热休克蛋白90在HBV复制中的作用

HBV传播范围广,慢性感染状态多,治愈率低,提高HBV治愈率有助于改善患者的长期预后状况。热休克蛋白90(Hsp90)是广泛存在于生物体内的一种分子伴侣蛋白。近年来越来越多的研究表明,Hsp90与HBV感染有关,在HBV的复制过程中起重要作用,可与病毒的特定蛋白相互作用促进病毒复制,也可与宿主自身蛋白相互作用来发挥功能。本文就近年来Hsp90在HBV复制中的作用相关研究进展作一综述,以期为以Hsp90为靶点的抗HBV药物研发与HBV防治提供新的理论指导和方向。

热休克蛋白90的生物学功能及应用的研究进展

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是一类在生物进化上高度保守,并广泛分布于正常状态原核及真核生物中的蛋白质。根据分子质量的不同,热休克蛋白可分为HSP100、HSP90、HSPp70、HSP60和小HSP五大家族,与其他HSP不同,HSP90作用的底物蛋白广泛参与了细胞周期和信号传导等重要过程[1]。

卵黄蛋白原的性质及热休克蛋白90对其合成代谢的调控

卵黄蛋白原(VTG)广泛存在于卵生脊椎动物和无脊椎动物的卵母细胞中,为卵母细胞的生长和胚胎的发育提供营养。VTG一般在卵巢、肝胰脏和(或)脂肪等组织中合成。VTGcDNA具有较强的保守性,为7 kB左右。VTG具有单体、二聚体等多种形式,其中二聚体有同源二聚体和异源二聚体两种形式。脊椎动物体内,热休克蛋白90(HSP90)通过和雌激素受体结合间接诱导VTG的合成,近年来的研究报道表明HSP90同样对无脊椎动物体内VTG合成也具有诱导作用,但其作用机制有待进一步研究。

非小细胞肺癌患者血清热休克蛋白90α的临床意义研究

目的了解非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)的临床意义。方法选取2013年1月—2014年5月,在郑州大学第一附属医院中西医结合内科、胸外科及呼吸内科接受住院治疗的NSCLC患者80例为肺癌组;另选取同时期在郑州大学第一附属医院进行体检的健康成年人30例为对照组。比较并分析两组血清HSP90α水平;比较不同肿瘤分期(TNM分期)患者血清HSP90α水平,探讨TNM分期与血清HSP90α水平的相关关系;根据中医辨证结果对肺癌组进行中医分型,比较不同中医分型患者的血清HSP90α水平。结果对照组与肺癌组血清HSP90α水平比较,差异有统计学意义(t=16.02,P<0.05)。不同TNM分期患者的血清HSP90α水平比较,差异有统计学意义(F=14.98,P=0.00);Spearman秩相关分析显示,TNM分期与血清HSP90α水平呈正相关(rs=0.42,P<0.01)。不同中医分型患者的血清HSP90α水平比较,差异有统计学意义(F=4.22,P<0.01)。结论NSCLC患者的血清HSP90α水平较健康成年人高,TNM分期较高的患者,其血清HSP90α水平也较高。血清HSP90α水平可以反映NSCLC患者正邪、虚实的转变,有望成为其中医辨证论治的客观依据,可作为NSCLC患者的肿瘤标志物,在预测疾病的发生、发展方面具有较高的临床意义。

肝细胞癌热休克蛋白27,70,90_α的表达意义

目的探讨HSP27,HSP70和HSP90α在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法采用免疫组化技术对44例HCC和癌旁组织中HSP27,HSP70和HSP90α的表达进行检测结果 HCC和癌旁组织中HSP27阳性率分别为18％和30％,HSP70阳性率分别为68％和27％,HSP90α阳性率分别为63％,和23％.HCC中HSP70和HSP90α阳性率明显高于癌旁组织(x_1~2=7.3,x_2~2=7.8,P<0.01.而HSP27阳性率变化不大(X^2=1.6,P>0.05).HSP70和HSP90α在分化较好和分化不良的HCC中的阳性率分别为54％,85％和50％,80％,两者相比差异显著(X_1~2=4.5,X_2~2=4.2,P<0.05),但与癌周淋巴细胞浸润(X_1~2=3.2,X_2~2=1.4,P>0.05)和转移(X_1~2=2.3,X_2~2=2. 7,P>0.05)无关结论 HCC是HSP70和HSP90α高表达肿瘤.HSP70和HSP90α与HCC分化有关,在HCC发生和发展中起重要作用.

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.3转染细胞,第4 d提取HBV核心颗粒,Southern Blot检测HBV复制中间体,ELISA检测上清HBsAg的表达。结果 17-AAG能够下调HepG2细胞PAI-1的表达,HepG2细胞内HBV复制中间体表达水平明显降低,HBsAg的表达亦受到抑制,但上调或阻断TGFβ信号通路对HBV复制影响不明显。结论 HSP90参与肝细胞内TGFβ信号通路的活化,其抑制剂17-AAG能够抑制HBV的复制与蛋白表达,但该抑制作用与TGFβ信号通路活化无关。

热休克蛋白及其生物学功能(文献综述)

热休克蛋白 (HSP)是一组糖蛋白 ,作为分子伴侣参入蛋白质的合成、折叠、装配、运输和降解等过程 ,具有多种生物学作用。本文着重对HSP的一般概念。

L-4F抑制低密度脂蛋白对热休克蛋白90的影响

目的探讨L-4F(一载脂蛋白A-I类似物)能否抑制低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)对热休克蛋白90(heatshockprotein90,hsp90)与内皮一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,eNOS)结合的影响和LDL诱导的脂质氢过氧化物产生的增加。方法采用牛主动脉内皮细胞(bovineaorticendothelialcells,BAEC)进行细胞培养,用LDL6.2mmol/L和/或L-4F10μg/ml处理细胞24小时,然后,①分对照、L-4F、A23187(钙离子导体)、L-4F+A23187、LDL、LDL+L-4F、LDL+A23187、LDL+A23187+L-4F8组,用免疫沉淀法测定磷酸化内皮一氧化氮合酶(phosphorylationofeNOS,P-eNOS)、eNOS和hsp90的表达和结合情况;②用Auerbach法测定有BAEC和无BAEC情况下LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生情况。结果①LDL减少A23187刺激状态下的BAEC的hsp90与eNOS的结合,而经L-4F预处理的LDL对hsp90与eNOS结合无抑制作用;②在无BAEC情况下,L-4F稍微抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生,然而在BAEC培养情况下,L-4F可以明显抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生。结论L-4F可以阻止LDL对hsp90与eNOS结合的抑制,并可能与L-4F抑制脂质氢过氧化物的产生有关,这可能是L-4F保护内皮细胞功能、抑制动脉粥样硬化形成的一个重要机制。

^(131)Ⅰ标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素的方法学研究

目的:建立131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)的方法,探讨其标记条件。方法:采用放射性碘标记氯胺-T法标记17-AAG,并研究其在ICR正常小鼠体内的生物分布。结果:131I氯胺-T法标记17-AAG的最佳条件为:17-AAG乙醇溶液40μl(含17-AAG 5μg),0.5 mol.L-1磷酸盐缓冲液50μl(pH7.5),Na131I溶液20μl,氯胺-T30μg.(15μl)-1(用pH7.5的0.05 mo.lL-1PB溶解),25℃反应50 s,偏重亚硫酸钠40μg.(20μl)-1(用pH7.5的0.05 mo.lL-1PB溶解)中止反应。标记率约为53.1%,经乙酸乙酯纯化后所得标记物的放射化学纯度>90%;其生理盐水溶液4℃放置5 d,放射化学纯度大于90%。小鼠尾静脉注射131I-17-AAG后0.5 h131I-17-AAG在胆囊达到高峰(369.44±147.81)%ID.g-1,肝脏中仅有(2.23±0.50)%ID.g-1,说明对肝脏毒性小。结论:热休克蛋白90抑制剂17-AAG的标记方法操作简便,反应时间短。

共伴侣分子Cdc37从人热休克蛋白90复合体解离中ATP的作用机制

目的探讨ATP导致共伴侣分子细胞分裂周期蛋白37(Cdc37)从人热休克蛋白90(HSP90)复合体解离的可能机制,为抗肿瘤新药研发提供理论依据。方法用免疫共沉淀法(IP)捕获人组织淋巴瘤细胞(U937细胞)中HSP90复合体后,进行以下实验:(1)用流式细胞术(FCM)检测经过ADP、17-烯丙基胺格尔德霉素(17-AAG)、亚胺二磷酸腺苷(AMPPNP)、ATP处理后HSP90复合体中的Cdc37含量,并分别与经二甲基亚砜(DMSO)处理的对照组进行比较,研究ATP导致Cdc37从HSP90复合体解离是单纯由ATP结合导致还是依赖ATP水解;(2)用FCM检测对照组及ATP处理后复合体中Cdc37和其他共伴侣分子中S期激酶关联蛋白1 G2等位基因抑制因子(Sgt1)、HSP70相互作用蛋白(HIP)、FK-506结合蛋白(FKBP5)、应激诱导蛋白1(STIP1)、热休克蛋白90腺苷三磷酸酶同系物1激活剂(AHSA1)的变化情况,并用IP-westernblot(IP-WB)进行验证,研究ATP导致Cdc37从HSP90复合体解离是否伴随其他共伴侣分子解离;(3)用IP-WB检测对照组及ATP处理组复合体中HSP90、Cdc37及共伴侣分子Sgt1的磷酸化水平;用FCM检测对照组、ATP组及蛋白激酶抑制剂组复合体中的Cdc37及Sgt1的含量。研究ATP导致Cdc37从HSP90复合体解离是否伴随HSP90、Cdc37及其他共伴侣分子磷酸化。结果与对照组相比,ATP处理后HSP90复合体中Cdc37含量显著下降,而ADP、AMPPNP及17-AAG处理对Cdc37无影响;HSP90复合体中加入ATP导致复合体中Cdc37解离,伴随复合体共伴侣分子Sgt1含量降低;HSP90复合体中加入ATP后,复合体中Cdc37、Sgt1磷酸化水平显著增加。而在HSP90复合体中加入蛋白激酶抑制剂后,会阻断ATP导致的Cdc37及Sgt1与复合体解离。结论HSP90复合体中ATP导致Cdc37解离的可能机理是:(1)ATP结合HSP90导致该复合体构象改变;(2)ATP导致Sgt1与该复合体解离,且在这个过程中伴随Cdc37与Sgt1的磷酸化增加。特异性抑制Cdc37和HSP90结合,是抗肿瘤新药研究的方向之一,研究Cdc37与HSP90解离机制是此类药物开发的基础。

热休克蛋白90抑制剂研究进展

热休克蛋白90(HSP90)抑制剂能够抑制HSP90,促使在肿瘤生长信号通路中起重要作 用的HSP90效应蛋白通过泛素化降解,从而阻断肿瘤增殖生长信号通路的多个靶点,有效阻止肿瘤 的生长。现综述近年来有关HSP90抑制剂在肿瘤治疗方面的研究进展。

胞外热休克蛋白90作为肿瘤标志物的研究进展

热休克蛋白90是生物体内重要的分子伴侣蛋白，在细胞面对各种刺激如高热、缺氧等情况时，热休克蛋白表达升高进而维持客户蛋白结构和功能的稳定，保护细胞避免来自应激物的攻击。当前越来越多的研究表明胞外热休克蛋白90在肿瘤的侵袭和远处转移中起到重要作用。

热休克蛋白90通过蛋白激酶B通路在局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用机制研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用机制及丹参多酚酸盐干预的影响。方法采用线栓法制作SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型。选用健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、抑制剂组、丹参多酚组及联合组,每组15只。对照组仅暴露左颈总动脉及颈内外动脉后缝合皮肤。模型组建立缺血再灌注模型,抑制剂组、丹参多酚组及联合组分别于建立缺血再灌注模型后给予抑制剂、丹参多酚酸盐及抑制剂联合丹参多酚酸盐。比较各组脑梗死体积,Western blot法测定HSP90、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)变化。结果与模型组比较,对照组和丹参多酚组脑梗死体积明显减少,差异有统计学意义[0 mm3和(163.11±9.12)mm3 vs(268.92±14.36)mm3,P<0.05]。与联合组比较,抑制剂组脑梗死体积明显增加,差异有统计学意义[(237.13±11.11)mm3 vs(219.08±7.44)mm3,P<0.05]。与模型比较,对照组HSP90蛋白表达水平明显降低,丹参多酚组HSP90的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,对照组和抑制剂组p-Akt蛋白表达明显降低,丹参多酚组p-Akt蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与丹参多酚组比较,联合组p-Akt蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP90可能通过Akt/p-Akt通路在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用。

血清热休克蛋白90α对肝细胞癌经肝动脉化疗栓塞术后生存的预测价值

目的探讨术前血清热休克蛋白90α(HSP90α)水平对经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗的肝细胞癌患者术后生存时间的影响。方法回顾性分析2019年1月1日—2020年6月1日于西南医科大学附属医院肝胆外科接受单一TACE治疗的97例肝细胞癌患者的临床资料。以患者血清HSP90α水平的中位数作为临界值,将入组病例分为高水平组(HSP90α>135 ng/L,n=48)和低水平组(HSP90α≤135 ng/L,n=49)。计数资料2组间的比较采用χ^(2)检验。采用Kaplan-Meier法计算中位生存时间,组间比较采用log-rank检验。通过log-rank单因素分析及Cox回归多因素分析探索患者术后生存时间的影响因素。结果血清HSP90α高水平组与低水平组患者的肝功能Child-Pugh分级(χ^(2)=19.356,P<0.01)、肿瘤坏死(χ^(2)=9.964,P=0.002)、BCLC分期(χ^(2)=22.356,P<0.01)及ECOG评分(χ^(2)=6.644,P<0.05)比较,差异均有统计学意义。HSP90α高水平组患者的中位生存时间比低水平组短,差异有统计学意义(χ^(2)=15.551,P<0.01);HSP90α水平(HR=1.690,P<0.05)及BCLC分期(HR=2.373,P<0.05)均是肝癌患者TACE术后生存时间的独立影响因素。结论术前血清HSP90α水平是影响肝癌患者TACE术后生存时间的独立因素,有望成为评估经TACE治疗肝癌患者预后的潜在指标之一。

热休克蛋白90在胃癌患者外周血中的表达及其临床意义

本研究通过对比胃癌者和健康志愿者在血清热休克蛋白90(HSP90)含量方面的差异、评价血清HSP90胃癌诊断价值、分析胃癌患者血清HSP90表达与胃癌临床病理特征关系,以探讨HSP90对胃癌患者的诊断价值。结果发现胃癌组血清HSP90显著高于健康志愿者,工作特征曲线下面积0.754,约登指数最大值0.429,灵敏度80.00%、特异性62.86%,而血清HSP90与胃癌患者性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、浸润深度、组织分化、淋巴结转移等均无显著相关,由此可见,血清HSP90对于胃癌诊断有一定参考价值,但与肿瘤分期、转移度等无相关。

胆囊癌组织中热休克蛋白90α的表达及意义

目的:探讨热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)在胆囊癌组织中的表达及意义。方法:用免疫组织化学染色的方法测定HSP90α在48例胆囊癌及43例胆囊良性病变中的表达水平,并分析HSP90α与胆囊癌临床病理参数的关系。结果:热休克蛋白90α(HSP90α)在胆囊癌中的表达率为85.4%(41/48),明显高于其在胆囊良性疾病组织中的表达率32.6%(14/43),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。统计学分析示:HSP90α表达与胆囊癌组织的分化程度、临床分期有关(P<0.05),而与胆囊癌患者的性别、年龄及胆囊癌的组织学分型无关(均P>0.05)。结论:胆囊癌组织中HSP90α表达增高,提示其可能在胆囊癌发生、发展过程中起重要作用。

热休克蛋白90在特发性肺纤维化中的研究进展

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种病因不明的慢性、进行性、纤维性间质性肺炎。主要症状和体征包括呼吸困难、咳嗽、Velcro啰音和杵状指。患者的自然史差异很大,但肺功能下降会降低生活质量,并最终导致死亡,其诊断后的中位生存期仅为2~3年。IPF难以诊断,并且经常观察到症状发作和准确诊断之间的时间差异。近年来,IPF的发病率和患病率呈现上升趋势,可能归因于诊断的优化和人群的老龄化。由于IPF是一种致命性疾病,因此精确和早期诊断非常重要。有研究发现热休克蛋白90(Hsp90)有作为特发性肺纤维化生物标志物和治疗靶标的可能,主要是通过调节转化生长因子-β(TGF-β)信号传导通路,然而Hsp90是否可作为特发性肺纤维化的生物标志物以及治疗靶标需要进一步的研究证实。现对Hsp90在特发性肺纤维化中研究进展进行综述。

肺鳞状细胞癌组织热休克蛋白90的表达及其临床意义

[目的]探讨肺鱗状细胞癌组织中热休克蛋白90(HSP90)的表达,分析其表达与临床病理特征及预后的关系。[方法]选取2003~2013年在中南大学湘雅二医院胸外科手术切除的159例具有完整随访资料的肺鳞状细胞癌患者的癌组织和53例非癌对照肺组织的石蜡标本,制作高通量的组织芯片,采用免疫组织化学SP法检测组织样本中HSP90的表达,回顾性分析其表达水平与患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线分析HSP90不同表达水平与肺鳞状细胞癌患者总生存时间(OS)的差异。[结果]与非癌肺组织相比,肺鳞状细胞癌组织中HSP90的高表达率明显增高(P<0.05);临床冚期患者的HSP90表达水平高于临床Ⅰ〜Ⅱ期患者(P=0.010),淋巴结有癌转移的患者的HSP90的表达水平高于无淋巴结转移的患者(P=0.016),高表达HSP90的肺鳞状细胞癌患者总体生存率显著低于低表达HSP90的患者(P=0.002);Cox多因素风险回归分析发现,高表达HSP90的肺鳞状细胞癌患者预后比低表达HSP90患者差(P=0.042)。[结论]除临床分期及肿瘤的病理分级外,高表达HSP90可作为评估外科手术切除肺鳞状细胞癌患者预后差的独立分子标志物。