脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。

合浦珠母贝热休克蛋白hsp70基因的克隆与表达分析

采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为71.39 kD,理论等电点为5.22,并含有3个HSP70家族的签名序列IDLGTTYS、DLGGGTFD和EEVD。同源性分析表明,合浦珠母贝HSP70的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)等双壳贝类的相似性高达86%以上,基于氨基酸序列的聚类分析表明,合浦珠母贝与牡蛎属种类亲缘关系最近。高温、高盐刺激后,半定量RT-PCR检测发现hsp70基因的表达明显增加,高温刺激的表达量高于高盐刺激,高温刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、消化腺、外套膜、肌肉、性腺,高盐刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、外套膜、肌肉、消化腺、性腺,表明HSP70参与了机体对刺激的应答过程。该基因的克隆为进一步深入研究合浦珠母贝的抗逆机理及其遗传改良奠定了重要基础。

褶纹冠蚌热休克蛋白HSP70基因的克隆及表达研究

运用兼并引物结合RT-PCR方法从褶纹冠蚌(Cristaria plicata)血细胞中克隆出热休克蛋白70(HSP70)的cDNA序列。用半定量PCR方法研究了HSP70mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达情况。结果表明:HSP70cDNA全长为2 664bp,5’非编码区364个核苷酸,3’非编码区383个核苷酸,开放阅读框为1 917bp,编码638个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论等电点为5.61,分子量为70.3kD。HSP70基因不含内含子。氨基酸序列分析发现,推导的氨基酸序列含有HSP70家族的3个标签序列(I10DLGTTYS17,V198FDLGGGTFDVSIL211和V336VLVGGSTRIPKV QK350)。氨基酸序列同源性比较显示HSP70与紫贻贝(Mytihcs galloprovincialis)和美洲牡蛎(Crassostrea virginica)氨基酸序列同源性分别为79.47%和77%。半定量PCR分析显示在正常褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃、闭壳肌和肝胰腺5种组织中均能检测到HSP70的基因表达。经过热休克或病原菌刺激后,蚌各组织中HSP70mRNA的表达显著增加,其中热休克处理后,蚌的鳃和血液中HSP70mRNA表达量增加最为显著;而嗜水气单胞菌刺激后蚌的肌肉和鳃组织中HSP70mRNA表达量增加最明显。

核盘菌热休克蛋白Hsp70基因的克隆及功能分析

为明确核盘菌热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)基因在菌核形成过程中的功能及其与病菌致病力的关系,本研究采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法克隆核盘菌Hsp70基因并进行序列分析,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法测定基因在病菌不同生长阶段、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)及低温和高温胁迫下的相对表达量;对Hsp70蛋白进行耐热性检测;通过农杆菌介导法构建Hsp70基因沉默转化菌株,采用离体油菜叶片接种法进行致病力检测,在含腐霉利和甲基托布津药物培养基中进行耐药性检测。结果表明,核盘菌Hsp70基因全长1890 bp,与叶杯菌属(Ciborinia)的Hsp70亲缘关系较高;Hsp70在菌核中表达量最高,为菌丝中的30倍以上,cAMP胁迫显著诱导Hsp70的表达,40℃下,Hsp70表达量呈先升后降再升高的趋势,4℃处理无显著影响;高表达Hsp70的重组菌株耐热性显著增加;核盘菌Hsp70沉默转化子不能形成菌核,其致病力和耐药性均下降。本研究揭示了Hsp70在核盘菌菌核形成及对抗不良环境中发挥重要作用,为下一步深入解析核盘菌Hsp70的生物学功能提供参考。

短指软珊瑚(Sinularia acuta)热休克蛋白HSP70家族特征及进化分析

热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)在生物细胞或组织免受热或氧化应激等方面起着关键作用,是已知高度保守的蛋白质之一。由于全球环境持续升温,珊瑚大面积白化、死亡,珊瑚如何应对持续升温的抗逆机制是科学研究热点。本研究从高温胁迫短指软珊瑚测序蛋白序列数据库分析鉴定出了28个HSP70蛋白家族成员,均为酸性亲水蛋白,大部分蛋白质结构较为稳定。亚细胞定位表明HSP70蛋白主要分布在珊瑚细胞核、细胞质中,在线粒体、内质网上也有少量分布。信号肽预测表明, 28个HSP70蛋白成员中26个没有信号肽,大部分不属于分泌蛋白,不存在跨膜结构。系统进化树结果表明短指软珊瑚HSP70蛋白家族成员聚成5大类。短指软珊瑚HSP70蛋白家族结构和保守基序分析中预测到了10条保守基序motif分为5个亚族。短指软珊瑚HSP70蛋白家族二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,α-螺旋的含量占比大。28个HSP70家族蛋白中有25个预测到了N-糖基化位点,且位点个数在1~9范围内。28个HSP70家族蛋白均预测到磷酸化位点和O-糖基化位点,总个数分别在41~96和1~23范围内。本研究HSP70家族蛋白结果为今后珊瑚在应对全球升温胁迫中的适应机制等方面研究奠定了基础。

热休克蛋白70在肺癌侵袭和转移中的研究进展

肺癌是一种对人类身心造成严重危害的疾病,是全球的重大公共卫生问题。目前,尽管靶向药物、化疗药物及免疫药物的联合使用使肺癌患者的生存期和生活质量得到提升,但复发和远处转移的发生意味着肺癌治疗面临新的困难。热休克蛋白70(Hsp70)作为一种在进化上高度保守的分子伴侣,在包括肺癌在内的多种实体肿瘤细胞中高表达,通过抑制细胞凋亡、促进肿瘤微环境的形成、诱导上皮间充质转化及维持癌症干细胞的干细胞特性,促进肺癌的侵袭及转移,因此通过研究Hsp70在肺癌侵袭及远处转移中的相关机制,寻找治疗肺癌的新靶点,并与目前的常规治疗结合,可能为肺癌的治疗提供新的治疗策略,该文就以上方面进行综述。

急性温度和盐度胁迫对罗氏沼虾热休克蛋白基因表达及抗氧化酶活性的影响

【目的】探究急性温度和盐度胁迫对罗氏沼虾热休克蛋白基因及抗氧化酶活性的影响,为实际生产中罗氏沼虾的健康养殖提供理论依据。【方法】采用双因素试验,设不同温度(20、24、28和32℃)和盐度(0.5‰、4.0‰、8.0‰和12.0‰),共16个处理组,将罗氏沼虾从初始温度(24℃)和盐度(0.5‰)环境转移至各处理组环境中进行急性胁迫,分别在胁迫24和48 h时采集罗氏沼虾鳃组织及肝胰腺组织,测定热休克蛋白70基因(HSP70)相对表达量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性。【结果】胁迫24 h时,在相同温度下,随着盐度的升高,罗氏沼虾鳃组织和肝胰腺组织HSP70基因相对表达量均整体呈先上升后下降的变化趋势;在0.5‰和4.0‰盐度下,温度为20、28和32℃时罗氏沼虾鳃组织和肝胰腺组织HSP70基因相对表达量均高于24℃,且肝胰腺组织HSP70基因相对表达量在温度为28和32℃时显著高于20℃(P<0.05,下同)。胁迫48 h后,温度为24℃时,8.0‰和12.0‰盐度下罗氏沼虾鳃组织及肝胰腺组织HSP70基因相对表达量均显著高于0.5‰与4.0‰盐度。胁迫24 h时,在相同温度下,随着盐度的升高,罗氏沼虾腮组织SOD和GPX活性均整体呈上升趋势;温度为24℃时,随着盐度升高,肝胰腺组织SOD和GPX活性均无显著变化(P>0.05),而在其他温度下出现明显变化;在相同盐度下,随着温度的升高,罗氏沼虾鳃组织SOD和肝胰腺组织GPX活性均整体呈先下降后上升的变化趋势,腮组织GPX活性和肝胰腺组织SOD活性均整体呈上升趋势。双因素方差分析结果表明,温度、盐度及其交互作用对罗氏沼虾鳃组织和肝胰腺组织HSP70基因表达与抗氧化酶(SOD和GPX)活性均有极显著影响(P<0.01)。【结论】急性温度和盐度胁迫会引起罗氏沼虾HSP70基因相对表达量升高,且温度骤升较温度骤降更能诱导HSP70基因表达。温度和盐度骤变能引起罗氏沼虾抗氧化酶活性变化,且温度对抗氧化酶活性的影响大于盐度。罗氏沼虾通过调控HSP70基因相对表达量、SOD活性及GPX活性协同调节生理机能以适应外部盐度和温度变化,增强对恶劣环境的耐受性。

慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织环氧化酶-2、热休克蛋白70表达的影响

目的:分析慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织中环氧化酶-2(COX-2)、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法:选取50只SPF级SD大鼠,10只大鼠作为对照组,另外40只建立痛风模型,将30只建模成功的大鼠分为模型组、药物对照组、慈苓化浊方组,每组10只。观察各组大鼠组织病理学、关节肿胀度、COX-2、HSP70表达、炎症因子、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)通路相关因子及其mRNA表达量。结果:与对照组相比,模型组、药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量升高,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量降低(均P<0.05)。与模型组相比,药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05)。与药物对照组相比,慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05)。结论:采用慈苓化浊方干预痛风大鼠,可降低大鼠关节肿胀程度,降低滑膜组织COX-2、HSP70表达,抑制炎症反应,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/FoxO1通路有关。

紫锥菊及其复方对热应激蛋鸡抗氧化功能、蛋白酶及HSP70的影响

本试验通过观察紫锥菊及其复方对热应激蛋鸡抗氧化功能、蛋白酶及HSP70的影响,初步探讨紫锥菊及其复方抗热应激的作用机制。试验选用250只60周龄健康的海兰白蛋鸡,随机分成5个组,紫锥菊复方组、紫锥菊组、电解多维组在基础日粮中分别添加1.0%紫锥菊复方、1.0%紫锥菊、0.1%电解多维,高温组和常温组仅饲喂基础日粮。紫锥菊复方组、紫锥菊组、电解多维组和高温组的蛋鸡饲养在33℃~35℃的环境中,常温组蛋鸡环境温度为24℃~26℃。在试验14 d、28 d、42 d、56 d,采集各组鸡胃、胰腺和脾脏组织,检测胃蛋白酶及胰蛋白酶活性、抗氧化活性及HSP70含量变化。结果表明,紫锥菊复方、紫锥菊及电解多维均可恢复热应激导致的蛋鸡胃蛋白酶活性降低,同时紫锥菊复方的效果显著优于紫锥菊及电解多维(P<0.05);紫锥菊复方和紫锥菊可显著提高热应激蛋鸡的胰蛋白酶活性(P<0.05);紫锥菊复方能显著提高热应激蛋鸡脾脏中SOD、GSH-Px的活性(P<0.05);紫锥菊复方、电解多维能恢复热应激蛋鸡脾脏组织T-AOC的水平;同时,紫锥菊复方及紫锥菊能改善热应激蛋鸡脾脏中HSP70的表达。结果提示,紫锥菊复方及紫锥菊可以提高热应激蛋鸡的抗氧化活性、蛋白酶水平及HSP70的表达,并且紫锥菊复方的效果更佳。

热休克蛋白70在心血管疾病中的研究进展

热休克蛋白70(Hsp70)是进化上高度保守的一种蛋白质,具有多种生物学功能,并在维持细胞稳态中发挥重要作用。病理条件下,Hsp70异常表达会影响心血管疾病的发生与进展。因此,本文对Hsp70结构、功能及其在2型长QT综合征、心肌缺血再灌注损伤、扩张型心肌病等疾病中的作用机制作一综述,并探讨可进一步深化研究的方向。

妊娠期糖尿病171例血清热休克蛋白70、热休克转录因子1表达与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病病人(GDM)血清热休克蛋白70(HSP70)、热休克转录因子1(HSF1)的表达水平及其与妊娠结局的关系。方法选取2019年1月至2021年1月在首都医科大学大兴教学医院收治的171例GDM病人作为GDM组,根据GDM病人妊娠结局分为妊娠结局不良组(91例)和妊娠结局良好组(80例),另选取同期在该院产检的健康孕妇172例作为对照组,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清HSP70水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定血清HSF1 mRNA的相对表达量,比较两组实验室指标。采用Pearson法分析GDM病人血清HSP70、HSF1 mRNA水平与临床指标的相关性;使用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析HSP70、HSF1及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、胱抑素C对GDM病人发生不良妊娠结局的预测价值。结果与对照组比较,GDM组病人空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)及肌酐、尿酸、hs-CRP、胱抑素C、HSP70[(0.30±0.10)μg/L比(0.21±0.09)μg/L]、HSF1 mRNA水平(1.99±0.35比1.03±0.32)明显升高(均P<0.05);对照组发生不良妊娠结局有13例,发生率为7.56%,GDM组病人发生不良妊娠结局有91例,发生率为53.22%,GDM组病人发生不良妊娠结局发生率远高于对照组(P<0.05);与妊娠结局良好组比较,妊娠结局不良组病人血清HSP70[(0.33±0.14)μg/L比(0.27±0.05)μg/L]、HSF1 mRNA(2.22±0.30比1.73±0.41)明显升高(均P<0.05);GDM病人血清HSP70与HSF1 mRNA水平呈正相关(P<0.05),血清HSP70、HSF1 mRNA水平与空腹血糖、HbA1c、肌酐、尿酸、hs-CRP及胱抑素C均呈正相关(均P<0.05);ROC曲线分析结果表明,HSP70、HSF1、hs-CRP、胱抑素C预测GDM病人发生不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.62、0.69、0.60、0.58;血清HSP70联合HSF1 mRNA预测GDM病人发生不良妊娠结局的AUC为0.83,明显高于血清HSP70、HSF1 mRNA及hs-CRP、胱抑素C水平单独预测(均P<0.05)。结论GDM病人血清HSP70、HSF1呈高表达,且二者联合检测对妊娠结局具有较高的预测价值。

过表达热激蛋白70促进C2C12细胞糖酵解相关基因表达

本文旨在研究热激蛋白70(70-kD heat shock proteins,Hsp70)过表达对C2C12细胞成肌成脂状态下糖酵解的影响。本文以C2C12细胞为研究材料,采用腺病毒过表达Hsp 70基因,通过荧光定量PCR技术和Western印迹技术检测糖酵解基因的表达变化。研究表明,在C2C12细胞成肌分化的过程中,Hsp 70基因与Gsk3β、Pkm、Prkag3、Pfkm和Hk-2基因表达趋势基本一致,推测Hsp70在成肌分化过程中与糖酵解途径有关。细胞过表达Hsp 70在成肌分化后期能显著上调Gsk3β、Pkm、Prkag 3和Pfkm基因的表达(P<0.05),对Hk-2基因的表达未见显著影响(P>0.05)。C2C12细胞成脂诱导过程中,Hsp 70基因与Gsk3β、Pkm、Prkag3、Pfkm和Hk-2基因表达趋势基本一致,推测Hsp70在成脂诱导过程中与糖酵解途径有关。过表达Hsp 70时,C2C12细胞成脂诱导中后期,脂滴数量明显高于对照组,Gsk3β、Pkm、Prkag 3和Pfkm基因的表达显著上调(P<0.05),Hk-2基因的表达未见显著影响(P>0.05)。综上所述,Hsp70在C2C12细胞成肌成脂状态下,通过促进糖原分解为6-磷酸葡萄糖,从而加强糖酵解途径,为Hsp 70基因对C2C12细胞糖酵解的功能研究提供参考。

热休克相关蛋白HSPH1在宫颈癌组织中的表达及其与预后的相关性分析

目的:分析热休克蛋白家族H(Hsp110)成员1[heat shock protein family H(Hsp110)member 1,HSPH1]在宫颈癌组织中的表达及其与预后的相关性。方法:收集2018年2月至2021年1月首次确诊的60例宫颈癌患者的癌组织和相邻非癌组织。通过qRT-PCR检测HSPH1表达,分析其与肿瘤标志物、宫颈癌病理特征之间的关系,并通过Cox回归模型确定3年生存的独立预后因子。利用时间依赖性受试者工作特征(ROC)曲线评估HSPH1预测1年、2年和3年生存的临床价值,并通过外部数据库和细胞实验验证结果。结果:HSPH1在临床样本和GSE29570数据库宫颈癌组织中均呈高表达(P<0.05),且与CA125、CA19-9、CEA和SCCA呈正相关(均r>0,P<0.05)。高表达组(≥1.57)肿瘤大小≥4 cm、FIGOⅢ~Ⅳ期、淋巴结转移及淋巴血管空间侵犯比例均高于低表达组(P<0.05)。TCGA数据库和临床样本分析显示,高表达组患者生存率显著低于低表达组(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,HSPH1<1.57(HR=0.299,P=0.039)和无淋巴结转移(HR=0.245,P=0.003)是独立预后因子。HSPH1预测1年、2年和3年生存的曲线下面积分别为0.82、0.85和0.88。结论:HSPH1在宫颈癌组织中的高表达与患者较差的预后之间存在显著相关,HSPH1可作为宫颈癌预后评估和治疗靶点的潜在生物标志物。

血清核转录因子κB、高迁移率族蛋白B1和热休克蛋白70与热性惊厥患儿脑神经和心肌损伤的相关性分析

目的探讨热性惊厥(FS)患儿血清核转录因子κB(NF‑κB)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和热休克蛋白70(HSP70)水平变化,分析NF‑κB、MGB1、HSP70与脑神经和心肌损伤的关系。方法选取2020年1月至2021年12月徐州医科大学附属医院收治的FS患儿60例,其中单纯型FS患儿37例作为SFS组,复杂型FS患儿23例作为CFS组;选取同期不伴惊厥的发热患儿30例,作为对照组。比较3组患儿NF‑κB、MGB1、HSP70、血清脑源性神经营养因子(BDNF)、肌酸激酶同工酶(CK‑MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,采用Pearson相关分析探究NF‑κB、MGB1和HSP70与BDNF、CK‑MB和LDH的关系。结果3组BDNF、NF‑κB、MGB1、HSP70、CK‑MB和LDH比较差异均有统计学意义(P<0.05)。NF‑κB、HMGB1和HSP70与BDNF、CK‑MB和LDH均呈正相关(P<0.05)。结论FS患儿血清NF‑κB、MGB1、HSP70水平明显升高,且与患儿脑神经和心肌损伤相关。

热休克蛋白70与肺部疾病的相关性的研究进展

热休克蛋白70(HSP70)是应激状态或高温下能抑制细胞蛋白质变性或展开的蛋白质,在炎症因子表达、抑制细胞凋亡、抑制蛋白质聚集等方面发挥关键作用。该文阐述了国内外研究HSP70与肺癌、肺炎、肺结核、哮喘等肺部疾病发病机制的密切关系,为肺部疾病的快速诊断提供了新思路。

热休克蛋白70(hsp70)基因对利什曼原虫中国分离株的系统发育分析

目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并构建系统发育树,同时与国外利什曼原虫分离株的hsp70序列共同分析,观察利什曼原虫中国分离株在世界范围利什曼原虫的系统发育和分子进化中的地位。结果中国各流行疫区利什曼原虫均获得约1 300bp长度的hsp70基因片段,存在丰富的多态位点。中国23株利什曼原虫经hsp70基因分型聚集为四群,其中人来源的原虫分离株均在A群,为杜氏利什曼原虫(L.donovani),并分为杜氏利什曼原虫指名亚种(L.donovani)和杜氏利什曼原虫婴儿亚种(L.infantum)两个亚支;分离自新疆沙鼠或白蛉的6株利什曼原虫聚在B群,为都兰利什曼原虫(L.turanica);分离自新疆白蛉和内蒙古沙鼠的两株利什曼原虫为C群沙鼠利什曼原虫(L.gerbilli);分离自内蒙古蜥蜴和新疆白蛉的两株原虫为D群蜥蜴利什曼原虫(Sauroleishmania)。结论利什曼原虫中国分离株属于利什曼原虫亚属的不同种和蜥蜴利什曼原虫亚属,我国利什曼原虫分离株的种系发育复杂多样。

卡介苗热休克蛋白70基因修饰的树突状细胞疫苗体内抗瘤作用的研究

目的:探讨卡介苗热休克蛋白70 (BCG HSP70)基因修饰的树突状细胞(DCs)疫苗体内抗瘤效应。方法:从急性白血病患儿骨髓中培养未成熟树突状细胞(imDCs),形态学观察及流式细胞术鉴定后,利用脂质体2000将BCG HSP70基因转入imDCs细胞表面,免疫荧光单克隆抗体进行细胞表面修饰鉴定。取健康BALB/C裸鼠,第0天皮下接种HL-60细胞,第7~10天可形成皮下结节的白血病裸鼠模型,将其随机分为6组,移植瘤内分别接种PBS液、不做任何处理的imDC (imDC组);空载体(pDisplay)转染的imDC (imDC-neo组);重组载体(pDisplay-HSP70)转染的imDC (HSP70组);rhTNF-α (20 ng/ml)诱导的imDC (TNF-α组);以及pDisplay-HSP70转染 + rhTNF-α (20 ng/ml)诱导的imDC (HSP70 + TNF-α组)。每周1次,共2次,于给药第14天处死裸鼠。观察各组肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线;计算裸鼠体重的变化情况;以及HE染色观察肿瘤组织切片。结果:1) 骨髓培养的细胞形态特点及细胞表面标志均符合imDCs特征。共聚焦显微镜观察检测证实BCG HSP70表达在转染后的imDCs细胞表面。2) HSP70 + TNF-α组HLA-DR、CD80、CD86阳性率分别为(78.42 ± 8.01)%,(83.00 ± 6.75)%和(88.51 ± 4.44)%,明显高于HSP70组((55.13 ± 4.84)%,(59.93 ± 3.88)%和(62.33 ± 5.42)%)、TNF-α组((57.28 ± 5.63)%,(60.31 ± 6.20)%和(63.70 ± 3.78)%);HSP70组与TNF-α组比较无明显差异(p > 0.05)。3) 体内杀瘤效应:HSP70-DC组肿瘤体积变化(40.94)明显小于PBS对照组、imDC组及imDC-neo组(185.72,181.16和180.18),但大于HSP70 + TNF-α组(17.60) (p < 0.05)。HSP70-DC组、TNF-α组及HSP70 + TNF-α组肿瘤切片染色可见不同程度的核固缩、碎裂及溶解、空泡现象,以HSP70 + TNF-α组最明显。结论:BCG HSP70基因修饰的DC疫苗在小鼠体内可诱导出较强的杀瘤效应,且与细胞因子联合作用更强。

猪肺炎支原体中国分离株热休克蛋白Hsp70(Dnak)的全基因克隆及C末端基因的表达与免疫活性分析

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MHP)是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70,具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板,扩增了DnaK基因的全序列,将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1 803 bp,编码600 aa,第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较,发现Yin-1株与232株、J株、7 448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3%～99.4%,氨基酸同源性为99.2%～99.3%,而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64.5%～74.4%和59.3%～77%。这表明DnaK基因在种内高度保守,种间差异较大。以pET28a为载体构建重组质粒,原核表达DnaK C末端大小为1 kb左右的基因,对表达的蛋白进行纯化后,通过Western blot检测它的免疫活性。原核表达得到大小为41 ku的目的蛋白,经Western blot证实,纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应,具有免疫活性。

栉孔扇贝热休克蛋白70(HSP70)基因的BAC-FISH定位

利用BAC-FISH技术,将包含HSP70基因的BAC克隆定位到栉孔扇贝的一对同源染色体的长臂上。HSP70基因的染色体定位将对深入研究该基因的结构及功能并将其应用于生产实践提供基础支持。同时,本研究是首次对栉孔扇贝低拷贝基因进行染色体定位的实践,其结果将为栉孔扇贝的染色体的深入研究以及染色体鉴别等工作提供必要的参考。

热休克蛋白HSP70-hom2437位点基因多态性与煤工尘肺的关系

[目的]探讨HSP70-hom 2437 T/C位点基因多态性与煤工尘肺(CWP)的关系。[方法]选择中国西南两省225例确诊的CWP患者为病例组(Ⅰ期:n=134;Ⅱ+Ⅲ期:n=73+18),非CWP的294名接尘工人为对照组,均为男性,汉族。对研究对象进行问卷调查(接尘工种和接尘工龄,肺部疾病发生情况,吸烟情况等),采用PCR-RFLP方法进行多态性检测。[结果]HSP70-hom基因型频率分布在病例组和对照组间差异有统计学意义(x^2=11.209,P=0.026),经多因素Logistic回归分析对年龄、接尘时间以及吸烟指数分级等因素校正后,与接尘对照组比较,Ⅱ+Ⅲ期CWP患者HSP70-hom CC基因型频率明显增加,其调整OR=15.61,95%CI(1.25～194.6)。[结论]HSP70-hom 2437基因多态可能与中国西南汉族人群中CWP易感性有关,并可能与CWP严重程度有关。