血清N末端B型利钠肽原和胰岛素样生长因子结合蛋白7及热休克蛋白47联合检测在慢性心力衰竭患者诊断中的应用价值分析

目的探讨血清N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)、胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)、热休克蛋白47(HSP47)联合检测在慢性心力衰竭(CHF)患者诊断中的应用价值分析。方法选取2021年12月至2023年12月唐山中心医院收治的CHF患者(n=106)为CHF组,另选取同期在本院健康体检者(n=106)为对照组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定两组血清NT-pro BNP、IGFBP7、HSP47表达水平,多因素logistic回归分析影响CHF发生的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析其对CHF患者的诊断价值。结果CHF组血清NT-pro BNP、IGFBP7、HSP47水平与对照组相比,明显升高(t=0.960、8.047、11.196,P<0.05)。血清NT-pro BNP、IGFBP7、HSP47三者联合诊断CHF的AUC最高,高于单独检测(Z_(三者联合-NT-pro BNP)=3.847、P=0.001,Z_(三者联合)-IGFBP7=4.672、P<0.001,Z_(三者联合-HSP47)=2.101、P=0.036)。多因素logistic结果显示,血清NT-pro BNP、IGFBP7、HSP47水平是影响CHF的危险因素(P<0.05),左心室射血分数(LVEF)是影响CHF的保护因素(P<0.05)。结论CHF患者血清中NT-pro BNP、IGFBP7、HSP47表达水平升高,三者联合诊断CHF的效能最好。

大鼠热休克蛋白72基因真核表达载体构建及在COS7细胞中的表达

背景:体外克隆、表达热休克蛋白,尤其正常时少量或不表达,而应激时大量表达的热休克蛋白72对研究其缺血再灌注损伤中的作用尤为重要。目的:构建热休克蛋白72基因真核表达载体并于COS7细胞内表达,为HSP72蛋白免疫调节功能的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR技术从BABL/C大鼠肝细胞中扩增出热休克蛋白72cDNA,经限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的相应酶切位点,并将重组质粒转染COS7细胞,进行基因表达鉴定。结果与结论:重组质粒插入基因序列检测证实为热休克蛋白72cDNA,并能在COS7细胞稳定表达。成功构建热休克蛋白72真核表达载体,并于COS7细胞中成功转录与表达。

雌孕激素对乳腺癌MCF-7细胞热休克蛋白mRNA水平的影响

目的:研究一定浓度雌、孕激素作用于MCF-7细胞一定时间后,细胞中VEGF、Hsp70、Hsp90和NF-κBp50 mRNA水平上的变化,进而揭示雌、孕激素对乳腺癌MCF-7细胞株作用的分子生物学机制。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞株,分4组给予不同处理因素,分别为对照组、雌激素组、孕激素组和雌孕激素混合组。给药72h后MTT法测细胞570nm分光光度值。RT-PCR法观察各组Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA表达水平。结果:与对照组相比,10-9mol/L雌激素促进细胞生长作用最明显,10-7mol/L孕激素本身对MCF-7细胞生长无明显影响,但在雌、孕激素混合组孕激素部分抑制雌激素促细胞增殖作用,具有统计学意义。与对照组相比,雌激素上调细胞中Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50mR-NA水平;孕激素组Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA水平与对照组差异无统计学意义。孕激素可以部分抑制雌激素对MCF-7细胞Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA的上调作用。结论:雌激素促进乳腺癌细胞生长,可能是雌激素与癌细胞受体结合后通过某种途径刺激Hsp70、Hsp90、NF-κBp50及VEGF的表达,进而抑制癌细胞的凋亡,促进细胞增殖。孕激素通过抑制雌激素对Hsp70、Hsp90、NF-κBp50和VEGF mRNA的上调作用,进而抑制其促进细胞增殖作用。雌、孕激素促进或抑制细胞增殖,与其对Hsp70、Hsp90、NF-κBp50及VEGF基因的调控是密切相关的。

人乳头瘤病毒6型E7与结核杆菌热休克蛋白70融合基因的构建及原核表达

目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插入HSP70基因的5'端,构建HPV6E7与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E7-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,进行诱导表达和分离纯化。结果:成功地构建了pGEX-E7-HSP70原核表达质粒;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,经异丙醇-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达相对分子质量约为108000的蛋白;经谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达系统纯化,得到E7与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论:成功获得HPV6型E7与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究该融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用奠定了基础。

热休克蛋白70及基质金属蛋白酶-7和EHD2蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)和EHD2蛋白在结直肠癌(CRC)组织中的表达及意义。方法选择2012年3月至2013年8月齐齐哈尔医学院附属第二医院收治的63例CRC患者的癌组织和癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学染色法检测CRC组织和正常结直肠组织中HSP70、MMP-7和EHD2蛋白的表达,并分析HSP70、MMP-7和EHD2蛋白表达与CRC临床病理特征及患者5 a生存率的关系。结果 CRC组织中HSP70、MMP-7、EHD2蛋白阳性表达率分别为66.67%(42/63)、73.02%(46/63)、19.05%(12/63),正常结直肠组织中HSP70、MMP-7、EHD2蛋白阳性表达率分别为11.11%(7/63)、14.29%(9/63)、77.78%(49/63); CRC组织中HSP70、MMP-7阳性表达率显著高于正常结直肠组织(χ~2=40.909、44.173,P<0.05),CRC组织中EHD2阳性表达率显著低于正常结直肠组织(χ~2=43.504,P<0.05)。HSP70、MMP-7和EHD2蛋白表达与CRC患者的性别、年龄、肿瘤直径及肿瘤部位无相关性(P>0.05); HSP70、MMP-7和EHD2蛋白表达与CRC分化程度、Duke分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05),CRC分化程度越低、Dukes分期越差及有淋巴结转移,HSP70和MMP-7阳性表达越高,EHD2阳性表达越低。63例患者均获得5 a随访,生存43例(68.3%),病死20例(31.7%)。HSP70阳性表达患者5 a生存率为59.52%(25/42),HSP70阴性表达患者5 a生存率为85.71%(18/21); MMP-7阳性表达患者5 a生存率为60.87%(28/46),MMP-7阴性表达患者5 a生存率为88.24%(15/17); EHD2阳性表达患者5 a生存率为100.00%(12/12),EHD2阴性表达患者5 a生存率为60.78%(31/51); HSP70和MMP-7阳性表达患者5 a生存率低于阴性表达患者(χ~2=4.260、3.902,P<0.05),EHD2阳性表达患者5 a生存率高于阴性表达患者(χ~2=5.893,P<0.05)。结论HSP70、MMP-7和EHD2的表达可能与结直肠癌的发生发展有关,可作为判断结直肠癌预后的指标。

热休克蛋白90靶向抑制剂多肽P7联合替莫唑胺协同抗胶质母细胞瘤的作用

目的探讨双功能小分子多肽P7(序列LPLTPLP)联合替莫唑胺(TMZ)对人胶质母细胞瘤细胞系U87MG的影响。方法以TMZ与P7单用或联用处理U87MG细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测U87MG细胞凋亡水平,蛋白质免疫印迹法检测U87MG细胞凋亡相关蛋白水平。以溶剂作对照。结果TMZ和P7均能抑制U87MG细胞的生长,当P7与TMZ浓度比为1∶1时,协同作用最明显;与对照组比较,联合给药组的U87MG细胞凋亡率显著升高(P<0.01),cleaved caspase-9和cleaved caspase-3表达水平显著升高(P<0.05)。结论P7联合TMZ能协同抑制U87MG细胞活力,并促进其凋亡,其机制可能与显著上调促凋亡蛋白cleaved caspase-9和cleaved caspase-3水平有关。

普伐他汀对大鼠急性心肌梗死后热休克蛋白B7表达的影响

目的观察急性心肌梗死(AMI)大鼠梗死区心肌组织中热休克蛋白B7(HSPB7)mRNA和蛋白的表达水平,研究普伐他汀对HSPB7表达的干预作用。方法 80只AMI大鼠随机分为AMI组和普伐他汀(P)组,每组40只,同时设假手术(SH)组大鼠40只,再将3组大鼠分为1、3、6和12 h组,每个时间组10只。SH组开胸后不结扎冠脉;AMI组开胸后结扎冠状动脉左前降支;P组开胸后结扎冠状左前降支,同时给予普伐他汀0.5 mg/(kg·d)灌胃;其余组给予等量蒸馏水灌胃。分别于各时间点处死大鼠,取左心室梗死区心肌组织,SH组取对应部位的心肌组织,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测HSPB7 mRNA和蛋白的表达。结果 AMI组和P组大鼠各时点梗死区心肌组织HSPB7 mRNA和蛋白表达均高于SH组(P<0.01);梗死后1 h,梗死区心肌HSPB7 mRNA和蛋白的表达增加,在3 h时达到高峰,6 h组、12 h组HSPB7 mRNA和蛋白的表达仍高于SH组。且P组中各时间点HSPB7的表达高于AMI组。结论 HSPB7能够在AMI早期表达,普伐他汀可促进AMI后梗死区心肌组织HSPB7表达,可能是其在心梗早期起到保护心肌作用的机制之一。

大鼠HSPB7蛋白的表达、活性研究及抗体制备

目的克隆SD大鼠热休克蛋白HSPB7基因,通过原核表达、纯化获得HSPB7蛋白,对其活性进行初步研究,并制备其多克隆抗体,为进一步研究HSPB7蛋白奠定基础。方法从SD大鼠心脏组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到HSPB7基因,亚克隆入pET-43.1a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,获得可溶性表达产物。经纯化、质谱鉴定后进行生物学活性研究,并用纯化蛋白免疫新西兰兔,分离血清,Westernblot法测定抗体效价和特异性。结果原核表达载体pET-43.1a-HSPB7成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量(Mr)约18600的HSPB7蛋白,纯化蛋白经质谱鉴定正确。HSPB7具有分子伴侣活性,这种活性具有温度依赖性。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备的多克隆抗体效价达1∶16000,且具有较强免疫特异性。结论得到具有生物学活性的大鼠HSPB7蛋白,成功制备了兔抗大鼠HSPB7蛋白的多克隆抗体,为后续研究提供了重要的实验材料。

人源热休克蛋白HSC70与HPV16型E7融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

目的克隆人热休克蛋白HSC70的N端具有ATPase活性的结构域(简称为A基因)与HPV16型E7的融合基因,在大肠杆菌中表达,并纯化获得有生物活性的AE7融合蛋白。方法利用PCR方法扩增获得A基因片段,插入原核表达载体pET29b中,再通过PCR方法扩增HPV16型E7基因片段,插入A基因的3′端,构建原核表达质粒pET29b-AE7,并转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物经离子交换层析和金属螯合层析纯化后,在一定的剂量下皮下免疫小鼠,检测对HPV-16的E7基因感染的预防及治疗作用。结果重组质粒pET29b-AE7经DNA序列测定确认。SDS-PAGE检测,表达产物分子量为66kD,大部分为包涵体。纯化后产物经SDS-PAGE电泳分析纯度>90%。纯化产物AE7在一定的剂量下皮下免疫小鼠,对HPV-16的E7基因的感染有预防及治疗作用。结论AE7融合蛋白的获得为进一步临床研究奠定基础。

复方丹参滴丸对大鼠急性心肌梗死后热休克蛋白B7表达的影响

目的:观察复方丹参滴丸对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarct,AMI)后热休克蛋白B7表达的影响。方法:选取80只大鼠制备急性心肌梗死模型,将造模成功的80只急性心肌梗死大鼠随机分为心肌梗死(AMI)组和复方丹参滴丸(D)组,每组40只;剩余40只制备假手术组(SH),再将3组大鼠分为1 h组、3 h组、6 h组和12 h组,每个时间组各10只。SH组开胸后不结扎冠脉,AMI组开胸后结扎冠状左前降支,D组开胸后结扎冠状左前降支,同时给予复方丹参滴丸70 mg·(kg·d)^(-1)灌胃,其余组给予等量蒸馏水灌胃。于上述各时间点处死大鼠取出心肌梗死组织,使用免疫组织化学法检测HSPB7蛋白表达,RT-PCR法测定HSPB7 mRNA表达。结果:与SH组比较,AMI组和D组在各时间点上心肌组织中HSPB7蛋白和mRNA的表达,差异均有统计学意义(P<0.001);心肌梗死1 h后HSPB7的表达开始升高(P<0.05),3 h达到高峰,6 h组、12 h组与假手术组比较,HSPB7的表达仍高,差异具有统计学意义(P<0.05),且在每个时间点上,AMI组HSPB7表达低于D组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在AMI早期HSPB7即可表达,且复方丹参滴丸对心肌梗死组织中的HSPB7表达起到促进作用,可能是其在AMI早期对心肌细胞起到保护的机制之一。

热疗促进HSP70表达对免疫效应细胞杀伤肿瘤的影响

目的: 探讨热疗通过促进乳腺癌药物敏感细胞株与多药耐药细胞株表达热休克蛋白 (HSP)70,提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性。为开展基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据。方法: 采用IFNγ、CD3单抗、IL 1和IL 2等细胞因子诱导并扩增免疫效应细胞。分别给予乳腺癌药物敏感株MCF7和耐受株MCF7 /ADR非致死温度热冲击 42℃ 1h,继续培养 4h, 24h, 48h后收获细胞,用流式细胞术检测靶细胞上HSP70的表达。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定靶细胞增殖活性以及免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性。结果: HSP70在两种靶细胞上的表达有差异,加热前MCF7 /ADR细胞HSP70表达明显高于MCF7,加热后 4h,HSP70在MCF7 /ADR表达提高了 6倍,在MCF7表达提高了 22倍,超过了耐药株。药物敏感株MCF7增殖的热抑制率低于耐药株MCF7 /ADR。热冲击前免疫效应细胞对MCF7细胞的杀伤活性低于MCF7 /ADR细胞。热冲击后免疫效应细胞对MCF7的杀伤活性提高了 86. 23%,超过了对MCF7 /ADR的杀伤活性 (提高了 30. 32% )。结论: 热疗明显提高HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的表达,增加了免疫效应细胞对这两种靶细胞的杀伤活性。HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的差异性表达对免疫效应细胞的杀伤活性有影响。

热适应/热射病大鼠血清中microRNA let-7b的变化及意义

目的探究热适应/热射病大鼠模型血清中microRNA let-7b表达的变化及其与HSP70,IL-6,TNF-αTGF-β和IL-12的相关性,分析其临床意义。方法在第二军医大学实验动物中心选取肛温、体重、用龄基本一致的雄鼠60只随机均分为对照组、热适应组、热射病组,于仿真热气候动物舱中建立热适应/热射病大鼠模型后采集心尖血并分离血清。以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中microRNA let-7b,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HSP70,IL-6,TNF-α,TGF-β和IL-12的蛋白水平。三组间计量资料的比较采用Kruskal-Wallis H检验,以Spearman秩相关系数表示热射病组两变量之间的相关性。结果 miRNA let-7b在对照组、热适应组、热射病组的M分别为0.99,1.04和1.93,Q分别为0.30,0.25和0.44,差异具有统计学意义(x^2=38.95,P<0.001),组间两两比较结果显示let-7b在对照组与热适应组表达差异无统计学意义(P>0.05),在对照组与热射病组、热适应组与热射病组表达差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示热射病组let-7b/与HSP70,TNF-α和IL-6呈正相关,差异具有统计学意义(r_s=0.579,0.498和0.609,P<0.05)。结论 miRlet-7b可能参与了热射病病理过程,为临床监测高温湿环境下患者的状态提供了潜在的评价指标。

血清铁蛋白、P2X7R、HSP70在痛风患者中的表达及其临床价值

目的分析血清铁蛋白(SF)、胞膜上嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)、热休克蛋白70(HSP70)在痛风患者中的表达及其临床价值。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月十堰市太和医院收治的痛风患者83例,将其纳入观察组。另选取同期83例高尿酸血症患者,将其纳入对照组。比较两组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平,分析观察组组内SF正常组(n=33)、SF升高组(n=50)、急性期组(n=52)和慢性期组(n=31)患者血清SF、P2X7R、HSP70水平,探讨其诊断价值。结果观察组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(546.99±16.24)mg/m L、(678.98±20.19)pg/m L、(53.29±2.19)ng/m L,均高于对照组[(325.18±16.29)mg/m L、(384.29±20.17)pg/m L、(11.17±2.15)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。SF正常组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(646.89±12.64)mg/m L、(795.91±18.32)pg/m L、(65.97±4.06)ng/m L,均低于SF升高组[(415.81±15.29)mg/m L、(466.29±18.36)pg/m L、(36.98±4.01)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。急性期组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(598.02±32.14)mg/m L、(741.28±32.15)pg/m L、(72.15±12.69)ng/m L,均高于慢性期组[(308.47±32.19)mg/m L、(365.28±32.16)pg/m L、(40.25±12.61)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。血清SF水平升高导致P2X7R、HSP70水平升高,血清SF水平与P2X7R、HSP70水平呈正相关(P<0.05)。血清SF、P2X7R、HSP70联合诊断痛风价值高于任何单一血清SF、P2X7R、HSP70指标或任2项指标。结论痛风患者血清SF、P2X7R、HSP70水平明显升高,且联合检测能明显提升痛风诊断价值,推荐使用。

CEA、CA199、CA724及HSP60在胃癌患者血清中的表达及应用价值

目的:探讨肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA199)、糖类抗原7-24(CA724)及热休克蛋白60(HSP60)在胃癌患者血清中的表达及应用价值。方法:采用电化学发光法和酶联免疫法检测胃癌组与正常对照组血清CEA、CA199、CA724及HSP60水平,分析其与胃癌淋巴转移、临床分期的关系及4项指标单一、联合检测的阳性率。结果:CEA、CA199、CA724及HSP60在胃癌组中的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);血清CEA、CA199、CA724及HSP60的阳性率与胃癌淋巴转移、临床分期有关(P<0.05);4项指标联合检测阳性率达74.36%,明显高于单项指标检测(P<0.05)。结论:胃癌患者血清CEA、CA199、CA724及HSP60水平与胃癌的发生、发展关系密切,联合检测血清水平变化对胃癌诊断及病情变化的判断具有重要意义。

肿瘤抑制基因p53通过热休克蛋白B7抑制前列腺癌增殖、迁移从而抑制前列腺癌的进展

目的探讨热休克蛋白B7(HSPB7)对前列腺癌增殖、迁移的影响及其作用机制。方法使用肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)数据库比较2006年到2021年525例前列腺癌和83例正常组织中基因HSPB7的差异表达。将人前列腺癌细胞系22RV1和DU145分为对照组和实验组,分别转染空质粒和HSPB7质粒,转染2 d后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、平板克隆形成实验、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色实验验证细胞的增殖能力;采用划痕愈合实验和Transwell实验验证细胞的迁移能力,采用蛋白质印迹法分析去基化药物5-Aza-dC以及抑癌基因p53与HSPB7的靶向关系。两实验组间比较采用独立样本t检验,多实验组间比较采用方差分析。结果对照组细胞EdU着色细胞比例高于实验组[22RV1:(13.250±0.508)%比(7.439±0.172)%,t=10.840,P<0.05;DU145:(31.280±0.680)%比(7.708±0.369)%,t=30.460,P<0.05]、培养96 h后吸光度高于实验组(22RV1:1.742±0.563比1.315±0.651,F=16.520,P<0.05;DU145:1.960±0.443比1.578±0.469,F=28.850,P<0.05)、克隆形成数高于实验组(22RV1:407.700±5.548比164.700±7.839,t=25.300,P<0.05;DU145:503.700±6.438比301.300±5.783,t=23.380,P<0.05)、划痕愈合率高于实验组[22RV1:(20.690±0.8903)%比(3.458±0.6731)%,t=15.440,P<0.05;DU145:(51.620±2.460)%比(29.400±2.508)%,t=6.323,P<0.05]、迁移细胞数高于实验组(22RV1:78.250±7.420比23.750±2.869,t=6.851,P<0.05;DU145:218.000±6.285比58.000±5.492,t=19.170,P<0.05)。抑癌基因P53过表达组HSPB7蛋白表达量高于对照组(22RV1:1.025±0.020比1.999±0.057,t=16.130,P<0.05;DU145:1.043±0.040比2.350±0.057,t=18.870,P<0.05)。结论HSPB7在前列腺癌组织中被甲基化从而导致表达下调,HSPB7通过抑制前列腺癌细胞增殖和迁移从而抑制前列腺癌的进展,且这种作用受到抑癌基因p53的调控。

解毒活血中药对急性冠脉综合征患者PCI术后HSP60及MMP-7表达的影响

目的观察解毒活血中药对急性冠脉综合征患者PCI术后热休克蛋白(HSP60)及基质金属蛋白酶(MMP-7)表达的影响。方法将50例急性冠脉综合征PCI术后患者随机分为两组,对照组25例予西药常规治疗,治疗组25例在对照组治疗基础上加用活血解毒之四妙勇安汤;治疗前后检测血清HSP60及MMP-7水平。结果治疗组HSP60及MMP-7表达水平均较对照组显著降低,其临床疗效亦优于对照组。结论解毒活血中药能明显降低急性冠脉综合征患者PCI术后血清HSP60及MMP-7表达水平,抑制PCI术后炎性反应。

HspB1和HspB6磷酸化的生物学功能

小热休克蛋白(sHSP)是热休克蛋白中的一种,几乎存在于所有生物体中。低聚物复合体的形成会伴随着HspB6和HspB1这两种小热休克蛋白结构的相互变化,这些结构上的变化反映在不同蛋白激酶的活性变化上,这些蛋白激酶能够使HspB6和HspB1在体内外发生磷酸化,从而影响生物功能。sHSP具有维持细胞蛋白的稳定、参与调节细胞的生长和分化、抑制细胞凋亡和免疫学等功能。以HspB1和HspB6为例,探讨sHSP被不同的蛋白激酶磷酸化及磷酸化作用对其生物学功能的影响。

激活原代星形胶质细胞α7尼古丁胆碱能受体对PI3K/Akt/HSP70信号通路的影响

目的研究尼古丁激活星形胶质细胞α7尼古丁胆碱能受体(nAChR)对热休克蛋白(HSP)70表达的影响,探讨激活α7nAChR对阿尔茨海默病(AD)的神经保护作用及其机制。方法从刚出24 h内的小鼠的大脑皮质中分离出原代星形胶质细胞,培养并进行细胞纯度鉴定。将培养好的星形胶质细胞分为空白对照组、尼古丁组、α7nAChR阻断剂MLA组、MLA+尼古丁组、PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002组和LY294002+尼古丁组。用Western印迹法检测细胞内HSP70及P-Akt蛋白的表达情况。结果与对照组相比,尼古丁组中HSP70的表达水平显著升高(P<0.01);与尼古丁组相比,MLA+尼古丁组中HSP70蛋白表达水平受到明显抑制(P<0.05);LY294002+尼古丁组中HSP70蛋白表达水平明显受到抑制(P<0.05);且尼古丁可以显著上调P-Akt蛋白水平(P<0.05),该上调效应能被MLA或LY294002抑制(P<0.05)。结论尼古丁激活星形胶质细胞α7nAChRs,可通过PI3K/Akt信号通路上调HSP70蛋白表达水平。

hMAM融合HSP70基因真核表达载体的构建及其免疫学活性测定

目的构建融合人乳腺珠蛋白(hMAM)与人热休克蛋白70(HSP70)基因的真核表达载体pcDNA3.1-hMAM-HSP70,为乳腺癌的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法扩增hMAM基因,酶切测序分析后,与人HSP70基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建重组载体pcDNA3.1-hMAM-HSP70,采用电穿孔法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法和ELISA法检测目的基因的表达。结果成功扩增HSP70与hMAM基因,酶切测序结果表明,重组载体含有hMAM与人HSP70的融合基因,COS-7细胞中可检测到hMAM表达;重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗HSP70抗体。结论hMAM与人HSP70融合基因的真核表达载体构建成功;此为进一步进行乳腺癌的基因治疗提供了实验依据。