以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定

目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mousecytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kbDNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tn3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA,以此DNA为模板,合成的寡核苷酸为引物,用热循环方法按Promega公司的DNACycleSequencingSystem试剂盒的方法进行测序。结果:获得纯度较高可直接作为模板进行测序的DNA,测序所得放射自显影图片条带清晰明亮,间隔正常,分辨率较高,可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列,证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论:长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板,用热循环测序方法进行测序,无需切割成小片段后才进行测序。