持续热应激状态下肉鸡心脏和肾脏组织损伤与hsp_(60) mRNA转录

为研究环境胁迫条件下热休克蛋白60 mRNA(hsp60mRNA)转录水平和应激性损伤的关系,将30日龄AA肉鸡的饲养环境温度从(22±1)℃突然升高到(37±1)℃分别热应激1、2、3、5和10 h后剖杀,利用临床血液病理学、组织病理学和荧光定量PCR方法,观察热应激不同时间对肉鸡重要器官心脏和肾脏组织损伤及其hsp60mRNA表达水平的影响。结果显示,持续热应激处理后的肉鸡血液肌酸激酶(CK)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)均显著升高,CK在2、3、5和10 h与对照组(无热应激)差异极显著(P<0.01),ALT在3 h与对照组差异显著(P<0.05),在5 h和10 h差异极显著(P<0.01);持续热应激处理2 h后的肉鸡心脏和肾脏组织均呈现出不同程度的以颗粒变性和水泡变性为主要特征的病理性损伤;心脏和肾脏组织中hsp60mRNA转录水平在热应激2 h时显著高于对照组(P<0.05),而在5、10h逐渐恢复正常。提示:hsp60mRNA转录水平与其相应蛋白的表达和肉鸡组织的热应激损伤存在一定程度的关联性。

热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

研究不同热休克条件对H22小鼠肝癌细胞的HSP70mRNA及蛋白表达的影响,以期获得最佳诱导条件.分别用MTT、RT-PCR、免疫荧光和FCM检测等方法观察不同热休克条件对鼠H22细胞的生存率、胞内HSP70mRNA转录水平及胞膜HSP70蛋白表达水平的改变.结果表明,H22细胞经轻度热休克(42～43℃),细胞生存率无影响,而中重度热休克(44～45℃)则随休克时间的延长,细胞生存率明显下降;42℃热休克初期(0.5～4小时)胞内HSP70mRNA水平低于对照组,休克后期(8～12小时)mRNA水平有所恢复并逐渐增高;不同时间热休克组H22细胞胞膜HSP70表达均较对照组显著增高(P<O.005),其中非致死性热休克以12小时表达最高,42℃为59.5%,43℃为96.8%.因此适当热休克条件可引起H22细胞HSP7OmRNA的改变及膜上HSP70蛋白表达的增加,从而增加肿瘤细胞的免疫原性.

敲低膀胱癌细胞热休克蛋白60(HSP60)通过上调乳酸脱氢酶A(LDHA)表达抑制人NKL细胞杀伤

目的探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平与膀胱癌患者预后的相关性。利用腺病毒载体构建HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系并与NKL细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。Western blot法检测膀胱癌细胞乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,试剂盒检测乳酸分泌。在HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系,利用小干涉RNA(siRNA)敲低或利用质粒过表达膀胱癌细胞中的LDHA,检测对NKL细胞杀伤能力的影响。利用线粒体活性氧探针MitoSOX检测线粒体活性氧(ROS)水平,Western blot法检测膀胱癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达,利用靶向线粒体抗氧化剂MitoEMPO及siRNA降低HSP60稳定干涉膀胱癌细胞中线粒体ROS及HIF-1α水平,探索HSP60表达降低促进LDHA表达的具体机制。结果膀胱癌组织HSP60蛋白的表达水平较癌旁组织显著降低,且HSP60表达越低的膀胱癌患者其预后越差;敲低HSP60蛋白表达可显著上调膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌,反之,过表达HSP60可显著抑制膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌;siRNA LDHA可显著增强HSP60敲低导致NKL细胞的杀伤抑制,同时过表达LDHA可显著抑制HSP60过表达导致NKL杀伤增强。此外,敲低膀胱癌细胞HSP60表达可通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达。结论敲低膀胱癌细胞HSP60表达通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达,抑制NK细胞的杀伤作用。

唐鱼热休克蛋白60基因cDNA克隆及表达

采用RT-PCR和RACE技术,成功克隆了唐鱼(Tanichthys albonubes)热休克蛋白60基因cDNA全长序列,命名为TaHSP60(GenBank登录号:HM234132)。研究表明:该基因序列全长为2 486bp,5'端非翻译区(URT)102bp,3'URT 656bp,开放阅读框(ORF)1 728bp,编码575个氨基酸。序列比对分析表明唐鱼HSP60与斑马鱼(Danio rerio)的相似性高达96.2%,与鲫(Carassius auratus)、褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)、大西洋鲑(Salmo salar)以及非洲爪蟾(Xenopus tropicalis)的相似性分别为93.2%、89.7%、88.3%和83.8%。Clustal X比对结果表明:该序列含有典型的mt-HSP60特征序列、ATP结合位点,以及C末端保守的重复区域GGM。进化分析结果表明,唐鱼HSP60与斑马鱼HSP60聚为一支,二者亲缘关系较近。荧光定量PCR显示唐鱼HSP60的mRNA在肝脏、肌肉、鳃、鳍条、眼睛、卵巢、肠道和脑等8种组织中均有表达,其中肝脏中表达量最高,而在鳃和鳍条呈微量表达。统计分析表明,其他各组织与肝脏相比均有显著差异。铜暴露后,唐鱼肝脏HSP70mRNA表达水平分别在48h和96h出现上调,均显著高于对照组。

流行性出血热尸检组织中热休克蛋白70mRNA的定位及分布

应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区３０例流行性出血热患者尸检组织中病毒ＲＮＡ及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ细胞内定位，同时观察了汉坦病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞中ＨＳＰ７０的表达情况。结果表明，热休克蛋白７０ｍＲＮＡ在多数组织中均可检测到，分布与病毒ＲＮＡ一致，并且与组织的病理损害有关；体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有ＨＳＰ７０的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。

窒息死大鼠心肌热休克蛋白60免疫组织化学研究

目的 研究窒息死亡大鼠心肌组织中热休克蛋白 6 0 (HSP6 0 )的表达情况。方法 用常规苏木精 -伊红染色方法与免疫组织化学方法对窒息死亡组与对照组SD大鼠心室肌组织中HSP6 0的表达情况进行检测分析。结果 窒息组大鼠心肌组织HSP6 0表达明显高于对照组 (P <0 .0 1)。

热休克蛋白60与冠状动脉粥样硬化关系的研究进展

新近研究表明冠状动脉粥样斑块的形成与进展都与免疫反应密不可分。已有研究发现在动脉粥样硬化（Atherosclerosis AS）中热休克蛋白60（HSP60）的表达高于普通人群,并且HSP60及其抗体升高的程度与冠状动脉血管的病变程度成正相关,由此可表明HSP60与冠心病相关。同时王治校等[1]的实验研究表明口服HSP60可能会抑制小鼠动脉粥样硬化斑块的形成,HSP60口服免疫耐受能诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞介导抗原特异性免疫耐受。本文就人热休克蛋白60对冠状动脉粥样硬化的关系作一综述。

热休克蛋白60和冠状动脉硬化症

近年来随着生活水平的提高，心血管疾病的发病率越来越高，对人类健康的危害已受到社会普遍关注，以往对该病病因学的研究仅局限于年龄、遗传、饮食和生活习惯等方面。近几年来发现，热休克蛋白60(HSP-60)和肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae，cp)感染与心血管疾病有关。人类HSP—60IgA抗体水平升高与肺炎衣原体感染和炎症同时存在时，是冠状动脉硬化的危险因素，

热休克蛋白60口服耐受对小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

探讨热休克蛋白60（HSP60）口服诱导的免疫耐受对ApoE-／-小鼠动脉粥样硬化斑块的影响。给予8周龄ApoE-／-小鼠分别口服重组鼠HSP60 PBS溶液（口服HSP60组）和单纯PBs（对照组），连续5d后高脂饲养12周。观察各组斑块面积；

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达的影响

目的研究异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP(热休克蛋白)70mRNA和HSP70蛋白的动态表达规律及其作用的影响。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交原理检测HSP70 mRNA,应用组织化学染色法检测HSP70蛋白。结果异丙酚使HSP70 mRNA的表达增强,时间延长(P<0·05);HSP70蛋白表达量显著增多(P<0·05)。结论异丙酚能显著促进脑缺血再灌注时HSP70的表达。提示异丙酚一方面发挥自身的神经保护作用,另一方面也可以通过诱导HSP70的合成而发挥神经保护作用。

严重烧伤早期肠黏膜组织热休克蛋白70的表达规律

目的探讨大鼠烧伤后早期肠黏膜组织热休克蛋白70(HSP70)的表达变化规律及其意义。方法采用大鼠烫伤模型,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Westernblot)及免疫组化等方法,检测伤后3、6、12、24和48h不同时间点肠黏膜组织内HSP70及热休克因子1(HSF1)的表达分布情况。结果烫伤后3h肠黏膜组织内HSP70mRNA及蛋白表达均显著增加,分别在伤后6h和12h达高峰,伤后48h仍高于正常对照组(P均<0.01);伤后3h大鼠肠黏膜组织HSF1出现一过性降低,伤后6h其表达显著高于正常对照组,并呈逐渐增加的趋势直至持续到伤后48h(P均<0.01)。结论严重烧伤早期肠黏膜组织HSP70及HSF1表达均显著增加,提示严重烧伤早期即可引起肠黏膜组织细胞的应激反应,可能与细胞的自我保护机制启动有关。

空肠弯曲菌HSP60家族成员的鉴定

用针对ＨＳＰ６０保守区的二株单抗ⅡＨ９和ＭＬ－３０进行了Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验，发现空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１株４３ｋＤ通道蛋白属ＨＳＰ６０家族成员，命名其为空弯菌ＨＳＰ４３。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描显示ＨＳＰ４３是主要菌体蛋白。虽然ＨＳＰ极端保守，但用ＣＪ－Ｓ１３ｌｌｙｓａｔｅ免疫小鼠后，发现最早诱导的抗体是针对ＨＳＰ４３的，并且这种抗体活性在随后８０ｄ的观察期间一直维持较高活性。此结果为研究感染诱致自身免疫病分子机理提供了新的线索。

热休克蛋白70在神经元可塑性中作用的研究进展

热休克蛋白（heat shock protein，HSP）是体内一族重要的蛋白质，不仅具有帮助蛋白质正确组装、折叠、转运的作用，也参与抑制凋亡，并与抗原提呈、甾体激素受体功能、细胞内运输、核受体结合有关。热休克蛋白包括小分子HSP家族、HSP60家族、HSP70家族、HSP90家族和HSP110家族，其中HSP70家族包括HSC70、

HSP70mRNA对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护性的研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护中的作用。 方法 根据病理组织学变化以及原位杂交法检测各组中不同灌注时间的热休克蛋白70mRNA(HSP70mRNA)的表达。 结果病理组织学肾小管评分IPC组均低于IR组(P<0.05),而IPC组和CON组之间差异无显著性(P>0.05);HSP70mRNA的表达IPC组明显高于IR组(P<0.01),并且在再灌注2h和6h时,该三者在IPC组中的表达明显高于CON组(P<0.01)。 结论 缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,其保护机制与HSP70的诱导合成增多有关。

运动诱导的大鼠心肌细胞HSP72 mRNA表达与超微结构改变

目的 :研究运动诱导的大鼠心肌细胞HSP72mRNA表达与大鼠心肌细胞超微结构改变的可能关系。方法 :将 36只SD大鼠随机分为安静对照组 (C)、1周运动组 (T1)、2周运动组 (T2 )和3周运动组 (T3)。安静对照组不运动 ,T1组、T2组和T3组以 75 %VO2 max强度进行跑台运动 ,分别运动 1周、2周、3周 ,每周运动 6天 ,每天 1小时。在末次运动结束后 2 4小时以RT -PCR法检测大鼠心肌细胞热休克蛋白 72mRNA的表达 ;以常规电镜检测观察大鼠心肌细胞超微结构的变化。结果 :①T1和T2组HSP72mRNA表达明显多于C组和T3组。②以C组心肌细胞电镜表现为正常 ,则各组大鼠电镜表现的心肌损伤程度为T1组 >T2组 >T3组。结果提示 :运动不同时期造成心肌损伤程度不同的原因可能与运动后心肌细胞HSP72mRNA表达量不同有关。HSP72mRNA表达可能为运动后心肌保护的分子机理。

急性创伤患者早期中性粒细胞热休克蛋白72的表达意义

目的探讨急性创伤患者应激早期各时间段中性粒细胞中热休克蛋白72(HSP72)含量及其编码基因表达与患者预后的相关性。方法随机选取收入重症监护治疗病房的急性生理学与慢性健康状况Ⅲ(APACHEⅢ)评分≥18分的患者30例,分离创伤后0-1d、2-6d和7-14d的中性粒细胞。应用免疫组化技术检测HSP72的蛋白表达,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP72mRNA表达水平,同时记录患者2个月的存活率。结果HSP72在急性应激后表达明显增强,表达高峰在2-6d,存活组HSP72的水平较死亡组明显升高。结论HSP72的蛋白和基因水平表达高峰在急性创伤后2-6d,其含量及表达与急性创伤患者2个月存活率存在相关性。

胃粘膜病变中HSP60的表达及其意义

目的 通过研究HSP60在不同病变胃粘膜中的表达,以探讨HSP60与胃癌发生之间的关系及其在胃癌发生、发展过程中的作用。方法 利用S-P免疫组织化学技术,对204例不同病变胃粘膜进行HSP60的检测。结果 HSP60在胃癌组织的表达以强阳性和中等强度阳性为主,阳性表达率为73.5％,过表达率为57.1％;与浅表性胃炎和胃粘膜糜烂及溃疡相比差异显著(P<0.01),与萎缩性胃炎及不典型增生相比差异不显著(P>0.05),但两者过表达率之比差异显著(P<0.05)。结论 不典型增生和胃癌组织中的HSP60表达显著高于浅表性胃炎和胃粘膜溃疡及糜烂组,胃癌组的HSP60过表达率显著高于萎缩性胃炎和不典型增生组,提示HSP60的过度表达发生在胃癌的进展过程中。