几何形态计量技术对热带臭虫的数字化标记及分析

目的研究热带臭虫形态结构特征信息,探究其特有的空间几何拓扑结构。方法使用超景深三维显微系统获取热带臭虫高清形态信息,利用几何形态计量学地标点技术确定热带臭虫形态变量框架,Adobe Illustrator软件描绘热带臭虫形态轮廓,TpsDig v2.32软件确定地标点并提取几何形态数据变量信息,TpsSuper v2.05软件对地标点进行普氏叠加分析。结果在海南省采集48只热带臭虫,包括11只若虫、22只雌虫及15只雄虫。于若虫背面构建49个地标点,腹面构建80个地标点;于雌虫背面构建48个地标点,腹面构建81个地标点;于雄虫背面构建51个地标点,腹面构建83个地标点。根据热带臭虫不同虫期的地标点结合其外部结构,共确立110个形态变量。普氏叠加将特征地标点映射出若虫、雌虫、雄虫的背面及腹面共计6个标准化模型,以表征热带臭虫不同虫期的归一化轮廓,建立了可视化几何模型。结论基于地标点编码规则的几何形态计量技术可作为热带臭虫的分类鉴别工具,并为不同虫期的热带臭虫提供相应的几何形态计量指标。

海南热带臭虫分子鉴定及内共生菌Wolbachia检测

目的了解海南臭虫种类及内共生菌Wolbachia的感染情况,并探讨海南臭虫COI基因和Wolbachia的wsp基因的序列特征及系统发育关系。方法2019年5月采集海南臭虫92只,提取基因组DNA,PCR扩增臭虫COI基因和Wolbachia表面蛋白基因wsp序列并测序。BLAST多序列比对确定物种;MEGA 11软件对序列进行碱基含量、保守位点、可变位点的计算和系统发育分析;SDT软件对序列两两比对,进行聚类分析。结果海南热带臭虫COI基因序列长度637 bp,G+C含量为37.21%,A+T含量为62.79%。与GenBank中热带臭虫COI序列比对显示,保守位点占99.84%。从92只海南热带臭虫中,检测出26只热带臭虫感染Wolbachia,感染率为28.26%。26条Wolbachia wsp序列长度约为610 bp,G+C含量为39%~40%,A+T含量为60%~61%,保守位点占99.03%。系统发育关系显示海南热带臭虫Wolbachia与GenBank中其他地理株的热带臭虫Wolbachia聚为一支,与梳毛臭虫、温带臭虫的Wolbachia系统发育关系较远。结论热带臭虫为海南臭虫的优势虫种,且自然感染内共生菌Wolbachia,为热带臭虫防控技术提供了理论依据。

热带臭虫及温带臭虫形态与分子鉴定

目的建立近似种热带臭虫与温带臭虫形态学和分子鉴定的方法。方法 2017年7月在深圳市某大学集体宿舍和山东省泰安某大学集体宿舍分别发现并采集到热带臭虫和温带臭虫。比较热带臭虫与温带臭虫外部形态特征及线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因、16S rDNA和核糖体基因28S rDNA、ITS2的序列,构建(Neighbor-Joining,NJ)进化树。结果虽然热带臭虫与温带臭虫成虫的外部形态相似,但仍可以从前胸背板、翅基、足和腹部的细微特征区别进行鉴定,COI、16S rDNA、28S rDNA、ITS2 4个基因的DNA序列种内差异均<2%,种间差异均>2%,在构建的4个基因NJ进化树中,2个种均能各自聚为一支,且支持率均达100%。结论热带臭虫和温带臭虫成虫可以利用外部形态鉴定,并能用常规的分子标记进行分子鉴定。形态和分子相结合的鉴定方法,为仅依赖形态特征难以区分的近似种的鉴定提供了一个高效的方法。

热带臭虫转录组分析

目的获得热带臭虫转录组数据,为后续基因功能研究奠定基础。方法基于Illumina NovaSeq 6000高通量测序平台,对热带臭虫混合样本进行测序,采用Trinity软件组装有效测序数据获得unigenes。将unigenes分别与非冗余蛋白数据库(NR)、基因本体论(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)、直系同源蛋白分组比对数据库(eggNOG)和注释蛋白数据库(Swiss-Prot)进行比对和功能注释,利用MISA软件对热带臭虫的unigenes进行简单重复序列位点分析,使用Samtools和GATK软件检测热带臭虫单核苷酸多态性(SNP)。结果转录组测序数据质控后获得5.49 Gb高质量数据,组装后获得21619个unigenes,总长度为29322540 bp,平均长度为1356 bp。将unigenes序列与5个公共数据库进行比对和功能注释,得到45362个有功能注释的unigenes,预测发现10906条编码区序列,检测到7754个简单重复序列(SSR)位点信息和33144个SNP位点信息。结论报道并构建了热带臭虫转录组数据库,并对21619个unigenes进行组装和功能注释分析,该数据的获得可为后期热带臭虫的功能基因研究、SSR和SNP分子标记开发、遗传多样性分析以及遗传图谱构建等奠定基础。

臭虫击倒抗性基因突变检测及抗性测定

近20多年,臭虫(Cimex spp.)在世界范围内成为常见的卫生害虫,其防治主要采用化学防治,但很多种群发现击倒抗性(Knockdown resistance gene,kdr)基因突变的存在以及抗药性。监测kdr的发生频率以及不同种群对农药的抗性对臭虫有效防治很重要,但我国对臭虫种群的抗药性报道很少。本试验采用点滴法测定了1个温带臭虫Cimex lectularius野外种群对氯虫苯甲酰胺、呋虫胺、吡虫啉、噻虫嗪和高效氯氰菊酯等5种药剂的毒性及抗性水平,使用区分剂量快速鉴定抗性方法对2个温带臭虫和2个热带臭虫Cimex hemipterus种群对高效氯氰菊酯的抗性水平进行了检测,此外用PCR方法检测8个臭虫地理种群(1个温带臭虫实验室种群,1个温带臭虫野外种群和6个热带臭虫野外种群)174个个体的kdr突变频率。点滴法结果表明,5种杀虫剂对温带臭虫的毒性是吡虫啉和呋虫胺>噻虫嗪>氯虫苯甲酰胺和高效氯氰菊酯,测试的野外温带臭虫种群仅对噻虫嗪无明显抗性。热带臭虫2个野外种群对高效氯氰菊酯的抗性均远高于温带臭虫。在温带臭虫的实验室种群中未检测到突变,在野外种群中检测到了V419L和L925I突变,可分为2种基因型类型(A:无突变位点;B:同时有L925I和V419L),而在热带臭虫的6个种群检测到M918I和L1014F突变,只有1种基因型类型,即M918I和L1014F双位点突变。温带臭虫1个野外种群及热带臭虫6个野外种群kdr突变的存在与臭虫对高效氯氰菊酯敏感密切关联。基于kdr基因突变检测结果推测我国臭虫种群广泛存在对拟除虫菊酯的抗性。

臭虫在广西自治区的地理分布

本文报导了两种臭虫在广西自治区的分布,对不同经纬度的21个县、市调查中,发现仅南宁市未找到臭虫,其余均有不同程度的侵染(P5.24％),其中温带臭虫主要分布在北回归线以北,其侵染率为61.90％,热带臭虫则局限于回归线以南,侵染率为28.57％,平果县兼有两种臭虫(4.76％)。文章结合邓国藩、冯兰洲及Lsing的报导,进行了分布情况及影响因素的讨论,还说明本次调查对象选择性强,所得出的侵染率明显偏高,不能代表该自治区实际的自然侵染率。文章最后建议加强对热带臭虫的调查防制研究,以期取得对臭虫全面研究的硕果。

臭虫可能是乙型肝炎病毒的媒介物

有研究认为,臭虫可能是乙型肝炎病毒的媒介物。据研究人员介绍,乙肝病毒持续存在于臭虫体内及其排泄物中的时间比预计的时间长。William Beaumont医院的Silverman指出,早在30多年前,研究人员首次在野生臭虫(热带臭虫和温带臭虫)中检测到乙型肝炎表面抗原。为弄清臭虫是否就是乙型肝炎病毒的媒介物。

一艘入境船舶携带臭虫的调查及处置

目的探讨入境船舶携带臭虫等医学媒介生物侵害,并对处理效果进行评价。方法采用目测法等对臭虫等医学媒介生物的侵害进行调查,并对采集的标本进行鉴定;采用0.5%马拉硫磷水剂开展滞留、空间和缝隙喷洒杀灭船舶上臭虫等医学媒介生物,同时布放灭蟑螂毒饵,对处置效果进行评价。结果在生活区船员房间发现并采集到300余只臭虫标本,为热带臭虫,密度为180只/人工小时,单位面积密度达300只/m2,另发现蜚蠊、蚊和蝇等17种医学媒介生物;处理后各类医学媒介生物杀灭率均为100%。结论应加强入境船舶检疫查验,对受到臭虫等多种医学媒介生物侵害的船舶,应根据处理对象和场所,采用综合施药方法进行除虫处理,防止臭虫等输入性医学媒介生物传入。