骨骼肌细胞骨架蛋白和小分子热休克蛋白研究进展

细胞骨架蛋白是骨骼肌细胞具有重要功能的结构。中间丝蛋白desmin和膜骨架蛋白dystrophin是骨骼肌中重要的骨架蛋白 ,是研究运动性骨骼肌细胞微损伤的敏感指标。综述了近年关于骨骼肌细胞骨架蛋白和与细胞骨架蛋白损伤相关联的热休克蛋白的研究。热休克蛋白是有机体内源性保护蛋白 ,在应激条件下 ,这些蛋白合成增多 ,建立了独特的防御系统来维持细胞内蛋白的稳定 ,保证细胞的生存 ;小热休克蛋白对维持骨骼肌细胞骨架结构稳定和帮助其在损伤修复方面起关键作用。

热休克蛋白90β在结肠癌组织中的表达及其意义

目的:了解热休克蛋白90β(HSP90β)在结肠癌组织中的表达,并探讨其与肿瘤临床病理特征之间的关系。方法:运用SP免疫组织化学染色方法检测72例结肠癌组织和30例癌旁正常组织中HSP90β的表达情况,分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系。结果:HSP90β在结肠癌组织、癌旁正常组织中的表达阳性率分别为30/72(41.67%)、5/30(16.67%),两者间差异有统计学意义(P<0.05),HSP90β的表达水平与肿瘤的病理学分级之间有相关性(P<0.05),随着结肠癌分化程度的降低,HSP90β的阳性表达率升高,HSP90β与肿瘤Duke's分期之间无相关(P>0.05)。结论:HSP90β在结肠癌组织中的表达阳性率明显高于癌旁正常组织,HSP90β的高表达可能参与了结肠癌的恶性转化,有望作为结肠癌基因治疗的一个新靶点。

四氧化二氮染毒小鼠肺组织病理学改变及转化生长因子β1与热休克蛋白70的表达

目的探讨四氧化二氮(N2O4)中毒小鼠肺组织损伤特点,转化生长因子β1(TGF-β1)和热休克蛋白70(HSP-70)在肺组织的表达及意义。方法采用ICR小鼠N2O4吸入性染毒,于3 d后活杀,观察肺组织病理变化及用免疫组织化学方法检测TGF-β1和HSP-70的表达。染毒小鼠HE染色结果提示,肺组织有不同程度纤维化,TGF-β1和HSP-70表达明显增强。结论N2O4中毒小鼠肺组织可出现纤维化,TGF-β1和HSP-70在肺纤维化的发生发展过程中可能扮演着重要角色。

热休克蛋白对实验性肝纤维化中TGF-β_1的影响

【目的】观察热休克蛋白(HSP)高表达时在实验性肝纤维化大鼠中转化生长因子1(TGF-β1)表达情况,探讨肝纤维化发生过程中HSP对细胞因子TGF-β1的影响。【方法】用硫代乙酰胺诱导肝纤维化动物模型,采用免疫组化、计算机图像分析等技术,观察TGF-β1在正常对照组,肝纤维化模型组以及热休克反应后肝纤维化模型组中的表达和定位特点,检测HSP高表达时各组间TGF-β1的变化。【结果】TGF-β1在实验性肝纤维化发展时期,其表达增高差异有显著性(P<0.05)。热休克反应实验组中TGF-β1的表达可见明显降低(P<0.05)。【结论】TGF-β1在实验性肝纤维化发生发展中起着重要作用,而在HSP高表达时TGF-β1受到抑制。HSP可能通过抑制TGF-β1的产生而减缓肝纤维化发生。

犬颅脑枪弹伤后脑组织中热休克蛋白70和bcl-2的表达

【目的】研究犬枪弹伤后脑组织中热休克蛋白70(Heat Shock Protein70,HSP70)和bcl-2的变化规律。【方法】24只杂种犬,随机分为对照组,损伤组。采用德国小口径步枪子弹致犬颅脑额叶切线伤(TangentBrain Injury,TBI)。用免疫组织化学方法检测伤后2、6、12、24和48 h各不同时期弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中HSP70和bcl-2蛋白的表达。【结果】对照组脑神经元中HSP70和bcl-2蛋白表达弱,枪弹伤组挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中HSP70蛋白2 h开始增加(P<0.05),6 h时明显增加,12 h达高峰(P<0.01),24 h开始下降。bcl-2伤后2 h开始增加(P<0.05),24 h达高峰(P<0.01),48 h开始下降。【结论】HSP70和bcl-2蛋白在弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元均有表达,伤后两者在脑组织中表达分布范围不一致,HSP70先于bcl-2表达,可能共同参与细胞抗凋亡过程,相互间也可能存在着一定的调控作用。

诱导型热休克蛋白70在大鼠视网膜的表达及其对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的 检测锌离子诱导的HSP70 在大鼠视网膜的表达及HSP70 对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法 生理盐水前房加压灌注制作视网膜缺血再灌注 (RIR)损伤模型 ,腹腔注射硫酸锌诱导HSP70 表达 ,作为实验组 ;腹腔注射HSP表达抑制剂 -Quercetin(槲皮素 ) ,为实验对照组 ;另取大鼠不行任何处理作正常对照组。不同时间段作视网膜HSP70 免疫组化染色 ,视网膜病理 (HE)染色、神经节细胞 (RGCs)计数 ,视网膜透射电镜观察 ,比较各组差异。结果 实验组在注射硫酸锌后 10h即见视网膜节细胞层有HSP70 阳性表达 ,16h达高峰 ,7d后仍呈弱阳性表达 ,HSP70 主要在RGCs胞浆表达 ;正常对照组及实验对照组均呈阴性表达。RIR后实验组和实验对照组均有RGCs损失 ,其中RIR后 2 4h ,实验组RGCs计数多于实验对照组且有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,RIR后 3d、7d差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察显示实验组损伤轻于实验对照组。结论 腹腔注射锌离子可诱导大鼠视网膜的HSP70 表达 ,腹腔注射槲皮素可抑制此作用 ,HSP70 主要在RGCs胞浆表达 ;HSP70

HSP90和P23蛋白量和细胞亚定位在多发性骨髓瘤患者中的临床价值

目的寻找预测MM患者GC敏感性指标。方法以MM患者作为研究对象,采用ELISA法检测MM患者血清HSP90浓度,Western Blot检测MM患者PBMNC中P23蛋白表达,探讨其与GC抵抗的关系。结果 (1)MM患者血清HSP90含量明显比正常人高(P<0.05),且GC敏感组患者较GC抵抗组患者高(P<0.05),但各组P23血清浓度之间差异无统计学意义(P>0.05);(2)P23蛋白低表达患者和P23蛋白高表达患者治疗有效率分别为86%和33%,二者相比差异具有统计学意义(P<0.05),在5年随访中,前者生存率高于后者(P<0.05);(3)HSP90和P23蛋白在MM1.S、MM1.R细胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者均位于胞浆内,无定位意义。结论血清HSP90和P23蛋白表达能预测MM患者对GC的敏感性和生存情况,可用此指标指导临床用药。

HSP90辅侣蛋白P23预测多发性骨髓瘤患者对糖皮质激素的敏感性

本研究旨在寻找预测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者对糖皮质激素(glucocorticoid,GC)敏感性的指标。以地塞米松敏感细胞株(MM1.S)、地塞米松抵抗细胞株(MM1.R)、激素敏感和非敏感MM患者10名为研究对象,采用Western blot检测患者外周血单个核细胞(PBMNC)中HSP90和P23蛋白表达,探讨其与GC抵抗的关系。结果表明:HSP90、GR和IκB-α蛋白在MM1.S、MM1.R、正常人和MM患者PBMNC中表达无差异,而P23蛋白表达有明显差异。随着地塞米松浓度增加,MM1.S存活率逐渐下降,而MM1.R下降不明显。P23蛋白低表达患者7例,其中GC联合方案治疗有效者6例(有效率为86%),无效者1例(无效率为14%);P23蛋白高表达患者3例,其中GC联合方案治疗有效者1例(有效率为33%),无效者2例(无效率为67%),二者相比有显著性差异(P<0.05)。结论:P23蛋白表达可以预测MM患者对GC的敏感性,可以此指标指导临床用药。

焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关联。[方法]选择某焦化厂234名焦炉作业工人和130名无多环芳烃(PAHs)及其他毒物暴露者,采集外周静脉血,分离淋巴细胞,使用单细胞凝胶电泳实验评价DNA损伤;应用多聚酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测热休克蛋白70(HSP70)基因多态性;运用PHASE2.0.2遗传分析软件计算单倍型。[结果]焦炉工外周血淋巴细胞的Olive尾矩(OliveTailMoment,OTM)高于对照组(对数转换后分别为1.29±1.07、0.56±0.99),差异有极显著性(P<0.01)。焦炉工中,HSP70-1基因190位点C/C基因型携带者外周血淋巴细胞的OTM为2.19±0.65,高于G/C及G/G基因型携带者(分别为1.30±1.03、1.23±1.10),差异有极显著性(P<0.01);HSP70-2基因1267位点A/A、A/G及G/G基因型携带者OTM分别为1.23±1.02、1.27±1.06和1.42±1.18,三者间差异无显著性(P>0.05);HSP70-hom基因2437位点T/T、T/C及C/C基因型携带者OTM分别为1.32±1.09、1.25±1.01和0.83±0.96,三者间差异也无显著性(P>0.05)。焦炉工HSP70-hom基因2437位点、HSP70-1基因190位点和HSP70-2基因1267位点组成的单倍型对中,TCG/TCG单倍型对携带者DNA损伤程度较重(OTM为2.04±0.59),显著高于单倍型对中含一个TCG单倍型者(OTM为1.24±1.14)及不含TCG单倍型者(OTM为1.30±1.01),P<0.05。[结论]焦炉工外周血淋巴细胞HSP70-1基因190位点C/C基因型与TCG单倍型和DNA严重损伤有关联。

主动脉阻断前后心肌组织HSP72 mRNA的表达变化及意义

14例非发绀型先心脏病患者主动脉阻断(ACC)前后切取右心房心肌,采用RT-PCR测定心肌细胞HSP72 mRNA的相对表达水平。分别于转流前、主动脉开放后30 min和术后24 h测定血清心肌酶AST、LDH、CK和CK-MB的水平。结果本组患者ACC后HSP72的基因表达水平为0.708±0.106,较ACC前的0.611±0.165增高;CPB期间患者血清心肌酶明显升高(P均<0.05)。认为缺血缺氧可上调心肌细胞HSP72 mRNA的表达,这可能是心肌对缺血缺氧的一种内源性保护机制。

双歧杆菌对新生大鼠炎症反应及热休克蛋白70表达的影响

目的评价双歧杆菌(BF)对肠道内毒素(LPS)诱导炎症反应的保护作用,探讨BF抗炎症反应的机制。方法采用鼠替代奶(RMS)人工喂养的新生SD大鼠模型,按析因设计随机分为4组,2组用添加了LPS的RMS喂养,其中1组RMS中补充了BF;另2组用不添加LPS的RMS喂养,其中1组RMS中补充了BF。每天观察新生大鼠生长情况。5d后,取远端小肠HE染色观察组织学变化,取肺、小肠和肝组织采用蛋白质免疫印迹法检测热休克蛋白(HSP)70的表达水平。结果(1)LPS处理的2组新生大鼠,出现腹泻、腹胀、活动减少等表现,其中补充BF组新生大鼠程度较轻。新生大鼠的体质量增长受到LPS干预的影响(P<0.05),LPS处理组新生大鼠体质量增长明显慢于未LPS处理组,补充BF对体质量增长的影响差异无统计学意义(P>0.05)。(2)远端小肠组织学变化显示LPS破坏了小肠黏膜结构;添加BF的LPS处理组新生大鼠小肠黏膜损伤程度较轻。(3)在小肠、肝脏和肺组织中,HSP70表达水平受到LPS和BF的影响(P均<0.05),LPS和BF之间存在交互作用(P<0.05)。结论补充BF能减轻由LPS诱导的炎症对机体的损害,这种抗炎症作用可能与BF提高各脏器组织HSP70表达水平有关。

环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)参与人hsp90β基因的热诱导表达

为研究ｃＡＭＰ应答元件（ＣＲＥ）在人热休克蛋白ｈｓｐ９０β基因表达中的作用，构建了数个受ｈｓｐ９０β基因不同长度调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒．分别转染Ｊｕｒｋａｔ细胞并检测４２℃１ｈ热诱导前后 ＣＡＴ活性．结果发现删除ｈｓｐ９０β基因上游含ＣＲＥ片段（－１７３／－９１ｂｐ）后，ＣＡＴ的热诱导表达活性降低了６７％．电泳迁移率变更分析（ＥＭＳＡ）显示热休克后Ｊｕｒｋａｔ细胞的核抽提物中磷酸化的ＣＲＥＢ与该片段呈特异性结合．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验及ＰＫＡ活性检测发现ＣＲＥＢ的磷酸化程度及ＰＫＡ活性均随热诱导时间的延长而增加．以上结果表明：磷酸化的ＣＲＥＢ通过与ｈｓｐ９０β因上游的ＣＲＥ结合参与该基因的热诱导表达，并可能与ＰＫＡ传导途径有关．

HSP70与HSP27在鼻咽癌中的表达及其临床病理研究

目的探讨HSP70与HSP27在鼻咽癌中的表达及临床意义,并分析其表达的相关性。方法用免疫组化S-P法分别检测HSP70与HSP27在60例鼻咽癌组织中的表达。结果⑴HSP70,HSP27在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为70%(42/60)、65%(39/60);⑵HSP27阳性和阴性患者的平均生存期和中位生存期存在显著性差异(P<0.05);⑶HSP70阳性表达在鼻咽癌不同临床时期存在显著差异(P<0.05);⑷HSP70和HSP27的表达一致率为75%(45/60),存在显著相关性(P<0.05)。结论HSP70表达与鼻咽癌临床分期相关,但可能并不直接反映预后;HSP27表达在鼻咽癌预后中有一定意义;以上两种基因的综合表达情况在鼻咽癌临床分期和预后预测中有一定意义。