热休克蛋白A12A对内毒素血症肝损伤的作用及机制研究

目的:研究热休克蛋白A12A(heat shock protein A12A,HSPA12A)对内毒素血症肝损伤的影响及机制。方法:(1)采用脓毒症小鼠肝组织RNA测序的公共数据库,以生物信息学手段分析Hspa12a和多种载脂蛋白的mRNA表达变化。(2)采用6~8周龄Hspa12a基因敲除(Hspa12a knockout,Hspa12a-/-)鼠和野生型(wild type,WT)鼠,腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)5 mg/kg诱导内毒素血症,以生理盐水(normal saline,NS)注射小鼠为对照组,分为NS-WT组、NS-Hspa12a-/-组、LPS-WT组和LPS-Hspa12a-/-组;LPS作用6 h后,收集肝组织,HE染色观察肝脏组织病理变化;免疫印迹和RT-PCR分析其中HSPA12A、ApoA1、ApoB、ApoM表达水平;分离血清,测定肝功能标志物丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平以及高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。(3)WT鼠原代肝细胞过表达Hspa12a后,使用LPS(500 ng/mL)作用于肝细胞模拟内毒素血症肝损伤模型,6 h后检测肝细胞培养上清的ALT和AST水平。(4)根据是否发生脓毒症肝损伤将患者分为脓毒症肝损伤组和对照组,比较两组患者ALT、AST、HDL-C和LDL-C的差异。结果:(1)生物信息学分析显示,脓毒症小鼠肝脏Hspa12a、Apoa1、Apob和Apom的m RNA表达下降。(2)与NS-WT组相比,LPS-WT组肝组织出现明显损伤(P<0.001)、炎症病灶数量增多(P<0.01)、血清ALT(P<0.05)和AST(P<0.01)升高,同时肝组织中HSPA12A表达显著下降(P<0.05);而与LPS-WT组相比,LPS-Hspa12a-/-组肝脏病理变化更严重(P<0.05)且血清ALT(P<0.01)和AST(P<0.05)水平升高,HDL-C和LDL-C水平下降(P<0.01),肝组织载脂蛋白(ApoA1、ApoB、ApoM)表达降低(P<0.05,P<0.01)。(3)体外实验中LPS作用使肝细胞培养上清中ALT和AST水平升高(P<0.001),而过表达Hspa12a能够减轻LPS作用引起的ALT和AST水平升高(P<0.01)。(4)临床数据显示,出现脓毒症肝损伤的患者血浆中ALT和AST水平相比对照组显著升高(P<0.001),HDL-C和LDL-C水平显著下降(P<0.001)。结论:内毒素血症导致肝脏HSPA12A表达下调,其介导了内毒素血症肝损伤的发生,过表达Hspa12a能够保护内毒素血症引起的肝损伤,该作用可能与维持肝脏载脂蛋白及脂蛋白稳态有关。

热休克蛋白A12A改善内毒素血症肺损伤的实验研究

目的研究热休克蛋白(HSP)A12A在细菌脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症肺损伤中的作用。方法采用8~10周龄的HSPA12A基因敲除鼠(Hspa12a^(-/-))和野生型对照鼠(WT)进行实验,分别对小鼠腹腔注射LPS诱导内毒素血症,或腹腔注射生理盐水(NS)作为对照组,根据小鼠类型及处理方式将小鼠分为4组NS-WT组、NS-Hspa12a^(-/-)组、LPS-WT组、LPS-Hspa12a^(-/-)组。腹腔注射6 h后取肺组织,检测肺组织中蛋白表达水平并制作肺组织石蜡切片;收集动脉血液用于动脉血气分析。通过免疫印迹检测蛋白表达水平;对肺组织石蜡切片行HE染色,评价肺组织的病理学变化得到肺损伤评分;通过血气分析评估肺功能。结果LPS处理后,HSPA12A在LPS-WT组小鼠肺组织中的表达水平是NS-WT组的1.5倍(P<0.05);LPS处理后,小鼠的肺组织出现了明显的病理变化,并且与WT鼠相比,HSPA12A基因敲除小鼠肺组织病理改变加重,肺损伤评分显著升高(P<0.01);与WT鼠相比,HSPA12A基因敲除小鼠动脉血中CO2蓄积明显增加(P<0.05)。结论HSPA12A在保护脓毒症/感染性休克肺损伤中具有重要作用。

热休克蛋白A12B在大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的表达

目的观察大鼠角膜、晶状体、视网膜中热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)的表达。方法取SPF级SD大鼠9只,用水合氯醛处死后立即摘取眼球,采用Western blot和RT-PCR分别检测大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中HSPA12B蛋白和mRNA的表达情况;免疫荧光化学法观察HSPA12B在角膜、晶状体和视网膜组织中的表达及定位。结果Western blot和RT-PCR检测结果显示:HSPA12B在大鼠角膜、晶状体、视网膜均有少量表达,其中角膜组织(0.280±0.034、0.374±0.031)中表达强度相对最低,晶状体(0.331±0.036、0.453±0.040)次之,视网膜组织(0.453±0.029、0.680±0.045)中表达强度最高。免疫荧光化学法结果表明,在角膜组织中HSPA12B主要表达于上皮层,其中基底细胞染色最强,而角膜基质细胞上仅有弱表达;在晶状体组织中HSPA12B主要表达于上皮细胞和皮质;在视网膜组织中HSPA12B主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层和内核层,并与NeuN标记的神经元及GS标记的Müller细胞存在共定位。结论HSPA12B在大鼠角膜、晶状体、视网膜组织中均有表达,且呈特异性表达。

热休克蛋白A12B对缺血/再灌注损伤心肌微血管内皮完整性的保护作用

目的探讨热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)对心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后微血管无复流现象、血管通透性及其微血管内皮结构完整性的影响。方法实验选用同窝、8~10周龄雄性HSPA12B转基因鼠(HSPA12B Transgenic,Tg)和野生型鼠(wild type,WT)。所有小鼠均接受手术,即结扎冠状动脉左前降支诱导心肌缺血(45 min),松开结扎为I/R开始。I/R 30 min后,采用番茄血凝素免疫荧光标记检测心肌微血管血流灌注情况,伊文斯兰染料检测心肌微血管渗透性。I/R 4 h后取小鼠心脏组织,电子显微镜观察心肌微血管内皮细胞超微结构变化。结果 I/R损伤后,与WT鼠相比,Tg鼠心肌无复流面积显著减少,血管通透性明显降低,微血管内皮细胞损伤减少且细胞间连接更加完整。结论高表达HSPA12B显著减轻心肌I/R诱导的心肌微血管内皮细胞结构和功能损伤,从而保护心肌I/R损害,提示HSPA12B可能为治疗心肌I/R损伤的新靶点。

特异性下调热休克蛋白A12B加重脂多糖诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞损伤

目的通过特异性下调脂多糖(LPS)诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞(RAAEC)热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达,观察不同表达水平HSPA12B对RAAEC生物学特性的影响,探讨HSPA12B对脓毒症内皮功能调控的潜在机制。方法使用针对HSPA12B mRNA序列设计的siRNA转染RAAEC,构建LPS诱导细胞炎症模型。分三组,即空白对照组(RAAEC+20%DMEM培养基)、LPS模型组(RAAEC+20%DMEM培养基+1mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液)、LPS+siRNA转染组(基因转染后RAAEC+1mL PBS将1mg LPS溶解后的溶液)。观察各组RAAEC中HSPA12B mRNA及蛋白表达水平的变化,使用透射电子显微镜观察内皮细胞形态及内部超微结构形态改变,采用酶联免疫吸附法测定内皮细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)含量变化。结果LPS+siRNA转染组HSPA12B mRNA及蛋白水平与LPS模型组比较均明显下调(P<0.05),透射电子显微镜下观测到LPS+siRNA转染组细胞膜呈虫蚀样变,胞质内空泡明显增多,线粒体肿胀变性。与空白对照组比较,LPS模型组、LPS+siRNA转染组ET-1含量增高(pg/m L:405.28±37.95 vs.1141.18±115.27 vs.1487.09±108.18,P<0.05),且LPS+siRNA转染组高于LPS模型组(P<0.05);与空白对照组比较,LPS+siRNA转染组e NOS含量降低(μU/g:1687.98±81.38 vs.940.16±50.79 vs.658.37±55.06,P<0.05),且LPS+siRNA转染组低于LPS模型组(P<0.05)。结论特异性下调LPS诱导RAAEC细胞炎症大鼠HSPA12B的表达,能降低RAAEC对炎症反应的耐受能力,加重RAAEC损伤程度。

急性肺损伤小鼠肺内热休克蛋白A12B的表达

目的:观察急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠肺内热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)的表达改变,以及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对血管内皮细胞HSPA12B表达的影响。方法:采用气管注射LPS(5 mg/kg)复制小鼠ALI动物模型,6 h后取小鼠肺组织,采用real-time PCR和Western印迹检测肺组织内HSPA12B mRNA和蛋白表达。体外研究采用LPS(1μg/mL)诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应,real-time PCR和Wes tern印迹检测细胞HSPA12B mRNA和蛋白表达,采用NF-κB信号通路抑制剂PDTC观察LPS诱导HSPA12B表达的可能分子机制。结果:与正常组相比,LPS诱导的ALI小鼠肺组织HSPA12B mRNA和蛋白含量显著增加,同时LPS可时间依赖性地上调人脐静脉内皮细胞HSPA12B mRNA和蛋白表达,而PDTC预处理可部分逆转LPS诱导的HSPA12B mRNA和蛋白上调。结论:ALI小鼠肺内HSPA12B的表达增加,其机制可能与LPS激活NF-κB信号通路有关。

热休克蛋白A12B对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨小鼠肺微血管内皮细胞(mPMVECs)热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达下调对脂多糖(LPS)诱导的细胞炎症反应、迁移及超微结构改变的影响。方法体外传代培养的mPMVECs分为LPS组(添加1μg/mL LPS)、LPS+siRNA组[瞬时转染法将HSPA12B相应基因片段干扰小RNA(siRNA)寡核苷酸转入mPMVECs中,再加入1μg/mL LPS)]和LPS+NC组[瞬时转染法将平行对照(NC)siRNA寡核苷酸转入mPMVECs中,再加入1μg/mL LPS]。对LPS+siRNA组和LPS+NC组,分别采用Transwell试验和细胞划痕实验观察细胞迁移情况;应用透射电子显微镜(透射电镜)观察mPMVECs超微结构改变;应用Real-Time PCR检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-10和IL-1βmRNA的表达。结果与LPS+NC组比较,LPS+siRNA组mPMVECs的线粒体损伤加重,内质网水肿更明显;细胞内TNF-α、IL-6和IL-10mRNA的表达显著上调(P<0.05),而IL-1β表达下调,但差异无统计学意义(P>0.05);细胞迁移功能显著下降(P<0.05)。结论下调HSPA12B表达后,mPMVECs经LPS刺激的炎症反应增强,细胞迁移功能下降。HSPA12B可能参与保护mPMVECs免受LPS侵袭的过程。

热休克蛋白A12B对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)在心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法本实验采用8~10周龄、雄性高表达HSPA12B转基因鼠(HSPA12B transgenic mice,Tg鼠),一窝所生的雄性野生型(wild type,WT)鼠作为对照,随机分配后行假手术或I/R手术,结扎冠状动脉左前降支45 min(缺血)、松开结扎线4 h(再灌注)。通过聚合酶链式反应(PCR)检测WT鼠I/R手术与假手术后4 h,心肌HSPA12B mRNA的表达水平;通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定I/R手术后4 h,WT鼠与Tg鼠的心肌梗死面积;通过免疫印迹法检测WT鼠与Tg鼠分别行I/R手术与假手术的4组心肌中Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 I/R损伤引起WT鼠心肌HSPA12B mRNA表达水平增高。在共同经历I/R损伤后,Tg鼠较WT鼠的心肌梗死面积缩小,并且Tg鼠心肌组织抗凋亡能力(Bcl-2/Bax比值)明显高于WT鼠。结论高表达HSPA12B可能通过减少细胞凋亡,减轻心肌I/R损伤,发挥心肌保护的功能,提示HSPA12B可能是干预心肌I/R损伤的潜在靶点。

热休克蛋白A12B介导COX-2表达调控心肌缺血再灌注损伤中心肌细胞线粒体自噬的作用研究

目的 探讨热休克蛋白A12B(HSPA12B)对心肌缺血再灌注(MI/R)损伤中心肌细胞线粒体自噬的影响及可能的分子机制。方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、p LVX-NC组和p LVX-HSPA12B组,每组10只。其中,假手术组大鼠仅暴露心脏,不进行MI/R处理;模型组大鼠给予心肌内注射0.9%氯化钠注射液20μL,7 d后构建MI/R模型;p LVX-NC组大鼠给予心肌内注射20μL p LVX-NC慢病毒液,7 d后构建MI/R模型;p LVX-HSPA12B组大鼠给予心肌内注射20μL p LVX-HSPA12B慢病毒液,7 d后构建MI/R模型。ELISA检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理学形态,TUNEL染色检测各组大鼠心肌组织内细胞凋亡情况,免疫组织化学染色检测各组大鼠心肌组织内环氧化酶-2(COX-2)和微管相关蛋白1轻链3β(LC3β)表达,Western blot检测各组大鼠心肌组织内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Parkin、PINK1蛋白的表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK-MB和LDH的含量均升高,心肌组织损伤较为严重,心肌组织内TUNEL阳性细胞率升高,COX-2阳性表达率上升,而LC3β阳性表达率下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降,Parkin、PINK1蛋白的表达水平均下调(P <0.05);与模型组和p LVX-NC组比较,p LVX-HSPA12B组大鼠血清中CK-MB和LDH的含量均降低,心肌组织损伤现象明显减轻,心肌组织内TUNEL阳性细胞率降低,COX-2阳性表达率下降,同时LC3β阳性表达率上升,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,Parkin、PINK1蛋白的表达水平均上调(P <0.05)。结论 HSPA12B能够通过增加心肌细胞线粒体自噬途径来缓解MI/R模型大鼠心肌损伤,其作用机制可能与抑制COX-2表达有关。

热休克蛋白A12B降低脂多糖诱导的血管内皮细胞通透性

目的探讨脂多糖诱导下血管内皮细胞热休克蛋白A12B（HSPAl2B）表达的改变及其对血管内皮通透性的影响。方法体外传代培养人脐静脉内皮细胞，并将其分为空白组（未进行任何处理）、脂多糖（1μg／mL）诱导组、脂多糖＋HSPAl2B高表达组（转染HSPAl2B过表达质粒）和脂多糖＋阴性质粒对照组（转染阴性对照质粒）。采用电阻抗检测仪检测脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗，流式细胞仪检测血管内皮钙黏素（VE-cadherin）的表达，蛋白质印迹、PCR检测HSPAl2B的表达改变。结果脐静脉内皮细胞经脂多糖诱导后，细胞中HSPAl2B表达在O～12h内上调，12h时达高峰。HSPAl2B能使脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗值明显升高（P〈O．001），并能完全对抗脂多糖诱导造成的跨内皮电阻抗值的下降（P〈O．001）。HSPAl2B能使脐静脉内皮细胞细胞膜上VE-cadherin的表达上调。结论HSPAl2B可能通过上调VE-cadherin表达降低血管内皮细胞的通透性，从而保护血管内皮的屏障功能。

HSPA12B对Aβ1-42诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的影响

目的:探讨热休克蛋白A12B (HSPA12B)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞tau蛋白磷酸化的影响。方法:将处于对数生长期的PC12细胞分为4组:对照组、DMSO组、Aβ(20μmol/L)刺激组、Aβ刺激HSPA12B-siRNA组(Aβ+HSPA12B-siRNA)。采用Western blot法检测4组细胞的HSPA12B、磷酸化tau蛋白(p-tau)表达水平。结果:4组PC12细胞HSPA12B、p-tau蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Aβ组PC12细胞HSPA12B、p-tau蛋白表达均上调(P>0.05),DMSO组无显著差异(P>0.05);而与Aβ组比较,Aβ+HSPA12B-siRNA组PC12细胞HSPA12B下调、p-tau蛋白表达均增强(均P<0.05)。结论:HSPA12B调节Aβ诱导的PC12细胞tau蛋白磷酸化,进而影响阿尔茨海默病的病程。

高脂血症大鼠心脏、主动脉和肝脏组织中HSPA12B的表达

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏、主动脉和肝脏组织中热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达。方法模型组和对照组SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测定血清总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG);病理学观察心脏、主动脉和肝脏;用RT-PCR检测心脏、主动脉和肝脏中HSPA12BmRNA水平,用免疫组织化学法检测其蛋白表达。结果模型组总胆固醇和三酰甘油分别达(15.46±4.66)mmol/L、(0.69±0.20)mmol/L,较对照组明显升高(P<0.05);病理学观察发现模型组形成高脂性心脏病变及肝脏脂肪变性;模型组心脏、主动脉和肝脏组织中HSPA12BmRNA的表达显著高于对照组(P<0.01);模型组HSPA12B呈较强阳性表达(P<0.05)。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏、主动脉和肝脏中HSPA12B的表达升高。

LPS对大鼠星形胶质细胞HSPA12B表达的影响

目的:探讨内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对大鼠星形胶质细胞热休克蛋白A12B(Heat shock proteins A 12B,HSPA12B)表达变化和细胞定位的影响。方法:用不同浓度(0.01、0.1、1、10μg/ml)和同一浓度(1μg/ml)不同时间(1、2、4、6、8、12、24小时)的LPS刺激星形胶质细胞,分别用RT-PCR和Western blot法检测星形胶质细胞HSPA12B的mRNA和蛋白质水平表达情况,间接免疫荧光双标法检测HSPA12B在星形胶质细胞中的细胞定位。结果:用LPS 1μg/ml刺激1小时后,HSPA12B mRNA的表达增加,4小时表达活性最高。HSPA12B蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。免疫细胞化学证明LPS诱导星形胶质细胞HSPA12B的表达定位在胞核。结论:LPS可诱导星形胶质细胞HSPA12B表达上调。HSPA12B可作为一种炎症反应蛋白参与炎症反应过程。

PI3K/Akt通路调节LPS诱导的小胶质细胞内HSPA12B表达

目的:探讨PI3K/Akt通路对内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞内热休克蛋白A12B(Heat shock proteins A 12B,HSPA12B)表达的影响。方法:体外培养小胶质细胞,并分三组处理:对照组、0.1μg/ml LPS刺激组、PI3K/Akt通路抑制LPS刺激组。Western blot法检测小胶质细胞内HSPA12B和Akt磷酸化的蛋白水平表达,间接免疫荧光标记法检测HSPA12B在小胶质细胞中的细胞表达定位。结果:LPS刺激2 h后,小胶质细胞内HSPA12B和Akt磷酸化的表达增加;应用LY294002预处理后,LPS诱导HSPA12B蛋白水平表达显著抑制。免疫细胞荧光染色证明小胶质细胞LPS组HSPA12B核周荧光强度明显增强,LY294002预处理组HSPA12B荧光强度明显减弱。结论:PI3K/Akt途径参与调控LPS诱导小胶质细胞HSPA12B表达。

PI3K/Akt通路介导LPS调节星形胶质细胞HSPA12B表达的研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白kinase B(PI3K/Akt)通路对内毒素脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达的影响。方法将处于对数生长期的新生SD大鼠星形胶质细胞分为3组:con组(空白对照)、LPS组(1μg·ml^(-1)LPS刺激4h)、LPS+LY组(20μmol·L^(-1)LY294002预处理1h+1μg·ml^(-1)LPS刺激4h)。采用Western blot法检测3组细胞HSPA12B、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平,采用细胞免疫荧光染色法检测细胞HSPA12B免疫荧光强度,并进行比较。结果 3组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05);与con组比较,LPS组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均上调(均P<0.05);而与LPS组比较,LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。LPS组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度强于con组,而LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度较LPS组减弱。结论 LPS或是通过PI3K/Akt通路介导调节星形胶质细胞HSPA12B的表达,进而影响中枢神经系统炎症过程。

血浆热休克蛋白A12B对多器官功能障碍综合征患者预后的评估

目的 研究血浆热休克蛋白A12B（heat shock protein A12B,HSPA12B）对多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）患者预后的意义. 方法 采用前瞻性病例对照研究.纳入MODS患者30例,存活组14例,死亡组16例,并纳入全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）患者30例,健康志愿者15例.记录患者的人口统计学资料、临床信息、急性生理和慢性健康评分（acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ）、MODS评分及序贯性器官衰竭评分（sequential organ failure assessment,SOFA）.通过酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定诊断MODS后24 h内外周血中HSPA12B水平,探讨其与患者病情及预后的相关性. 结果 MODS患者外周血中HSPA 12B水平较SIRS患者、健康志愿者显著升高（P＜0.001）,且死亡组患者外周血中HSPA 12B的水平较存活组显著升高（P＜0.05）;MODS死亡组患者较存活组患者APACHEⅡ评分、SOFA评分、MODS评分、机械通气时间差异有统计学意义（P＜0.05）,外周血中HSPA12B水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分和MODS评分显著正相关.HSPA 12B预测患者死亡的曲线下面积（area under the cure,AUC）为0.826（95％ CI：0.663～0.989,P＜0.0）,显著高于白介素（interleukin,IL）-6（P＜0.01）.当HSPA 12B水平为1.577 μg/L时,HSPA 12B预测患者死亡的敏感度为72.2％,特异度为86.8％. 结论 血浆HSPA 12B水平可作为判断MODS患者预后的指标.

糖尿病肾病相关基因筛选及生物信息学分析

目的采用生物信息学技术筛选糖尿病肾病(DN)相关基因并预测其生物学功能、信号通路。方法在基因公共表达数据库(GEO)中筛选并下载DN相关基因芯片数据,采用GEO在线分析软件GEO2R分析在DN肾组织与正常肾组织中差异表达的基因。对筛选出的差异表达基因进行基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEEG)分析,预测基因功能及参与的信号通路。采用蛋白-蛋白相互作用数据库(STRING)分析差异表达基因编码蛋白间的相互作用关系。结果筛选出9个差异表达最为显著的基因,分别为PLCE1、CLIC5、PTPRO、热休克蛋白A12A(HSPA12A)、AIF1、GMDS、SEMA5A、CEP152、FOXC1。除CEP152表达下调外,余8个基因在DN组表达上调。差异表达基因的主要分子功能涉及蛋白结合、对细胞刺激反应和细胞信号转导,主要调控细胞代谢等生物学过程。差异表达基因主要参与细胞代谢途径、甲状腺激素信号通路、Rap1信号通路、磷脂酰肌醇信号系统及肌醇磷酸代谢等信号通路。蛋白网络分析提示HSPA12A、GMDS、CEP152基因编码蛋白与其他蛋白作用关联最紧密,为蛋白-蛋白相互作用网络的中心节点。结论筛选出了9个在DN肾组织与正常肾组织中差异表达最显著的基因,其靶基因功能涉及蛋白结合、对细胞刺激反应和细胞信号转导,主要调控细胞代谢等生物学过程。HSPA12A、GMDS、CEP152基因可能是DN的关键基因,其异常表达可能共同参与了DN的发病。

五味子乙素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的:观察五味子乙素(SchB)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对HSPA12B/PI3K/Akt信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法:将130只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤模型组(模型组)、低剂量五味子乙素组(SchB 3mg·kg^(-1),SchB1组)、中剂量五味子乙素组(SchB 10mg·kg^(-1),SchB2组)和高剂量五味子乙素组(SchB 30mg·kg^(-1),SchB3组)。假手术组大鼠不插栓线;模型组大鼠建立脑缺血2h再灌注22h模型;SchB1、SchB2和SchB3组分别用不同剂量的SchB预先给药7d后再造模。神经功能缺损评分检测大鼠神经功能障碍情况,通过脑组织含水量的测定检测脑组织水肿情况,甲苯胺蓝染色检测脑组织形态学改变,ELISA法检测脑组织匀浆中核因子kappa B(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL^(-1))和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blotting法检测脑组织中热休克蛋白A12B(HSPA12B)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显升高(P<0.01),脑组织含水量升高(P<0.01),脑组织结构疏松,间质出现水肿,NF-κB、TNF-α、IL^(-1)和IL-6水平升高(P<0.01),HSPA12B和p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,SchB1、SchB2和SchB3组大鼠神经功能评分明显降低(P<0.01),SchB2和SchB3组脑组织含水量减少(P<0.05),神经细胞水肿减轻,空泡减少,NF-κB、TNF-α、IL^(-1)和IL-6水平降低(P<0.05或P<0.01),SchB2和SchB3组HSPA12B蛋白表达水平升高(P<0.05),SchB1、SchB2和SchB3组p-Akt蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:SchB对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与调控HSPA12B/PI3K/Akt信号通路、抑制再灌注时炎症反应对神经细胞的损伤有关。

miR-134在氧-糖缺失神经元损伤中的作用

目的探讨miR-134在乳鼠脑皮层神经元氧-糖缺失(oxygen glucosedeprivation,OGD)致缺血损伤中的作用及其可能分子机制。方法离体培养乳鼠脑皮层神经元10d后,随机分为五组,正常组和OGD组,后者包括非转染组、miR对照组、miR-134抑制剂组、miR-134前体组。按照分组加入饲养液中感染24h换液,72h后对OGD组进行OGD处理。利用噻唑蓝(MTT)法检测神经元生存率,Western blotting检测热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达水平,实时定量RT-PCR方法检测miR-134和HSPA12BmRNA表达水平以及通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-134对HSPA12BmRNA 3’UTR的直接调控作用。结果与非转染组比较,在OGD致神经元缺血损伤中miR-134前体组,miR-134的表达水平明显提高,细胞存活率明显降低,HSPA12B蛋白水平明显降低,荧光素酶活性也明显降低(P<0.05);而miR-134抑制剂组miR-134的表达水平明显降低,细胞存活率显著提高,HSPA12B蛋白水平明显提高,荧光素酶活性也明显升高(P<0.05);但各组之间HSPA12BmRNA水平差异无统计学意义。结论miR-134通过负性调控HSPA12B蛋白表达水平,在OGD所致神经元缺血损伤中发挥重要作用,在mRNA水平上为治疗缺血性脑卒中提供了可能的分子靶标。

羟考酮对肥胖患者减重术后白细胞炎症反应的调控作用及机制

目的探讨羟考酮对肥胖患者减重术后炎症反应的调控作用及其可能机制。方法收集采用羟考酮术后镇痛的肥胖症减重手术患者术前和术后血液标本,分离白细胞行体外实验。采用小鼠巨噬细胞Raw264.7培养模型,以细菌脂多糖(LPS)作用6 h诱导炎症反应。Western blot法分析炎症因子IL-6和TNF-α表达,免疫荧光检测丙酮酸激酶2(PKM2)在细胞内的分布,采用腺病毒对细胞进行感染过表达热休克蛋白A12A(HSPA12A)。结果减重手术升高患者血液白细胞IL-6、TNF-α、HSPA12A表达(P<0.01),而羟考酮可抑制该作用(P<0.01)。LPS上调巨噬细胞IL-6、TNF-α、HSPA12A表达(P<0.01),而羟考酮对此有抑制作用(P<0.05或P<0.01)。LPS增加巨噬细胞PKM2在核内的分布(P<0.01),而羟考酮可抑制该作用(P<0.01)。巨噬细胞过表达HSPA12A后,逆转了羟考酮对LPS诱导IL-6和TNF-α表达、PKM2核移位的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论羟考酮可抑制肥胖患者减重术后血液炎症细胞的炎症反应,该作用可能是通过下调HSPA12A表达而介导的。