miRNA-181b在氧-糖剥夺致N2A细胞缺血损伤中的作用及对热休克蛋白A5表达的调节

目的探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白(HSP)A5表达的调节。方法应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检测miR-181b和HSPA5 mRNA表达水平,荧光素酶报告基因技术检测miR-181b对HSPA5 mRNA的直接调控作用。结果 miR-181b在OGD致N2A细胞缺血损伤中表达水平明显降低(n=5);在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的生存率(n=6);而在非OGD条件下,miR-181b表达水平的改变对N2A细胞活力无影响;miR-181b表达水平的改变可显著影响HSPA5蛋白表达水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共转染miR-181b前体(premiR-181b)或miR-181b抑制剂(anti-miR-181b)可显著抑制或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的荧光素酶报告基因的活性(n=5)。结论 miR-181b通过负性调节HSPA5的蛋白表达水平,在OGD致N2A神经细胞缺血性损伤中发挥重要作用。

热休克蛋白A5基因多态性与乙肝病毒侵袭的关系

目的探讨热休克蛋白A5基因(HSPA5)与乙型肝炎病毒(HBV)侵袭的关系。方法对210例HBV携带者和194例性别年龄匹配的健康者标本的PCR产物进行基因测序分型。酶联免疫吸附试验(ELISA)或临床化学方法检测HBV感染的血清学标志物。结果病例组的等位基因和基因型分布与对照组相比差异无统计学意义。此外,HBV感染的个体中,ALT/HBeAg和HBV-DNA均与等位基因或基因型的变异无相关性。结论 HSPA5基因的-86 bp T/A多态性与HBV侵袭的临床风险和急性恶化没有相关性。

微小RNA-181b通过调节热休克蛋白A5在缺血性脑卒中小鼠中的作用

目的探讨微小RNA-181b(miR-181b)在缺血性脑卒中小鼠脑损伤中的作用及机制。方法采用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟缺血性脑损伤;Real-time PCR检测miR-181b mRNA表达情况;蛋白印迹观察miR-181b靶蛋白热休克蛋白A5(HSP A5)蛋白水平变化情况;Nissl方法检测皮层缺血神经元的缺失情况;行为学方法评估小鼠的神经行为学功能损伤程度。结果侧脑室注射miR-181b拮抗剂可使脑内miR-181b表达水平明显降低(P<0.05,n=3);MCAO后小鼠的神经行为学功能受到严重损伤,miR-181b拮抗剂可明显缓解这些行为学改变(P<0.05,n=6);下调miR-181b可以提高HSPA5蛋白水平(P<0.05,n=3);MCAO后小鼠皮层有一定程度的神经细胞缺失,预先给予miR-181b拮抗剂发挥保护作用,神经细胞缺失减少(P<0.05,n=3)。结论 miR-181b可能通过调节HSPA5蛋白的表达在缺血性脑卒中小鼠脑损伤中发挥重要作用。

比较热休克蛋白A5和3-甲基腺嘌呤和介导小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:比较研究热休克蛋白A5(HSPA5)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)介导小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤性自噬的保护作用。方法:成年雄性BALB/c小鼠30只,分为6组:sham组、缺血再灌注组(I/R组)、vehicle+I/R组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+I/R组、scramble siRNA+I/R组和HSPA5 siRNA+I/R组,每组5只。采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24 h制作小鼠I/R模型。Vehicle+I/R组和3-MA+I/R将5μl 0.9%Na Cl或3-MA(30 mg/ml)在MCAO前30 min侧脑室注射;scramble siRNA+I/R group组和HSPA5 siRNA+I/R组将5μl scramble siRNA或HSPA5 siRNA(2μg/μl)在MCAO前24 h侧脑室注射。通过小鼠I/R后神经功能评分确定运动功能障碍程度。小鼠神经细胞内自噬体形成用透射电子显微镜测定,再灌注24 h缺血大脑皮层(LC3)-II/LC3-I表达用Western Blot方法检测。小鼠I/R后缺血大脑神经细胞损伤用Nissl染色进行观察。结果:HSPA5和3-MA可以影响I/R小鼠行为学改变并使脑缺血性损伤和神经症状加重(P<0.05)。透射电子显微镜检测可见,sham组小鼠大脑皮层神经细胞形态正常,I/R组小鼠缺血大脑皮层神经元胞质中细胞器减少,形成自噬体。与sham组小鼠比较,I/R组小鼠缺血大脑皮层LC3-II蛋白表达水平显著增高(P<0.05);3-MA+I/R或HSPA5 siRNA+I/R小鼠缺血大脑皮层LC3-II蛋白表达水平明显低于I/R小鼠(P<0.05)。结论:HSPA5和3-MA在介导小鼠脑缺血再灌注损伤导致的自噬可发挥相同的保护作用,并且促进神经细胞凋亡。

Hspa5和E-cadherin在B6-Co小鼠胚胎后期眼睑中的表达研究

目的:检测遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)与B6小鼠在胚胎后期眼睑组织中Hspa5、E-cadherin基因及蛋白的表达变化,探讨两者与B6-Co小鼠EOB表型形成的内在联系。方法:取B6、B6-Co胚胎期16.5天(E16.5d)、E18.5d小鼠眼睑,用Realtime PCR法和Western Blot法检测眼睑中Hspa5、E-cadherin的m RNA和蛋白表达情况。结果:E16.5d,B6-Co小鼠眼睑中Hspa5表达显著降低,E-cadherin表达显著升高;E18.5d,B6-Co小鼠Hspa5表达显著升高,E-cadherin表达显著降低。结论:Hspa5、E-cadherin的基因和蛋白在B6-Co突变系小鼠眼睑中的表达出现明显异常,提示B6-Co小鼠胚胎发育后期Hspa5、E-cadherin表达变化与EOB表型的形成有密切关联。