热毒清颗粒及通淋排石颗粒微生物限度检查法的建立

目的:建立热毒清颗粒和通淋排石颗粒的微生物限度检查法。方法:测定两个颗粒剂对5个规定试验菌株的回收率,对控制菌的检查法进行验证。结果:热毒清颗粒和通淋排石颗粒无抑菌作用,回收率均在90%以上。结论:两制剂可按常规法检查微生物限度。

金翘热毒清颗粒体外抗炎作用研究

目的:探究金翘热毒清颗粒的体外抗炎作用。方法:通过MTT法测定A549细胞活性,观测金翘热毒清颗粒对LPS刺激下A549细胞活力的影响;通过ELISA法测定A549细胞产生TNF-α的量,观测金翘热毒清颗粒不同作用时间、不同给药方法对LPS刺激下A549细胞产生TNF-α的影响。结果:当LPS浓度为200μg/mL时,不同给药方法的金翘热毒清颗粒均能提高细胞活力,降低LPS对细胞的生长抑制(P<0.001);与模型组比较,金翘热毒清颗粒胞外灭活组和给药治疗组LPS刺激A549细胞产生TNF-α的量显著降低(P<0.001),且胞外灭活组优于金翘热毒清颗粒组(P<0.01)。结论:金翘热毒清颗粒体外可显著减少LPS对A549细胞的损伤,并降低因LPS刺激产生的TNF-α,提高细胞活力,提示其具有体外抗炎作用。

不同干燥工艺对热毒清颗粒中指标成分保留率的影响

目的:优选热毒清颗粒的最佳干燥工艺。方法:以热毒清颗粒中绿原酸、连翘酯苷A、连翘苷、哈巴俄苷为指标成分,比较常压干燥、减压干燥和喷雾干燥条件下各指标成分的保留率。结果:绿原酸在常压干燥、减压干燥、喷雾干燥样品中保留率分别为88.70%、89.34%、89.62%;连翘酯苷A在常压干燥样品中保留率为93.59%,在减压干燥及喷雾干燥样品中保留率均超过99%;连翘苷在3种干燥工艺中保留率分别为98.84%、96.18%、94.39%;哈巴俄苷在3种干燥工艺中保留率分别为79.48%、85.66%、85.99%。结论:常压干燥条件下连翘酯苷A与哈巴俄苷损失较大,而喷雾干燥与减压干燥下各指标成分相对损失较小,但减压干燥所需时间较长,因此喷雾干燥最适合热毒清颗粒浓缩液的干燥。

HPLC法同时测定热毒清颗粒中绿原酸和连翘酯苷A的含量

目的:建立同时测定热毒清颗粒中绿原酸和连翘酯苷A含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Phe-nomenexC18柱,流动相为甲醇(流动相A)-0.1%磷酸(流动相B)梯度洗脱,检测波长为330nm,流速为1.0mL.min-1,进样量为10μL,柱温为25℃。结果:绿原酸进样量在0.0562～0.5620μg范围内与其峰面积积分值线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为100.64%,RSD=0.51%;连翘酯苷A进样量在0.0411～0.4110μg范围内与其峰面积积分值线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为101.81%,RSD=0.74%。结论:该方法简单快捷,适用于热毒清颗粒的质量控制。

金翘热毒清颗粒治疗小儿疱疹性咽峡炎发热临床研究

目的评价金翘热毒清颗粒治疗疱疹性咽峡炎发热患儿的疗效。方法将符合入选标准的90例疱疹性咽峡炎患儿按随机数字表法分为2组,每组45例。在对症支持治疗基础上,对照组服用利巴韦林颗粒,观察组服用金翘热毒清颗粒。2组均连续治疗4 d。分别于治疗前后进行症状、体征评分;观察并记录患儿退热时间、疱疹消退时间、流涎消失时间、食欲恢复时间;采用ELISA法检测血清IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a水平,采用流式细胞仪检测外周血CD4+、CD8+水平,计算CD4+/CD8+比值。结果治疗后,观察组症状、体征评分[(3.02±2.89)分比(6.88±2.31)分,t=6.999]低于对照组(P<0.01);退热时间[(16.8±3.2)h比(29.9±4.4)h,t=16.202]、疱疹消退时间[(72.3±5.4)h比(96.7±6.2)h,t=19.765]、流涎消失时间[(26.4±2.0)h比(46.3±3.6)h,t=32.479]、食欲恢复时间[(19.6±4.2)h比(39.7±4.9)h,t=20.907]均早于对照组(P<0.01)。观察组治疗后血清IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a水平均低于对照组(t值分别为4.974、4.410、6.447、4.767,P值均<0.01);CD4+水平、CD4+/CD8+比值均高于对照组(t值分别为4.033、6.860,P值均<0.01),CD8+水平低于对照组(t=4.928,P<0.01)。结论金翘热毒清颗粒可使疱疹性咽峡炎发热患儿的症状消退时间缩短,炎性细胞因子水平降低,机体免疫力提高。

毒热清颗粒的质量标准研究

目的为新制剂毒热清颗粒建立质量标准。方法对制剂中连翘、紫花地丁、甘草采用薄层色谱（TLC）法进行定性鉴别;采用高效液相色谱法（HPLC）测定毒热清颗粒中黄芩苷、绿原酸的含量。色谱柱为Agilent ZORBAX XDB-C18柱（4.6mm×150mm,5μm）,流动相甲醇-0.4%磷酸（梯度洗脱）,流速1.0mL/min,检测波长为316nm,柱温25℃。结果连翘、紫花地丁、甘草的TLC图斑点清晰,分离度好。黄芩苷、绿原酸检测进样量线性范围分别为0.4764-2.382μg（r=0.9999）,0.4216-2.108μg（r=0.9999）,加样回收率分别为98.8%（RSD=1.5%）,99.1%（RSD=1.1%）,精密度、重复性、稳定性实验的RSD〈2%,n均为6。结论所建质量控制方法科学合理,可作为毒热清颗粒的质量标准。

毒热清颗粒提取工艺优选

目的优选毒热清颗粒的水提工艺条件。方法以黄芩苷,绿原酸为指标,HPLC测定含量,Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相甲醇-0.4%磷酸梯度洗脱,流速1.0m L/min,检测波长为280nm(黄芩苷)、327nm(绿原酸)。选加水量、提取次数、提取时间为考察因素,采用L9(34)正交试验优选毒热清颗粒的水提取工艺。结果最佳水提取工艺为加12倍量水提取2次,每次2h。结论该工艺有效成分提取完全,工艺简单,适合于工业生产的需要。

金翘热毒清对临床常见革兰氏菌的体外抗菌作用研究

目的观察金翘热毒清颗粒和金翘热毒清喷雾干燥粉体外抗菌作用,并比较不同工艺制备的金翘热毒清抗菌作用是否存在差异。方法采用平板菌落计数法观察金翘热毒清颗粒和金翘热毒清喷雾干燥粉对临床常见的革兰氏阴性菌(大肠埃希菌、铜绿假单胞杆菌、卡他布兰汉菌、流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌)和革兰氏阳性致病菌(金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌)的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果在菌液接种量为105 CFU/ml的条件下,两种工艺制备的金翘热毒清对肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌均具有较好的抗菌活性;对铜绿假单胞杆菌、卡他布兰汉菌、大肠埃希菌(不含ESBLs)、金黄色葡萄球菌(不含β-内酰胺酶)、金黄色葡萄球菌(含MSSA)具有一定抗菌作用;对大肠埃希菌(含ESBLs)、金黄色葡萄球菌(含β-内酰胺酶)、金黄色葡萄球菌(含MRSA)、粪肠杆菌的抗菌活性差。相同剂量下,金翘热毒清喷雾干燥粉对流感嗜血杆菌、大肠埃希菌(不含ESBLs)、金黄色葡萄球菌(不含β-内酰胺酶)的抗菌活性优于金翘热毒清颗粒。结论两者都具有一定的抗菌作用,相同剂量下金翘热毒清喷雾干燥粉对部分菌株的抑制作用优于金翘热毒清颗粒。

银黄溶液外洗治疗血热型银屑病的临床疗效观察

【目的】观察银黄溶液外洗对血热型银屑病疗效的影响。【方法】将60例血热型银屑病患者随机分为试验组和对照组,每组各30例。2组患者均给予口服本院协定处方热毒清颗粒,在此基础上,试验组给予银黄溶液外洗治疗,对照组给予卡泊三醇软膏外涂治疗,疗程为8周。观察2组患者治疗前后银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)和皮肤病生活质量指标评分(DLQI)的改善情况,评价2组患者的疗效及安全性。【结果】(1)经过8周治疗后,试验组的总有效率为93.33%,对照组为76.67%,试验组的疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)治疗后,2组患者的PASI和DLQI评分均较治疗前明显下降(P<0.01),且试验组对PASI评分的下降作用明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)治疗期间,试验组患者均未出现明显的不良反应,而对照组中有2例患者在用药过程出现短暂性的皮肤瘙痒,但均较快自行缓解,并可继续参与本研究。【结论】银黄溶液外洗治疗血热型银屑病疗效确切,安全性高。

祛毒清热颗粒中挥发油β-环糊精包合物的制备工艺研究

目的优选祛毒清热颗粒中挥发油的提取方法,确定其β-环糊精的包合工艺。方法按《中国药典》2010年版挥发油提取方法提取挥发油,以提取率为指标,对影响挥发油提取的因素(加水量、药材粉碎程度、挥发油提取时间)进行考察;以包合物的收率和油转化率的综合评分为指标,应用L9(34)正交试验进行包合条件的优化。结果挥发油最佳提取工艺为药材粉碎过20目筛,加7倍量水,提取4 h。β-环糊精的最佳包合工艺为β-环糊精与油的质量比为8︰1,包合温度40℃,包合时间为2 h,无水乙醇与挥发油的体积比为1︰3。结论该优选提取和包合工艺合理可行,可作为祛毒清热颗粒中挥发油β-环糊精包合物的制备。

祛毒清热颗粒质量控制研究

目的建立了祛毒清热颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对方中的连翘、柴胡、甘草、板蓝根进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对君药虎杖中的大黄素进行了定量测定。结果薄层分离度好,专属性强;大黄素在0.064～0.512μg内与峰面积线性关系良好,平均回收率为99.03%,RSD值为0.23%(n=9)。结论所建立的方法准确可靠,灵敏度高,专属性强,可有效控制祛毒清热颗粒的质量。

Box-Behnken效应面法优化金翘热毒清复方中绿原酸和连翘酯苷A的提取工艺

目的采用Box-Behnken效应面法,优选金翘热毒清复方中绿原酸和连翘酯苷A的超高压提取工艺条件。方法在单因素实验的基础上,采用三因素三水平Box-Behnken实验设计对金翘热毒清颗粒的超高压提取工艺参数进行优选。以溶剂倍量、提取压力、提取时间为自变量,以绿原酸、连翘酯苷A 2种成分含量为因变量,采用Hassan方法计算总评"归一值",并用多元线性回归及二项式拟合,建立总评归一值与自变量之间的数学关系,经效应面法预测最佳工艺条件。结果确定最优提取工艺为24倍量水,提取1次,提取压力112.1 MPa,提取38 s。总评归一值OD的实验值与预测值平均偏差为5.27%,二项拟合复相关系数r2=0.987 8。与回流、水煎煮法比较,超高压提取的绿原酸和连翘酯苷A含量均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论超高压提取作为一种新兴的中药提取技术,具有提取率高、提取温度低、耗时短、能耗少等优点,为金翘热毒清颗粒提取提供一个全新的方法。

不同干燥工艺制备的金翘热毒清制剂的抗炎作用

目的:研究不同干燥工艺制备的金翘热毒清颗粒和金翘热毒清喷雾干燥粉的抗炎作用。方法:将84只小鼠随机分为模型组,阿司匹林组(0.2 g·kg-1),热毒平颗粒组(21.84 g·kg-1),金翘热毒清颗粒组(11.7 g·kg-1),金翘热毒清喷雾干燥粉组(5.85,11.7,23.4 g·kg-1),每组12只,用二甲苯致炎,测定小鼠耳廓肿胀度;另取84只小鼠按上述方法分组和给药,腹腔注射冰乙酸致炎,于590 nm处测定腹腔液吸光度。评价不同干燥工艺制备的金翘热毒清制剂的抗炎作用。结果:模型组,金翘热毒清喷雾干燥粉高、中、低剂量组,金翘热毒清颗粒组,热毒平颗粒组及阳性组小鼠的肿胀度分别为(18.5±3.2),(13.4±2.2),(13.9±3.2),(14.8±3.6),(14.8±2.3),(14.6±4.2),(9.3±2.0)mg,与模型组相比,各给药组动物耳肿胀度均明显降低。模型组,金翘热毒清喷雾干燥粉高、中、低剂量组,金翘热毒清颗粒组,热毒平颗粒组及阳性组的A分别为0.677±0.121,0.512±0.099,0.523±0.137,0.583±0.195,0.537±0.065,0.558±0.107,0.321±0.094。结论:金翘热毒清颗粒和金翘热毒清喷雾干燥粉均具有一定的抗炎作用,可抑制鼠耳肿胀和腹腔毛细血管通透性增高;等剂量金翘热毒清喷雾干燥粉的抗炎作用稍强于金翘热毒清颗粒,等临床倍数剂量的热毒平颗粒的抗炎作用稍弱于金翘热毒清喷雾干燥粉。

不同干燥工艺制备的金翘热毒清的抗流感病毒作用比较

目的:观察金翘热毒清颗粒和金翘热毒清喷雾干燥粉体内、外的抗流感病毒作用,并比较不同干燥工艺制备的金翘热毒清抗病毒作用差异。方法:体外采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定样品以不同给药方式(药物直接作用于病毒、药物直接作用于病毒感染的细胞)抑制甲型流感病毒鼠肺适应株(FM1)的半数抑制浓度(IC50),并计算治疗指数(TI)。狗肾细胞密度为1×104/孔,金翘热毒清喷雾干燥粉质量浓度为(2.61,1.31,0.66,0.16 g·L-1),金翘热毒清颗粒(6.01,3.05,1.52,0.76 g·L-1),作用时间为5 d,每组4个样本。将小鼠随机分为对照组,利巴韦林组(0.07 g·kg-1),金翘热毒清颗粒(按生药量计)组(11.7 g·kg-1)、金翘热毒清喷雾干燥粉(按生药量计)组(5.85,11.7,23.4 g·kg-1),采用流感病毒株FM1滴鼻感染小鼠建立感染模型,感染2 h后连续ig给药5 d,每天2次,以生命延长率和肺指数抑制率为指标,评价二者的保护作用。结果:在药物直接作用于病毒组和药物直接作用于病毒感染的细胞组中,金翘热毒清喷雾干燥粉的IC50分别为0.77,0.80 g·L-1,TI分别为11.78,11.34;金翘热毒清颗粒的IC50分别为3.70,3.60 g·L-1,TI分别为6.37,6.55;金翘热毒清喷雾干燥粉23.4 g·kg-1,其生命延长率为60.81%,肺指数抑制率为13.18%,与病毒组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);金翘热毒清颗粒与金翘热毒清喷雾干燥粉相同剂量下的实验结果平行比较,未见显著差异。结论:金翘热毒清颗粒与金翘热毒清喷雾干燥粉都有抗流感病毒作用;体外在相同剂量下金翘热毒清喷雾干燥粉对流感病毒株的抑制作用优于金翘热毒清颗粒。