人热休克蛋白B6在膀胱癌组织中的表达及其预后意义

目的通过分析癌症基因组数据库(TCGA)中基因芯片数据,挖掘人热休克蛋白B6(HSPB6)在正常膀胱组织及膀胱癌组织中的表达及其预后意义。方法通过Oncomine及人蛋白质数据库分析HSPB6在正常膀胱组织与膀胱癌组织中的差异表达;通过基因表达谱数据动态分析HSPB6表达水平与患者预后的关联;通过String数据库分析与HSPB6相关的基因及蛋白并预测其功能。结果膀胱癌组织中HSPB6的表达较正常膀胱组织低,差异有统计学(P<0.05);生存分析中HSPB6与患者疾病无进展生存时间、总生存时间具有明显相关性(P<0.05)。结论尽管HSPB6在膀胱癌组织中普遍较癌旁正常组织低表达,但其在癌组织中的高表达反而是患者不良预后因素。

人热休克蛋白B6的真核蛋白表达与生物学功能

目的构建人热休克蛋白B6(HspB6)重组表达载体,初步研究其生物学活性。方法采用RT-PCR法扩增HspB6CDS段序列,并将扩增产物与小鼠Fc片段融合成重组基因HspB6/mFc,测序正确后插入蛋白表达载体pCEP4,随后转染人肾上皮293T细胞。扩增培养后收集细胞上清液用于浓缩、纯化以及Western blot验证。采用CCK-8法和Transwell实验分别检测HspB6/mFc融合蛋白对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响。结果成功构建pCEP4/HspB6/mFc重组载体,并获得稳定表达HspB6/mFc融合蛋白的293T细胞。HspB6/mFc融合蛋白能明显促进HUVEC增殖和迁移。结论 pCEP4/HspB6/mFc重组载体及稳定表达的HspB6/mFc融合蛋白为进一步研究HspB6的生物学功能提供物质基础。

基于蛋白质组学探讨注射用丹参多酚酸盐对心梗超急性期保护机制研究

心梗超急性期是指心梗发生后30 min内,症状不明显、诊断困难的一段时间,相关病理生理机制研究关注较少。本研究基于蛋白质组学探讨心梗超急性期蛋白质组改变并针对热休克蛋白B6(heat shock protein B6HSPB6)探讨注射用丹参多酚酸盐的干预作用与相关机制,为心梗超急性期病理机制及注射用丹参多酚酸盐的临床合理用药提供实验依据。采用基于质谱的非标记蛋白质组学对比评价大鼠心梗模型造模前后蛋白表达变化后,使用生物信息学方法分析共有表达蛋白及相关通路。接着运用分子对接技术评价注射用丹参多酚酸盐对共有差异蛋白HSPB6的结合作用,最后通过动物实验进行验证。本实验动物福利和实验过程均遵循中国中医科学院西苑医院实验动物伦理委员会的规定。本实验结果表明,非标记蛋白质组学结果共定量获得2166个蛋白质,其中有194个共有差异蛋白参与心梗超急性期心肌损伤和机体调节,主要涉及蛋白质同源二聚活性、氧气结合与运输、丝氨酸型内肽酶抑制剂活性等分子功能。其中,HSPB6蛋白参与心肌功能的调节作用。分子对接结果表明,注射用丹参多酚酸盐主成分丹参乙酸镁与HSPB6蛋白具有最低的结合能:-14.53 kcal·moL^(-1)。动物实验表明,与假手术组相比,模型组大鼠心功能损伤射血分数和短轴缩短率显著降低(P<0.001),心脏血流灌注明显下降(P<0.001),存在明显心肌纤维紊乱、心肌细胞水肿、间质内小血管充血等病理形态改变;给药组大鼠心功能损伤减弱,其中低剂量短轴缩短率明显改善(P<0.05),心肌组织病理性损伤明显减轻,HSPB6蛋白表达不同程度上调(P<0.01,P<0.001)。基于上述研究结果,发现注射用丹参多酚酸盐可一定程度改善大鼠心梗超急性期损伤心功能及病理形态,其作用机制可能与促进HSPB6表达有关。