化趋势,谷丙转氨酶(GPT)活性及丙二醛(MDA)含量则表现出升高—降低—升高的变化趋势;在消化酶方面,翘嘴鳜幼鱼胃蛋白酶和肠道淀粉酶(AMS)活性呈降低—升高—降低的变化趋势,而肠道脂肪酶(LPS)活性呈升高—降低—升高的变化趋势。在急性高温胁迫过程中,翘嘴鳜幼鱼HSP70α基因相对表达量呈升高—下降的波动式变化趋势,于胁迫12 h时达最高值,在胁迫48 h时出现第2个峰值;HSP90α基因表达呈先升高后降低的变化趋势,于胁迫24 h时上调至最高值;但至胁迫96 h时HSP70α和HSP90α基因的相对表达量仍显著高于对照组翘嘴鳜幼鱼(P<0.05)。【结论】急性高温胁迫对翘嘴鳜幼鱼抗氧化酶和消化酶活性及热休克蛋白基因表达产生显著影响。其中,热休克蛋白基因HSP70α和HSP90α参与高温胁迫应答过程的生理调节,以应对高温胁迫对肝脏细胞的损伤,故可作为高温胁迫应答的标志物。

家蚕热休克蛋白基因Bmhsp19.9启动子的活性分析

通过PCR扩增出家蚕(Bombyxmori)热休克蛋白基因Bmhsp19.9启动子的序列,TA克隆后进行序列测定,并构建重组载体进行瞬时表达。结果显示,该基因序列长为1 258 bp,具有典型的热激蛋白启动子的结构特点;序列分析显示,hsp19.9启动子区域可形成潜在的复杂茎环结构,推测其与启动子的功能有关。瞬时表达试验结果显示,hsp19.9的启动子能通过热诱导在家蚕BmN细胞和家蚕组织中驱动红色荧光蛋白报告基因(DsRed)瞬时表达,表明所克隆的hsp19.9启动子序列具有热休克蛋白基因的启动子活性。

多溴联苯醚-47对淡水背角无齿蚌热休克蛋白基因表达的影响

为了探讨多溴联苯醚-47(PBDE-47)对背角无齿蚌(Anodonta woodiana)慢性毒性效应,克隆了背角无齿蚌热休克蛋白基因(AwHSP60),分析基因全长、开放阅读框、编码、氨基酸。研究发现AwHSP60具有HSP60家族的标签序列;荧光定量PCR分析表达显示,AwHSP60基因广泛分布于斧足、鳃、肝胰脏、闭壳肌、心脏、血淋巴和外套膜,PBDE-47处理后肝胰脏中AwHSP60 mRNA水平在第1-15天显著性增加了89.9%,鳃中AwHSP60 mRNA水平显著性增加了2.09倍,血淋巴中AwHSP60 mRNA水平显著性增加2.13倍。结果表明,背角无齿蚌上调AwHSP60表达有助于增强动物对PBDE-47处理的耐受能力。

鸡毒害艾美耳球虫小热休克蛋白基因EnsHsp20的克隆表达与蛋白定位

克隆、表达毒害艾美耳球虫小热休克蛋白基因EnsHsp20,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫子孢子的总RNA为模板,用RT-PCR扩增EnsHsp20基因后,连接至pGEM-T Easy载体;测序后构建pET28a(+)-EnsHsp20表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3);经双酶切和测序鉴定后,将重组菌诱导表达;表达产物经Western-blot鉴定、纯化与复性后,免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗rEnsHsp20多克隆抗体;利用多克隆抗体,分别用Western-blot和间接免疫荧光试验检测子孢子和第2代裂殖子中EnsHsp20的天然蛋白及其定位;最后,应用qRT-PCR分析EnsHsp20基因在未孢子化卵囊、子孢子和第2代裂殖子中的转录水平。结果显示,该基因全长549 bp,编码183个氨基酸,预测分子质量为20.3 ku;重组蛋白主要以包涵体形式存在,可以被6×His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫、抗柔嫩艾美耳球虫、抗堆型艾美耳球虫和抗巨型艾美耳球虫的阳性血清识别;在第2代裂殖子中检测到EnsHsp20的天然蛋白,分子质量约为36 ku;EnsHsp20蛋白定位在子孢子和第2代裂殖子的细胞膜或细胞质;EnsHsp20基因在子孢子中的转录水平极显著高于第2代裂殖子和未孢子化卵囊(P<0.01)。本研究结果为进一步探析EnsHsp20蛋白在虫体入侵与生长发育中的作用奠定了基础。

人肝细胞癌及其配对非癌肝组织、正常肝组织中热休克蛋白Hsp90基因mRNA水平的分析

为定量分析和比较 2 2对人肝细胞癌 (HCC)及其配对非癌肝组织 (PNL)和 2例正常肝 (NL)组织中热休克蛋白Hsp(heatshockprotein) 90基因mRNA的表达水平 ,用狭缝杂交法检测hsp90 βmRNA的表达 ;并进一步用以特异性复合cRNA为内参照的定量RT PCR法对hsp90α和hspβmRNA的表达进行分析比较 .狭缝杂交结果显示 ,hsp90 βmRNA在 1 3例 ( 59 1 % )PNL中的表达平均升高至NL的 1 87倍 ;在 2 1例 ( 95 5% )HCC中的表达平均升高至NL的 3 45倍 ;在 2 0例 ( 90 9% )HCC中的表达平均升高至PNL的 2 75倍 .以cRNA为内参照的mRNA定量RT PCR结果显示 ,hsp90αmRNA在1 8例 ( 81 8% )PNL中的表达平均升高至NL的 3 0 6倍 ;在全部 2 2例HCC中的表达平均升高至至PNL的 2 0 8倍和NL的 5 1 0倍 .hsp90 βmRNA仅在小部分 ( 8例 ,36 4% )PNL中的表达轻度升高至NL的 1 2 7倍 ,而在全部 2 2例HCC中的表达显著升高至PNL的 2 95倍和NL的 2 52倍 .hsp90α和hsp90 β可能分别在人HCC发生、发展的不同阶段发挥不同的作用 ;以cRNA为内参照的定量RT PCR法是较狭缝杂交法更为灵敏、准确和快捷的mRNA定量分析方法 .

热休克蛋白70-2基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨热休克蛋白70-2（＋1538A/G）基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析技术检测261例2型糖尿病患者（其中糖尿病肾病组130例，糖尿病非肾病组131例）和129例健康对照组的热休克蛋白70-2（＋1538A/G）基因多态性。结果糖尿病肾病组、糖尿病非肾病组和健康对照组间热休克蛋白70-2（＋1538A/G）基因型和等位基因分布均无统计学差异（均P＞0.05）；与AG基因型组相比，GG基因型组舒张压水平较低，而HDL-C较高（均P＜0.05）。二元logistic回归分析进一步显示GG基因型是舒张压增高的保护因素，OR值为0.331（95%CI 0.111~0.983， P＜0.05）。结论 HSP70-2（＋1538A/G）基因多态性与2型糖尿病肾病的易感性无相关关系，但GG基因型是2型糖尿病患者舒张压增高的保护因素，同时还可能影响HDL-C水平。

企鹅珍珠贝热休克蛋白70基因的克隆与序列比较分析

采用同源克隆和锚定PCR技术,从企鹅珍珠贝Pteria penguin中克隆到热休克蛋白hsp70基因的cDNA全序列。cDNA全长2 308 bp,3’非编码区域(UTR)为234 bp,5’UTR为118 bp,开放阅读框(ORF)为1 956 bp,编码651个氨基酸,分子量为70.97 kd,理论等电点为5.24,有2个糖基化位点:NKSI和NVSA,并含有HSP70家族的3个签名序列:IDLGTTYS,DLGGGTFD和IVLVGGSTRIPKIQK,以及C末端的保守序列EE-VD。结合BLAST分析的结果,可以确认获得的cDNA序列为企鹅珍珠贝HSP70的编码序列。与合浦珠母贝Pinctada fucata hsp70的氨基酸序列相比,企鹅珍珠贝多1个糖基化位点NVSA,少1个氨基酸,包括1个氨基酸插入和2个缺失。两者的氨基酸序列一致性高达92%,突变位点52个;两者的核苷酸序列一致性高达79%,突变位点416个。系统发育分析表明两者的亲缘关系最近,与传统分类相符,然后与太平洋牡蛎等聚合在一起。该基因的克隆和比较分析为进一步深入研究珍珠贝类的抗逆机理、抗性育种及其进化具有重要意义。

美金胺对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70基因表达的影响

近来报道非竞争性NMDA受体拮抗剂美金胺 (Memantine)对缺氧缺血损伤 (HI)具有脑保护作用。在对HI新生大鼠先行进行了HSP70基因表达的研究基础上 ,对新生大鼠在HI前后对照应用美金胺 ,通过观察HSP70基因表达的变化 ,进一步从分子水平评估美金胺的脑保护效果。结果显示 ,HSP70mRNA在正常情况下仅有极微弱表达 ,HI后可引起其表达明显增加。应用美金胺后 ,其HSP70基因表达虽较正常对照组增高 ,但显著弱于HI组 ,提示美金胺的应用具有一定的脑保护作用 ,可能减轻了HI的脑损伤 ,因而使作为一种敏感的脑缺氧缺血标志的HSP70基因的表达降低。数据显示美金胺在HI前应用较之HI后应用似有更明显的脑保护效果 ,尽管统计显示其差异无显著性意义。结合已完成的脑病理研究和病理量化评分 ,初步证实美金胺作为较安全有效的NMDA受体离子通道非竞争性拮抗剂 。

人热休克蛋白72基因的克隆、原核表达与纯化

目的 克隆人热休克蛋白 72 (HSP72 )基因 ,原核表达并纯化蛋白产物 ,以探讨其生物学功能 .方法 从热休克的人肝癌细胞株 SMMC- 772 1中 ,用 RT- PCR方法扩增得到HSP72基因并克隆到原核表达载体 p QE- 30中 ,在大肠杆菌JM10 9中用 IPTG诱导下表达的蛋白经 FPL C梯度洗脱和Sephacryl S2 0 0凝胶过滤纯化 ,经 SDS- PAGE电泳后转印到NC膜上 ,用 anti- HSP72单抗作探针 ,进行 Western blot鉴定 .结果 克隆的基因序列分析结果与有关报道一致 ,所构建的 p QE- 30 HSP72载体在大肠杆菌中表达出与预期大小相符的 Mr为 72 0 0 0的蛋白 ,经鉴定确系 HSP72蛋白 .结论 克隆了人 HSP72基因 ,并对该基因进行了原核表达与纯化 。

家蚕热休克蛋白70家族基因的染色体定位及表达特征

热休克蛋白70家族(Hsp70)是非常保守的蛋白家族,每个物种的Hsp70家族都有多个成员,每个成员都可能具有特殊的功能。为了能够对家蚕Hsp70家族各成员进行科学命名和了解其特有的功能,分析家蚕Hsp70家族成员的编码基因及其在染色体上的定位,并通过实时荧光定量PCR方法检测这些基因在5龄第3天幼虫中肠、脂肪体和丝腺组织中的转录表达情况。家蚕诱导型Hsp70家族成员Bmhsp70A和Bmhsp70B的编码基因集中分布在第27号染色体上,有多个拷贝;组成型Bmhsp70家族成员的编码基因则分布在不同的染色体上,一般仅有1个拷贝。家蚕Hsp70家族基因中有10个能转录并翻译蛋白质产物的成员,还有1个能正常转录但不能正确翻译的假基因。实时荧光定量PCR结果表明:在常温(25℃)条件下,组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-4和Bmhsc70-3的表达水平较高,而其它基因成员的表达水平则相对较低,诱导型Bmhsp70家族基因成员在常温下也有一定程度的基础表达;40℃热激2 h后,Bmhsp70家族所有基因的表达水平都有所升高,其中诱导型Bmhsp70家族基因Bmhsp70B和Bmhsp68的转录表达上升水平远高于组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-3和Bmhsc70-4。不同表达类型的家蚕Hsp70家族基因成员在5龄幼虫中肠、丝腺和脂肪体中的表达情况不同,热激2 h后的表达变化规律也不完全相同,提示家蚕Hsp70家族成员具有各自特殊的功能。

热休克蛋白70-hom基因+2437(T/C)位点基因多态性与肺癌的关系

目的：研究热休克蛋白（HSP）70-hom基因＋2437（T／C）单核苷酸多态性与肺癌遗传易感性的关系，探讨肺癌易感的HSP70一hom基因型。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测159例肺癌患者和202名正常对照人群HSP70-hom基因＋2437（T／C）位点多态性，采用病例一对照研究分析其与肺癌的关系。结果：病例组与对照组之间HSP70．hom各基因型（TT、TC和CC）频率及T和c的等位基因频率分布，差异均有统计学意义（P〈0．05）。对病理类型分层分析并经年龄、性别、吸烟状况、饮酒史和肿瘤家族史调整后发现，非TT基因型携带者患肺鳞癌危险性是TT基因型携带者的2．17倍（95％CI：1．17～4．00）。对吸烟状况进行分层分析并经年龄、性别、饮酒史、肿瘤家族史调整后发现，吸烟者及重度吸烟者中非TT基因型调整OR值分别为5．19（95％CI：1．57～17．19）和9．23（95％CI：2．52～33．84），与肺癌有强关联，提示TT基因型是吸烟者特别是重度吸烟者的保护因素。结论：HSP70一hom基因＋2437（T／C）位点TT基因型可能是肺鳞癌的遗传保护因素，并可降低吸烟者特别是重度吸烟者患肺癌的危险度。

鸡热休克蛋白70基因克隆、单核苷酸多态性检测及生物信息学分析

试验旨在克隆鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因,获得基因序列并分析基因结构和相关遗传变异,检测单核苷酸多态性(SNP)位点在文昌鸡和北京油鸡群体中的分布。试验利用PCR扩增鸡HSP70基因组序列,通过克隆测序寻找基因中的突变位点。在鸡HSP70基因组中共发现3处突变位点,分别位于启动子区(T-564C)、5′非翻译区(A-68G)和编码区(A-1044G)。使用PCR-RFLP方法检测T-564C位点后发现,等位基因C在文昌鸡和北京油鸡中的基因频率分别为0.87和0.55。利用生物信息学分析发现,鸡HSP70基因启动子区域存在一些潜在的转录因子结合位点,如Sp1、AP-1、GATA-1、CREB、MZF1和HSF2等。

热休克蛋白70(hsp70)基因对利什曼原虫中国分离株的系统发育分析

目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并构建系统发育树,同时与国外利什曼原虫分离株的hsp70序列共同分析,观察利什曼原虫中国分离株在世界范围利什曼原虫的系统发育和分子进化中的地位。结果中国各流行疫区利什曼原虫均获得约1 300bp长度的hsp70基因片段,存在丰富的多态位点。中国23株利什曼原虫经hsp70基因分型聚集为四群,其中人来源的原虫分离株均在A群,为杜氏利什曼原虫(L.donovani),并分为杜氏利什曼原虫指名亚种(L.donovani)和杜氏利什曼原虫婴儿亚种(L.infantum)两个亚支;分离自新疆沙鼠或白蛉的6株利什曼原虫聚在B群,为都兰利什曼原虫(L.turanica);分离自新疆白蛉和内蒙古沙鼠的两株利什曼原虫为C群沙鼠利什曼原虫(L.gerbilli);分离自内蒙古蜥蜴和新疆白蛉的两株原虫为D群蜥蜴利什曼原虫(Sauroleishmania)。结论利什曼原虫中国分离株属于利什曼原虫亚属的不同种和蜥蜴利什曼原虫亚属,我国利什曼原虫分离株的种系发育复杂多样。

两个奥利亚罗非鱼群体热休克蛋白70基因序列比对分析

采用RACE技术,对两个奥利亚罗非鱼群体(Oreochromis aurea)(美国奥利亚和中国奥利亚)热休克蛋白Hsp70基因完整编码区(code sequences,CDS)cDNA的进行克隆测序。序列分析结果表明:两个奥利亚罗非鱼群体热休克蛋白Hsp70基因CDS序列完全相同,全长1 923 bp,编码640个氨基酸,相对分子质量为70.29×103,理论等电点5.462,均具有Hsp70家族的3个签名序列:IDLGTTYS、IFDLGGGTFD、VVLVGGSTRIPKIQK;核定位信号标签KRKHKKDISQNKRALRR;Dank特征基序DLGTT-S-V;胞质Hsp70特征基序EEVD;靠近C端的GGMP4肽序列;2个糖基化位点NKSI和NVSA。对所得基因序列与已发表的青锵(Oryzias latipes)等物种Hsp70基因的氨基酸序列进行同源性比较,发现两个奥利亚罗非鱼群体与莫桑比克罗非鱼最高99.4%,与牙鲆最低83.9%;系统进化树分析表明奥利亚罗非鱼的Hsp70 cDNA序列与青鳉等物种的Hsp70基因聚在一支,而与牙鲆的Hsp70基因相分离。

热休克蛋白70(HSP70)基因在中国对虾染色体上的定位

以热休克蛋白70(HSP70)基因为探针,利用荧光原位杂交(FISH)的方法,将其初步定位在中国对虾(Fennerope-naeus chinesis)染色体上。观察150组精巢细胞染色体,有111组染色体有3个杂交信号,占所观察的74％,由此得出,热休克蛋白70基因(HSP70)很可能存在于中国对虾减数分裂细胞3对染色体的3个位点上。本研究首次将功能基因定位在了对虾染色体上,为中国对虾的遗传物理图谱的构建提供了有效可行的方法。

急性热应激对山羊血液生化指标及血淋巴细胞热休克蛋白70家族基因表达的影响

旨在研究急性热应激对山羊抗氧化能力、免疫功能和血淋巴细胞热休克蛋白70(HSP70)家族基因表达的影响。本试验选取5只健康、体况接近的(12±0.5)月龄波尔山羊×关中奶山羊杂交F1母羊,饲养于环控舱内(温度维持20℃,相对湿度60%),适应5d。第6天利用环控舱对5只试验羊进行38℃急性热应激处理12h,采集热应激前(0h,20℃)和热应激后2、4、8和12h试验羊血样。分别利用比色法测定血清抗氧化指标(总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量),ELISA法测定血清免疫指标(免疫球蛋白和细胞因子含量),实时荧光定量PCR法测定血淋巴细胞HSP70家族基因(HSPA1A、HSPA6和HSPA8)mRNA的表达量。结果显示:1)热应激时间对血清抗氧化指标有显著影响。与热应激前0h相比,血清T-AOC(P<0.05)、SOD(P<0.05)和GSH-Px(P<0.01)活性均在热应激8h后显著下降,MDA含量在热应激4h后显著增加(P<0.05)。2)热应激时间对血清免疫指标有显著影响。与热应激前0h相比,血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-2含量分别在热应激4、8、8和4h后显著增加(P<0.05);IL-4(P<0.01)、IgG(P<0.01)、IgM(P<0.01)和IgA(P<0.05)含量分别在热应激12、4、4和4h后显著下降。3)热应激时间显著提高血淋巴细胞中HSP70家族基因(HSPA1A、HSPA6和HSPA8)的表达量。HSPA1AmRNA表达量呈先升高后下降的趋势,在热应激4h时达到峰值,各检测时间点均显著高于应激前水平(P<0.01);HSPA6mRNA表达量在热应激2h时显著升高(P<0.01),4h后恢复到应激前水平(P>0.05);HSPA8mRNA表达量在热应激4(P<0.05)、8(P<0.01)、12h(P<0.01)时显著高于应激前水平。在本试验条件下,38℃急性热应激能够抑制山羊的免疫和抗氧化功能;提高血淋巴细胞HSPA1A、HSPA6和HSPA8基因的表达量,其中HSPA1A对热应激温度和时间更敏感,可作为山羊热应激早期的分子标志物。

急性冷应激对绵羊免疫功能和不同组织热休克蛋白70家族基因表达的影响

旨在研究急性冷应激对绵羊免疫功能和不同组织热休克蛋白70(HSP70)家族基因表达的影响。本研究选取8只健康、体况接近的(12±0.5)月龄小尾寒羊×湖羊杂交F1母羊,单笼饲养于保温舍内(风寒温度(-7.14±2.53)℃),适应7 d。第8天将母羊移置舍外(风寒温度(-27.40±3.12)℃)急性冷应激12 h,采集冷应激前后试验个体血样和组织样。利用ELISA法测定血清免疫指标(细胞因子和免疫球蛋白G含量),通过实时荧光定量PCR法测定不同组织(肝、肾、脾、心、背最长肌和十二指肠)HSP70家族基因(HSPA1A、HSPA6和HSPA8)和热休克转录因子1基因(HSF1)的表达量。结果显示:1)与冷应激前相比,冷应激后试验羊血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL^-1β)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)浓度显著升高(P<0.05);血清白细胞介素-4(IL-4)和免疫球蛋白G(IgG)浓度显著下降(P<0.05)。2)冷应激后,试验羊HSPA1A mRNA表达量在肝、肾、心和背最长肌中显著升高(P<0.05);HSPA6 mRNA表达量在心和背最长肌中显著升高(P<0.05);HSPA8 mRNA表达量在背最长肌中显著升高(P<0.05),在脾和十二指肠中显著下降(P<0.05);HSF1 mRNA表达量在肝、心和背最长肌中显著升高(P<0.05),在脾和十二指肠中显著下降(P<0.05)。在本试验条件下,急性冷应激能抑制绵羊的免疫功能;HSP70家族基因(HSPA1A、HSPA6和HSPA8)在各组织中的表达水平不同,其中HSPA1A对温度更敏感,宜作为绵羊冷应激的生物标记物;肝、心和背最长肌等组织中HSP70家族基因表达量升高可能与其保护组织细胞维持正常产热有关。