热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

旨在研究宿主热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响。选用对PRRSV易感的MARC-145细胞系,探究过表达和干扰HSP90AB1对病毒复制的影响,利用激光共聚焦免疫荧光和免疫共沉淀验证HSP90AB1与PRRSV的非结构蛋白NSP2作用关系,利用双荧光素酶试验探究HSP90AB1和NSP2对NF-kB活性的影响。结果表明,过表达HSP90AB1后显著抑制病毒的复制,干扰HSP90AB1的表达后促进病毒的复制;免疫共沉淀结果和激光共聚焦免疫荧光说明,HSP90AB1和NSP2存在相互作用;双荧光素酶报告试验表明HSP90AB1能逆转NSP2对NF-κB活性的抑制作用。综上,HSP90AB1可能通过与PRRSV NSP2相互作用,拮抗NSP2对NF-kB活性的抑制来抑制病毒的复制和感染。

热休克蛋白90α、胸苷激酶1检测对肝癌患者的诊断价值

目的:检测肝癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)、胸苷激酶1(TK1)水平,分析其对肝癌的诊断价值。方法:纳入确诊肝癌患者为肝癌组(n=82);另纳入同期确诊良性肝病患者为对照组(n=82)。采用酶联免疫吸附法检测两组血清HSP90α、TK1水平并进行比较,联合临床病理分析血清HSP90α、TK1水平和病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各指标对肝癌的诊断价值。结果:肝癌组患者血清HSP90α、TK1水平均高于良性肝病组患者(P<0.05);肝外转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ的肝癌患者血清HSP90α、TK1水平均较高(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清HSP90α、TK1均对肝癌有一定的诊断价值(P<0.05),且联合检测诊断肝癌的曲线下面积(AUC)为0.921,高于各指标单独检测(P<0.05)。结论:肝癌患者血清HSP90α、TK1水平升高,且与病情的发生、发展有一定的关联,两项指标联合检测诊断肝癌的价值更高。

人热休克蛋白90AB1基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化

通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体外扩增,胶回收纯化hHsp90AB1。将hHsp90AB1及pET-28a(+)质粒经NdeⅠ和SalⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化DH5α,经复苏后,在含卡那霉素的LB固体养基上筛选出阳性克隆。挑取LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即pET28a-hHsp90AB1体外重组成功,命名为pET28a(+)-hHsp90AB1。重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明Hsp90AB1蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白13%。接种到18 L发酵罐中试发酵,表达产物经Ni-NTA凝胶亲和层析,蛋白纯度达到98%。

热休克蛋白HSP90α和miRNA-144在小鼠肾缺血再灌注损伤后的表达变化

目的研究小鼠肾缺血再灌注后不同时间点热休克蛋白HSP90α和miRNA-144的表达变化。方法用动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂45min建立肾缺血再灌注损伤模型,测定再灌注4、8、12、24、48h组及假手术组血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,光镜下观察肾组织形态学改变,采用定量RT-PCR的方法检测肾缺血再灌注各时间点HSP90αmRNA和miRNA-144的表达变化,Western blot法检测HSP90α蛋白的表达变化。结果 HE染色显示假手术组小鼠的肾组织结构及肾功能正常,再灌注组可见肾小管管腔扩张,肾小管上皮细胞有不同程度的肿胀、坏死、刷状缘消失,管腔内有管型,肾间质充血水肿,组织损伤以24h最重;肾功能指标显示再灌注组与假手术组相比,Scr、BUN水平随再灌注时间延长而升高,24h达峰值(P<0.01)。定量RTPCR和Western blot法检测结果显示,再灌注4h后HSP90α的mRNA和蛋白表达开始逐渐增强,mRNA在12h达高峰,蛋白水平在24h达高峰(P<0.01);miRNA-144在再灌注后表达降低(P<0.01)。结论 HSP90α在缺血再灌注损伤的肾组织中表达增高,提示其可能参与肾缺血再灌注损伤的保护作用;miRNA-144可能为调控HSP90α功能的潜在miRNA。

热休克蛋白HSP90β在人胃癌组织及耐药细胞系中的表达

目的 了解热休克蛋白 HSP90 β在人胃癌组织及多药耐药细胞系中的表达 .方法 SABC免疫组化法 :70例胃癌组织 ,其中高分化腺癌 1 3例 ,中分化腺癌 32例 ,低分化腺癌1 8例 ,粘液癌 7例 (包括粘液腺癌和印戒细胞癌 ) .正常胃粘膜 1 7例 ,胃炎 2 3例及癌旁组织 35例作为对照 .组织切片用正常羊血清封闭后 ,加入一抗 (山羊抗人 HSP90 β多克隆抗体1∶ 2 0 0 ) ,4℃冰箱过夜 ;加二抗 (生物素化兔抗山羊 Ig G 1∶2 0 0 ) 37℃ 30 min;加 SABC-过氧化物酶复合物 (1∶ 1 0 0 ) ;DAB显色 .m RNA原位杂交方法 :探针变性后 ,加至组织块上 ,37℃杂交 48h;依次用 2× SSC,1× SSC,0 .5× SSC反复振洗 ,加碱性磷酸酶标记的抗 Dig抗体 ,NBT/ BCIP呈色 .结果 HSP90β主要分布于组织细胞的胞质 .在非癌胃粘膜HSP90 β为弱阳性表达 .正常胃粘膜组织、胃炎 (浅表性及萎缩性 )及癌旁组织 HSP90β的阳性表达率分别为 1 1 .8% ,1 3.0 %及 1 1 .4% ,各组之间无显著差异 (P>0 .0 5 ) .在胃癌组织中 HSP90 β的表达明显增强 ,阳性表达率明显增高 ,阳性率为 30 .0 % (P<0 .0 5 ) .其中在高、中、低分化腺癌及粘液腺癌中 HSP90 β的阳性率分别为 1 5 . 4% ,31 . 3% ,33. 3%及42 .9% . HSP90β的表达有随组织分化程度降低而增高?

热休克蛋白90、缺氧诱导因子-1α在大肠癌中的表达及意义

目的观察热休克蛋白90(HSP90)、缺氧诱导因子(HIF)-1α在大肠癌发生发展过程中的表达及意义。方法运用免疫组织化学法检测HSP90,HIF-1α两者在大肠癌及正常组织中的表达情况。结果 HSP90、HIF-1α在正常大肠组织,大肠腺癌中的阳性率分别为:30%、63.0%;15.0%、71.7%。两者在正常组织和大肠腺癌中的表达差异均有统计学意义(P=0.013,P<0.001)。HSP90蛋白的表达与大肠癌组织的分化程度,Duke分期及是否有淋巴结转移有关(P<0.05),HIF-1α的表达与Duke分期及是否有淋巴结转移有关(P<0.05);通过相关性分析,两者具有明显相关性(P<0.01)。结论 HSP90,HIF-1α可能与大肠腺癌的发生、浸润及转移有关;两者的协同作用可能参与了大肠癌的发生发展。

黏虫热休克蛋白Hsp90基因的克隆及不同温度对其诱导反应

热休克蛋白是昆虫体内一种很重要的抗逆蛋白,Hsp90是热休克蛋白家族中的重要成员。本试验利用高通量测序法获得Hsp90的c DNA的全长序列,通过Real-time PCR探讨黏虫各龄期、组织和黏虫3龄幼虫受到不同高、低温胁迫不同时间的Hsp90基因的相对表达量。在黏虫体内得到Hsp90的c DNA全长序列(Gen Bank登录号MF773751)2422 bp,命名为Ms Hsp90,编码717个氨基酸,分子量约为82.576 ku,等电点是4.98,序列包含有Hsp90的保守序列,与鳞翅目夜蛾科的甜菜夜蛾、苜蓿夜蛾、斜纹夜蛾亲缘关系较近,且氨基酸序列相似性都在98%以上。Real-time PCR结果显示黏虫的不同发育阶段和组织中均有Ms Hsp90表达,其中2龄幼虫和后肠的相对表达量最高。40℃处理6 h的相对表达量最高,处理12、24、48 h时,20℃的相对表达量最高。上述分析可知,Ms Hsp90相对表达量的高低表明在黏虫不同组织,不同发育阶段和不同时间、温度处理中发挥的作用存在差异。

热休克蛋白90β(HSP90β)真核表达载体的构建及体外表达

目的克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β,并检测其在体外的表达情况,为下一步研究鼻咽癌中HSP90β功能奠定基础。方法提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA。用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,构建中间载体PGEM-hHSP90β。将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,构建hHSP90β真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β。经酶切和测序后,用脂质体包裹转染COS细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HSP90β的表达。结果酶切及测序鉴定表明,hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)/hHSP90β。该表达质粒在体外转染COS细胞后可表达HSP90β分子。结论采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插到了真核表达载体pcDNA3.1(+)中;pcDNA3.1(+)/hHSP90β表达质粒能在体外表达HSP90β分子。

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.3转染细胞,第4 d提取HBV核心颗粒,Southern Blot检测HBV复制中间体,ELISA检测上清HBsAg的表达。结果 17-AAG能够下调HepG2细胞PAI-1的表达,HepG2细胞内HBV复制中间体表达水平明显降低,HBsAg的表达亦受到抑制,但上调或阻断TGFβ信号通路对HBV复制影响不明显。结论 HSP90参与肝细胞内TGFβ信号通路的活化,其抑制剂17-AAG能够抑制HBV的复制与蛋白表达,但该抑制作用与TGFβ信号通路活化无关。

乳腺浸润性导管癌组织中热休克蛋白90B1表达观察及分析

目的观察并分析乳腺浸润性导管癌组织中热休克蛋白(HSP)90B1的表达情况。方法乳腺浸润性导管癌患者的肿瘤组织标本236例,正常乳腺组织标本20例,采用免疫组化SP法检测HSP90B1,分析不同病理参数及不同分子分型肿瘤组织中HSP90B1的表达情况。结果正常乳腺组织中HSP90B1的阳性表达率为15.0%(3/20),乳腺浸润性导管癌组织中HSP90B1阳性表达率为65.3%(154/236),两者相比,P<0.05。不同肿瘤直径、组织学分级、腋窝淋巴结转移情况、复发及远处转移情况的乳腺癌患者肿瘤组织中HSP90B1阳性表达率比较,P均<0.05;不同人表皮生长因子受体2(Her-2)表达情况、雌激素受体(ER)表达情况、孕激素受体(PR)表达情况者相比,P均<0.05。HSP90B1阳性表达率与肿瘤直径(r=0.170)、组织学分级(r=0.166)、Her-2表达(r=0.146)、腋窝淋巴结转移(r=0.216)及复发、远处转移情况(r=0.143)呈正相关,与ER(r=-0.139)、PR(r=-0.208)的表达呈负相关,P均<0.05。Luminal A型乳腺癌组织中HSP90B1阳性表达率低于三阴型者及Her-2+型者(P均<0.05)。结论乳腺癌组织中HSP90B1阳性表达率增高,且在更大肿瘤直径、更高组织学分级、出现腋窝淋巴结转移及远处转移的肿瘤组织中阳性表达率更高。不同分子分型的乳腺癌组织中HSP90B1阳性表达率也有所差异。HSP90B1可能与乳腺癌的生物学行为有关。

热休克蛋白90β1在胃癌中的表达及意义

目的:探讨热休克蛋白90β1(Hsp90β1)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取90例胃癌患者手术切除的肿瘤及其癌旁组织标本,免疫组织化学染色方法检测Hsp90β1在胃癌和癌旁组织中的表达水平,并分析其与患者各临床病理参数的关系。结果:Hsp90β1在胃癌组织中的阳性表达率为92.22%(83/90),明显高于癌旁组织43.33%(39/90)的阳性表达率(P<0.01)。在肿瘤组织中Hsp90β1表达水平与患者的性别和年龄无相关性(P>0.05),而与胃癌组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期密切相关(P<0.05)。结论:Hsp90β1在胃癌组织中的表达上调,提示其可能参与胃癌的发生和发展过程。

雷公藤多苷通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病大鼠热休克蛋白90及PGC-1α表达的影响

目的探究雷公藤多甙(TG)通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病(DN)大鼠热休克蛋白90(HPS90)及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)水平的影响。方法通过腹腔注射链脲佐菌素复制DN大鼠模型,并将其随机分为DN组、DN+TG组和DN+TG+SC79组(每组15只),另取15只健康大鼠作为对照组。TG灌胃剂量为20 mg/kg。大鼠腹膜内注射SC79(0.04 mg/g)以激活PI3K/Akt通路。通过HE染色验证模型复制结果和TG对肾组织的保护作用。生化检测大鼠24 h尿蛋白和肌酐,酶联免疫吸附试验检测炎症因子水平,HE染色观察各组大鼠肾损伤情况,Masson染色观察各组大鼠肾纤维化情况,qRT-PCR和Western blotting分别检测HPS90和PGC-1αmRNA和蛋白相对表达量。结果DN组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于对照组(P<0.05),PGC-1αmRNA和蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05);DN+TG组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6低于DN组(P<0.05),PGC-1αmRNA和蛋白相对表达量高于DN组(P<0.05)。DN+TG+SC79组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于DN+TG组(P<0.05),PGC-1αmRNA和蛋白相对表达量低于DN+TG组(P<0.05)。结论TG可以通过抑制PI3K/Akt通路抑制HSP90的转录和翻译,从而促进PGC-1α的表达,并发挥抗炎和抗纤维化作用,从而缓解DN。

同源框CUT样蛋白1、热休克蛋白90在脑胶质瘤中的表达及对患者预后的影响

目的探讨同源框CUT样蛋白1、热休克蛋白90在脑胶质瘤中的表达及对患者预后的影响。方法选取86例脑胶质瘤患者作为观察组,同时选取40例因颅脑外伤行额叶减压手术患者作为对照组,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测CUX-1、HSP90蛋白表达,分析CUX-1、HSP90蛋白对脑胶质瘤患者无进展生存期(PFS)的影响。结果观察组患者脑胶质瘤组织中CUX-1、HSP90蛋白相对表达量分别为(1.10±0.26)和(1.13±0.21),均明显高于对照组(P﹤0.01);WHO分级Ⅲ~Ⅳ级脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中CUX-1、HSP90蛋白相对表达量分别为(1.29±0.10)和(1.32±0.14),均明显高于Ⅰ~Ⅱ级(P﹤0.01);CUX-1、HSP90蛋白高表达患者中位PFS分别为25个月(95%CI:23.26~26.74)和25个月(95%CI:23.64~26.36),均明显短于CUX-1、HSP90蛋白低表达患者(P﹤0.01);CUX-1和HSP90蛋白表达呈正相关(r=0.760,P﹤0.05)。结论脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中CUX-1、HSP90蛋白表达上调,与WHO分级有关,且两者间存在正相关关系,同时对患者PFS有影响。

热休克蛋白90抑制剂SNX-2112的合成与优化

目的对热休克蛋白90(HSP90)抑制剂SNX-2112合成方法的探索及优化。方法以2-氟-4-溴苄腈作为起始原料,通过N-烃化、环化、脱保护、乌尔曼偶联、水解等反应得到目标产物。中间体及目标化合物的结构经MS和1H NMR确认。同时,采用微波法对关键中间体D的合成方法进行了优化。结果与结论微波法使中间体D合成方法操作简便可控,虽产率略低于文献报道值,但大大缩短反应时间,提高起始物料反应的原子经济性,更适合产业化。

血管内皮生长因子与热休克蛋白90α和胸苷激酶1在肝恶性肿瘤临床诊断中的应用价值探讨

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)和胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)在肝恶性肿瘤临床诊断中的应用价值。方法选取2018年7月至2020年6月安徽医科大学附属巢湖医院收治的肝恶性肿瘤患者[32例,男性23例,女性9例,年龄(47.80±11.78)岁]、肝良性疾病患者[32例,男性21例,女性11例,年龄(49.24±13.22)岁]和同时期体检健康人[32例,男性22例,女性10例,年龄(48.32±12.65)岁]作为研究对象,检测所有研究对象初诊血清样本的VEGF、HSP90α和TK1水平,分析其在肝恶性肿瘤、肝良性疾病患者和健康人群血清中的表达情况及其鉴别诊断效能。结果肝恶性肿瘤组VEGF、HSP90α和TK1水平分别为284.58(78.40,604.37)pg/ml、122.03(88.76,197.16)μg/ml和2.21(0.89,3.60)pmol/L,肝良性疾病组VEGF、HSP90α和TK1水平分别为120.58(67.64,196.38)pg/ml、77.32(53.43,103.65)μg/ml和0.71(0.23,1.84)pmol/L,健康对照组VEGF、HSP90α和TK1水平分别为122.54(63.52,183.43)pg/ml、65.38(49.86,98.57)μg/ml和0.81(0.29,1.78)pmol/L。经Mann-Whitney检验,肝恶性肿瘤组VEGF、HSP90α和TK1水平均高于肝良性疾病组和健康对照组(均P<0.05)。ROC曲线分析显示VEGF、HSP90α和TK1均具有一定的辅助诊断价值(均P<0.05),当VEGF、HSP90α和TK1分别取临界值198.53 pg/ml、106.16μg/ml和1.88 pmol/L时获得最大的诊断效能,ROC曲线下面积分别为0.855、0.895和0.811。结论VEGF、HSP90α和TK1是肝恶性肿瘤临床辅助诊断的良好指标,值得临床推广应用。

I型胶原和热休克蛋白90在肉鸡胫骨软骨发育不良不同阶段的变化

应用免疫组织化学方法,研究了I型胶原(Col I)和热休克蛋白90(Hsp90)在肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)不同阶段的变化。将80羽1日龄健康AA肉鸡预饲1周后分为2组。对照组饲以基础日粮;试验组在基础日粮中添加福美双100 mg.kg-1,4 d后继续饲以基础日粮。试验历时23 d。应用抗Col I和Hsp90多克隆抗体对试验第4、9、16、23天的肉鸡胫骨生长板进行免疫组织化学研究。结果表明,在饲喂福美双后第4、第9天,Col I和Hsp90的合成在生长板前肥大区和肥大区软骨细胞都明显增加,而第16、第23天时在TD损伤周边的前肥大区软骨细胞出现。由此推测,Col I蛋白合成增加,可能是由于不能正常钙化的反馈调节所致;而上调表达的Hsp90可能在调节软骨细胞发育周期中发挥重要作用,为进一步认识TD提供了新的思路。

热休克蛋白70、cyclinD1、p21在胃癌组织芯片表达及临床病理联系

目的通过检测热休克蛋白70(HSP70)、cyclin D1、p21在胃癌组织、癌旁正常组织的表达及其与临床病理参数之间的关系,探讨HSP70、cyclin D1、p21在胃癌发生、发展中的作用。方法应用高通量的组织芯片技术建立组织芯片,免疫组织化学SP法检测75例无术前放化疗史的胃癌手术标本和癌旁正常胃组织中HSP70、cyclin D1、p21蛋白的表达情况,并分析蛋白表达与临床病理参数之间的相互关系,并对随访患者进行生存分析。结果 HSP70蛋白在胃癌中阳性表达率为84%,在癌旁正常组织表达率为21.33%,差异有显著性。cyclin D1、p21蛋白在胃癌中阳性表达率为64.00%、34.67%,在癌旁正常组织表达率为5.33%、73.33%,在癌与癌旁组织的表达差异有显著性;HSP70蛋白表达与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关,cyclin D1、p21蛋白表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关。HSP 70与cyclin D1之间呈正相关(r=0.506,P=0.000);cyclin D1与p21之间呈负相关(r=0.388,P=0.001)。HSP70(+)组生存率(17.8%)与HSP70(-)组(66.7%)相比,差异有显著性(χ2=4.052,P=0.044)。结论在胃癌的演变中,p21的失活和cyclin D1、HSP70等的过表达,可能引起细胞异常增殖和分化失控,最终导致肿瘤发生与发展。

非小细胞肺癌患者血清热休克蛋白90α的临床意义研究

目的了解非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)的临床意义。方法选取2013年1月—2014年5月,在郑州大学第一附属医院中西医结合内科、胸外科及呼吸内科接受住院治疗的NSCLC患者80例为肺癌组;另选取同时期在郑州大学第一附属医院进行体检的健康成年人30例为对照组。比较并分析两组血清HSP90α水平;比较不同肿瘤分期(TNM分期)患者血清HSP90α水平,探讨TNM分期与血清HSP90α水平的相关关系;根据中医辨证结果对肺癌组进行中医分型,比较不同中医分型患者的血清HSP90α水平。结果对照组与肺癌组血清HSP90α水平比较,差异有统计学意义(t=16.02,P<0.05)。不同TNM分期患者的血清HSP90α水平比较,差异有统计学意义(F=14.98,P=0.00);Spearman秩相关分析显示,TNM分期与血清HSP90α水平呈正相关(rs=0.42,P<0.01)。不同中医分型患者的血清HSP90α水平比较,差异有统计学意义(F=4.22,P<0.01)。结论NSCLC患者的血清HSP90α水平较健康成年人高,TNM分期较高的患者,其血清HSP90α水平也较高。血清HSP90α水平可以反映NSCLC患者正邪、虚实的转变,有望成为其中医辨证论治的客观依据,可作为NSCLC患者的肿瘤标志物,在预测疾病的发生、发展方面具有较高的临床意义。

热休克蛋白90促进糖尿病创面愈合的作用研究

目的:研究HSP90在糖尿病性难愈创面中的作用。方法:在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠背部做d=2cm的全层皮肤缺损模型,并随机分为四组:空白组(B组)、HSP90组(C组)、胰岛素组(D组)及HSP90与胰岛素联合用药组(E组)。另设一组正常大鼠同样在背部做d=2cm全层皮肤缺损模型作为对照组(A组),每组n=(5n1+n2)=20只,共100只大鼠,在创面形成后即时给予难愈创面药物治疗持续2天,A组则不治疗。于创面形成后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天及第21天进行大体观察及活体取材做常规病理学观察,各时间点标本采用免疫组化ABC法观察HSP90,并计算其平均密度值及积分光密度值,观察其表达规律。结果:大体观察下,在计算第21天的创面愈合率后我们发现,C组(85.9%)、D组(86.8%)及E组(96.8%)相较于B组(79.7%)创面愈合率均有显著提高(P<0.05),其中E组疗效更加突出;而在镜下观察中,我们发现E组创面表皮增厚,上皮化活跃,表皮细胞排列规则,且HSP90在各时期的表达水平显著增高(P<0.05),C组与D组虽也有类似改变但不如E组显著。结论:HSP90能够提高糖尿病难愈性创面21天的愈合率,同时我们发现将HSP90与胰岛素联合应用后会取得更好效果,进一步提高创面21天时的愈合率。

热休克蛋白90在预热适应成纤维细胞中作用

目的建立小鼠成纤维细胞株NIHF-3T3应激适应细胞模型,探讨热休克蛋白90(HSP90)在应激适应中的作用及机制。方法通过预热适应(42℃,20min)建立应激适应细胞模型,并通过再次热应激时(44℃,40min)细胞膜损伤指标、DNA损伤指标、细胞形态学改变综合评价适应效果。以免疫细胞化学检测应激适应对细胞内HSP90合成和细胞内定位的影响。结果结合预适应后再次热应激所致的损害情况,初步确定预适应后6h为最佳应激保护时间。再次热应激时,细胞膜损伤指标、DNA损伤指标、细胞形态改变均表明预适应后预处理(42℃,20min)6h后,再次热应激时,培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出变化率、细胞DNA受损较直接热应激组为轻,细胞损伤状态减轻。热应激40min后细胞内HSP90含量均呈现下降趋势,并伴有细胞内的重新分布。结论通过对NIH-3T3细胞进行预适应处理,通过观测细胞膜损伤、DNA损伤、细胞形态变化情况,确定应激保护的时间点,建立了细胞应激适应模型,初步确认HSP90在该模型中的保护作用。