生物素标记大肠杆菌热敏感和热稳定毒素基因探针对猪鸡分离株的检测

用特异的大肠杆菌热敏感毒素（ＬＴ）和热稳定毒素（ＳＴ）标记的基因探针，以硝酸纤维素薄膜为载体，对从猪、鸡分离的大肠杆菌进行杂交。结果表明，在从猪分离的４８株大肠杆菌中，分离自黄痢的３５株、分离自白痢的２株，分离自ＳＰＦ堵粪便的６株均产ＬＴ和５Ｔ；分离自长期拉稀的育成小僵猪粪便的５株中，只有４株产ＬＴ和ＳＴ，１株既不产ＬＴ也不产ＳＴ。从鸡分离的２８株大肠杆菌中，分离自雏鸡的１４株ＬＴ阳性率为８６％，ＳＴ阳性率为９３％；分离自中鸡的９株ＬＴ和ＳＴ阳ａ性率均为１００％；分离自蛋鸡的５株ＬＴ阳性率为４０％，ＳＴ阳性率为６０％。

人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素基因的克隆和表达

用限制酶Pst Ⅰ完全消化毒素源性大肠杆菌H10407的热敏感肠毒素(LT)质粒DNA,酶切片段经电泳分离后,用Southern分子杂交技术定位LT基因。回收5.3kb的LT DNA片段并将它与经Pst Ⅰ完全酶解的pUC8DNA混合,体外连接后用于转化感受态E.coli JM83细胞。筛选后获得了一株能有效表达LT的重组子。免疫学及生物学测定表明,此克隆株所产生的LT与亲本株H10407所产生者具有相同的免疫原性和生物活性,且其产最为亲本株的16倍。

大肠杆菌热敏感肠毒素的检测与制备

为探索猪源大肠杆菌热敏感肠毒素的简易检测方法和纯化方法,拟采用兔回肠结扎试验、兔皮肤蓝斑试验和平板免疫溶血试验比较检测热敏感肠毒素的方法。初步试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;采用SephadexG 100纯化热敏感肠毒素LT并采用SDS PAGE电泳检测蛋白纯度,表明该方法可以除去杂蛋白,肠毒素蛋白分子量为12

大肠杆菌肠毒素二价苗构建的研究进展(综述)

产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)是引起幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原菌之一。肠毒素是其主要的毒力因子 ,包括耐热性肠毒素 (ST)和热敏感肠毒素 (L T)。STI基因和 L TB基因融合后产生的融合蛋白不仅增强了 STI 的免疫原性 ,而且降低了 STI 的生物毒性 ,这就给抗幼畜腹泻的基因工程亚单位苗开发带来了新的希望。

貉产肠毒素型大肠杆菌的分离鉴定

致病性大肠杆菌能产生一种或多种肠毒素,称为毒素型大肠杆菌(ETEC)。ETEC是导致人畜腹泻的主要致病菌,借助于所产生的菌毛抗原黏附于动物小肠粘膜定居并产生作用于肠壁的外毒素称为肠毒素。主要有两类肠毒素:一类是不耐热性肠毒素,即热敏感性肠毒素(LT);另一类是耐热性肠毒素,即热稳定性肠毒素(ST)。仔猪的黄、白痢。

5′端非翻译区对LT-B基因表达的影响

mRNA5＇端非翻译区的不同结构可影响基因表达,为了改善编码人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素B亚单位的LT-B基因的表达水平,我们把该基因置于pBV220载体的P_RP_L串联启动子下游,构建了带有不同核苷酸组成的5＇端非翻译区的重组体。这些重组体分别在大肠杆菌HB101和DH5α中表达。结果表明,起始密码前有两个连续串联SD序列的LT-B基因的表达水平低于只有单个SD序列下的表达水平,而翻译偶联可使表达改善;用不同的SD序列LT-B基因的表达水平也有所不同,用基因本身SD序列可能要比用pBV220P_L启动子下游的SD序列好;在只含单个LT-B基因SD序列的重组体中,5＇端非翻译区序列的长短对LT-B基因表达没有什么影响;重组体在HB101中的表达水平高于在DH5α中的表达水平。