热杀死结核分支杆菌H37Ra诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型研究

目的对热杀死结核分支杆菌H37Ra(Mtb)诱导SD大鼠关节炎模型的血液学、T细胞功能、关节滑膜细胞凋亡及病理变化进行分析,以评价该模型与临床RA类疾病的相似性。方法 SD大鼠尾根部一次性皮下注射Mtb-矿物油诱导剂,定期检测大鼠外周血液常规、血液流变学改变;采用流式细胞术测定外周血淋巴细胞凋亡率及调节性T细胞比例;TUNEL法检测关节滑膜细胞凋亡,镜下观察关节滑膜病理改变。结果 SD大鼠经Mtb免疫后,外周血血红蛋白含量下降,血小板总数、红细胞压积上升,全血黏度、血浆黏度上升;外周血淋巴细胞凋亡率明显降低;CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例、CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例均下降;关节滑膜细胞凋亡减少;关节滑膜组织异常增生,有大量炎性细胞浸润,并有肉芽组织形成。结论由Mtb诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型临床表现及组织学改变与临床RA相似,免疫学指标存在明显的细胞免疫异常;该模型制作方法简单、复制成功率高、经济实用,可广泛用于RA的医学研究及抗RA新药筛选。

Mtb诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型的建立及评价

目的建立一种实验性SD大鼠佐剂性关节炎模型,为类风湿关节炎的研究提供一种简单、实用、可靠的动物模型。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)与矿物油混匀,一次性经尾根部皮下注射,诱导SD大鼠实验性类风湿关节炎的发生。在实验周期内,定期检测实验动物体重、血常规,并进行关节炎临床评分、足趾容积测定,以流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群变化;以ELASA方法测定血清TNF-α,关节组织中IL-1、IL-6和内皮生长因子(VEGF)水平;同时检测SD大鼠后腿踝关节软骨及滑膜的病理变化,以X-光检查验证模型骨侵蚀程度,通过多项综合指标评价该模型的可靠性。结果SD大鼠经Mtb免疫14d后,大鼠体重明显减轻,外周血白细胞、血小板及单核细胞数明显升高,T淋巴细胞亚群CD4/CD8比值增高。从免疫Mtb10d开始,模型组动物足趾和踝关节出现炎症信号,14～16d达到高峰。免疫28d后,大鼠外周血TNF-α水平升高,关节滑膜组织中IL-1和IL-6及VEGF水平上调。显微镜下病理检测结果显示,模型大鼠关节滑膜增生,淋巴细胞浸润,关节软骨增生。结论由Mtb诱导的SD大鼠关节炎模型与临床RA特征相近,具有模型复制成功率高、操作简单、经济实用等特点,可广泛用于抗类风湿关节炎药物的筛选及实验研究中。

Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

目的通过比较Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠和正常大鼠关节滑膜组织蛋白质谱的差异,探讨类风湿性关节炎可能的发病机制,寻找类风湿性关节炎致病相关蛋白。方法建立Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠模型。采用双向凝胶电泳的蛋白质组学技术比较Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠和正常大鼠关节滑膜组织蛋白质谱的差异;采用Western blot技术和荧光定量PCR技术验证其中2种差异蛋白表达情况。结果建立了佐剂性关节炎模型组及正常组滑膜组织双向凝胶电泳图谱,获得变化趋势2倍以上的蛋白质点8个,其中模型组相对于空白对照组下调蛋白4个,模型组相对于空白对照组上调蛋白4个。Western blot方法和荧光定量方法对其中2种蛋白进行验证,结果与蛋白质组学结果一致。结论类风湿关节炎滑膜病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程,这些表达差异蛋白质可能参与了类风湿性关节炎的进展。