探讨不同剂量嗜热吸水链霉菌抗原诱导大棚肺动物模型

目的探讨不同剂量嗜热吸水链霉菌抗原是否能引起豚鼠大棚肺,及制作大棚肺动物模型的方法及最适宜的嗜热吸水链霉菌抗原剂量。方法 40只成年豚鼠随机分为A、B、C、D组,每组10只。B、C、D组为模型组,分别予嗜热吸水链霉菌抗原制剂1.0 mg(0.2 ml)1、.5 mg(0.3 ml)2、.0 mg(0.4 ml)3种剂量鼻内滴注;A组为对照组,予0.9%无菌生理盐水0.3 ml鼻内滴注。每周连续滴注3 d,连续滴注12周。结果 B组于第2周末,C、D组均于第1周末出现明显肺泡炎改变;B组于第4周末、C组于第3周末、D组于第2周末可见肉芽肿形成;C组在12周末可观察到肺成纤维细胞数目增多,B组无明显纤维化改变,D组豚鼠多在第3周因肺部感染死亡。模型组CT影像上均可见弥漫性磨玻璃影,后可见双肺多发性、边缘模糊的斑片状及微小结节状影,多呈小叶中心型。模型组肺组织均可见嗜热吸水链球菌生长。结论嗜热吸水链霉菌抗原可以在豚鼠引起典型大棚肺病变。1.5 mg(0.3ml)可作为构建嗜热吸水链霉菌抗原诱导的大棚肺动物模型的标准剂量。

采用嗜热吸水链霉菌单一抗原ST-omlA诱导小鼠大棚肺模型

目的探讨纯化的嗜热吸水链霉菌单一表面抗原能否诱导C57BL/6小鼠大棚肺模型。方法 C57BL/6小鼠20只,8周龄,雌性,体质量25～30 g,完全随机分为模型组和对照组,每组10只。模型组:纯化的嗜热吸水链霉菌表面抗原ST-omlA 0.2 mL(1 mg/mL)鼻内滴注,连续3 d/周,连续滴注4周;对照组:0.9%无菌生理盐水0.2 mL鼻内滴注,连续3 d/周,连续滴注4周。结果①组织病理学改变:模型组第2周末,可见肺泡炎改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第4周末,可见纤维化改变。对照组无异常。②免疫组织化学染色结果:模型组ST-omlA滴注后的第4周末,Ⅰ型胶原蛋白及血管内皮生长因子表达明显增多,呈阳性;对照组Ⅰ型胶原蛋白及血管内皮生长因子表达呈阴性。结论纯化的嗜热吸水链霉菌表面抗原ST-omlA抗原制剂可以诱导C57BL/6小鼠大棚肺模型。

雾化吸入和鼻内滴注嗜热吸水链霉菌诱导豚鼠大棚肺模型的比较

目的探讨雾化吸入嗜热吸水链霉菌抗原制剂能否诱导豚鼠大棚肺模型及比较雾化法和鼻滴法二者的差异。方法成年豚鼠40只,体重300～400g,雌性,随机分为模型组(雾化组A1、鼻滴组B1)和对照组(雾化组A2、鼻滴组B2),每组20只。A1组:嗜热吸水链霉菌抗原制剂5mL日1次雾化吸入,15min/次,连续12周;B1组:0.3mL抗原制剂鼻内滴注,连续3次/周,连续12周;A2组:0.9%无菌生理盐水5mL日1次雾化,15min/次,连续12周;B2组:0.9%无菌生理盐水0.3mL鼻滴,连续3次/周,连续12周。结果①影像学改变:A1组:第1周末未见异常;第2周末,可见双肺弥漫性磨玻璃影;第3周末,可见双肺微小结节影;第12周末,可见明显的纤维条索影。B1组:第1周末,可见双肺磨玻璃样改变;第2周末,可见双肺多发斑片状影;第3周末,可见双肺散在小结节影;第12周末,可见纤维条索影。对照(A2、B2)组无异常。②病理改变:A1组:第1周末未见异常;第2周末,可见肺泡炎改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第12周末,可见纤维化改变。B1组:第1周末,可见肺泡炎改变;第2周末,可见渗出性改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第12周末,可见纤维化改变。对照(A2、B2)组无异常。③肺组织研磨后培养,A1、B1组均可见嗜热吸水链霉菌生长。结论雾化吸入嗜热吸水链霉菌抗原制剂可诱导豚鼠大棚肺模型;雾化法致豚鼠大棚肺肺泡炎改变迟于鼻滴法1周出现。

嗜热吸水链霉菌抗原诱导大棚肺动物模型

目的探讨嗜热吸水链霉菌抗原对豚鼠是否能引起大棚肺及制作大棚肺动物模型的方法。方法成年豚鼠32只,体重300~400 g,雌雄各半。随机分为模型组A、B、C组,对照组D组,每组8只。模型组予嗜热吸水链霉菌抗原制剂1.5 mg（0.3 ml）、对照组予0.9%无菌生理盐水0.3 ml鼻内滴注,每周连续滴注3天。A组滴注1周,B组连续滴注3周,C、D组连续滴注12周。结果 1.病理改变：A组出现肺泡炎改变;B组可见非坏死性肉芽肿形成;C组可观察到肺成纤维细胞数目增多。2.影像学改变：A组可见双肺大片磨玻璃样改变;B组可见双肺多发性片状略高密度影;C组可见肺内小结节影及肺气肿征象。3.肺组织研磨培养后A、B、C组均可见嗜热吸水链球菌生长。结论嗜热吸水链霉菌抗原可以引起豚鼠典型大棚肺病变,结合病理和影像学变化证实,所建模型具有大棚肺的主要特征。

嗜热吸水链霉菌抗体检测的临床意义

自１９３２年Ｃａｍｐｂｅｌ首次报告５例“农民肺”以来，国内外学者对嗜热放线菌与呼吸道感染的关系进行了广泛的研究。我校于１９８２年在洪湖县１例农民肺死亡者家的铺草中分离出嗜热吸水链霉菌Ｈ９－４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｈｅｒｍｏｈｙｄｒｏｓｃｏｐｉｃ...

用热吸水链霉菌与饲草土尘引起家兔实验性尘肺的研究

业已证明有机和无机尘在甘肃河西地区马类动物气喘病中的致病作用。本实验通过气管滴注法用热吸水链霉菌和麦草无机土尘(90%<5μ)在家兔中成功地复制出病变。形态学研究和矿物分析表明,由菌混尘引起的病变更接近自然病例。形态学研究结果、CIEP 试验在血清中查到特异性沉淀素抗体、IF 和IP 染色检出肺组织中有多量IgG 和热吸水链霉菌孢子残留物以及ANAE 染色表明,在本病的发生过程中存在着Ⅲ和Ⅳ型变态反应。实验结果首次揭示了菌和尘在致病过程中的相互促进作用及其发病机理。肺巨噬细胞溶酶体的异常可能是尘致病性的关键。本文对马类动物气喘病以及人和动物各类尘肺的研究具一定的参考价值。

免疫转印试验对热吸水链霉菌抗原组分的研究

免疫转印技术是一种将聚丙烯酰胺凝胶电泳与免疫酶标记技术相结合的新的电泳技术。我们试用此项技术动态观察了实验性农民肺家兔血清与热吸水链霉菌抗原组分的免疫反正。结果表明73Kd多肽是热吸水链霉菌的主要抗原，进一步分离提纯此抗原将有助于农民肺的血清学诊断和发病机制的探讨．

嗜热吸水链霉菌cDNA文库构建及其抗原相关基因的表达

目的构建嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行表达序列标签（EST）测序，从中筛选具有毒力作用的基因进行体外克隆并诱导表达。方法利用RNA转录5’末端转换技术构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的eDNA文库，将平板内克隆进行编号，取前1020个克隆提取质粒，进行EST测序。用生物信息学方法分析EST测序结果并预测基因功能，从中筛选出可能引起人体免疫反应的毒力因子。将这些目的基因亚克隆人pET-28a载体，将重组子转化大肠杆菌BL21，用异丙基-β．D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导相应蛋白的表达。结果成功构建了较高质量的嗜热吸水链霉菌eDNA文库，得到有义序列978个，获得单-基因347个，其中2段基因分别与胸膜肺炎放线菌外膜蛋白、转铁蛋白B的同源性为51％和42％，其开放阅读框长度分别为1554bp和726bp，分别编码517和241个氨基酸。将2段基因亚克隆入原核表达载体中，IPTG诱导表达产物的相对分子质量分别为63000和30000。结论所构建的嗜热吸水链霉菌eDNA文库符合构建基因文库的质量要求，文库中的EST数据将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选。

热吸水链霉菌抗原组分的分析

热吸水链霉菌是我国引起农民肺的主要病原之一。我们应用免疫印迹技术动态观察了实验性农民肺家兔免疫血清与热吸水链霉菌抗原组分的免疫反应，结果发现７３ｋＤ多肽具有较强的免疫原性，进一步分离提纯此抗原将有助于农民肺的血清学诊断和发病机制的探讨。

致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库的构建及体外表达

目的构建致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行EST测序,通过生物信息学软件分析EST序列同源性及生物学功能,筛选重组阳性基因克隆进行体外表达。方法利用SMART方法构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库,随机挑选重组阳性克隆进行EST测序。挑选有关目的基因连接入pET-28a载体并转化大肠埃希菌BL2(DE3),IPTG诱导体外表达。结果该文库的重组率为96.3%,是一个较高质量的文库。从文库中随即挑选的1 020个重组阳性的克隆,获得978个有义序列,平均长度为495bp,含有347个单一基因,同源性比较发现部分序列与猪胸膜肺炎放线菌外膜蛋白(omla),转铁蛋白B(TbpB)具有较高的同源性,分别为51%和42%。将重组阳性的基因克隆至载体中,IPTG诱导得到表达产物的相对分子质量分别为63×103和30×103。结论所构建的致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库包含全部EST序列,可能包含嗜热吸水链霉菌相关疾病巨大部分毒力分子,这些数据的积累将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选,同时为研究农民肺的发病机制奠定基础,如果能准确筛选出相关毒力基因,将为农民肺血清学诊断以及特异性疫苗的研发奠定基础。