致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F_(107)菌毛抗原的提取及鉴定

将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 10 7/ 86菌株在TSB、TSA培养基上传代 ,使之表达F10 7菌毛 ,大量收集菌毛化的细菌 ,利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约 15ku的条带 ,以染色凝胶为对照 ,将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下 ,进行提纯。经免疫印迹反应 ,证实其条带为F10

F107(F18ab)菌毛的提取、提纯及鉴定

将致仔猪水肿病菌株107/86在TSB、TSA培养基上传代,使之表达F107菌毛,大量收集菌毛化的细菌,利用热洗脱法提取菌毛。粗提菌毛经15%的聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带,以染色的凝胶为对照,将未染色凝胶上的菌毛条带切下,捣碎,加生理盐水,37℃,2h后离心,吸出上清再次电泳,可见提纯的菌毛条带。用针对F107菌毛的单抗做免疫印迹反应,证实此条带为F107菌毛蛋白。

肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛的提取与鉴定

将表达Ⅲ型菌毛的肺炎克雷伯菌临床分离株Kp7在改良Minka液体培养基上传代培养,使之充分菌毛化,大量收集菌毛生长良好的细菌,利用热洗脱法分离提取菌毛,经硫酸铵沉淀、透析后进行蔗糖密度梯度离心,收集20%～30%梯度中的蛋白带,经SDS-PAGE电泳可见1条大小在20.5 ku的蛋白条带。提纯菌毛保留了甘露糖抵抗血凝特性,并与用Kp7全菌免疫家兔制备的高免血清在Western blot中反应呈阳性,证实其条带为Ⅲ型菌毛主要结构蛋白。

猪源ETEC F18黏附素三种提取方法比较的研究

为探索更为有效的黏附素提取技术,本试验以猪源ETEC F18ab菌株为材料,通过三种方法(切割法、热洗脱法及联合热洗脱与切割法)各提取200 mL菌悬液中的黏附素,应用紫外可见分光光度计测定浓度并进行SDS-PAGE分析。结果显示,应用切割法、热洗脱法和联合热洗脱与切割法所得黏附素量分别为5.94、8.84和22.47 mg,即应用联合热洗脱与切割法提取的黏附素量明显高于单纯应用热洗脱法和切割法;SDS-PAGE分析表明,联合热洗脱与切割法提取的黏附素蛋白纯度稍低于单纯应用热洗脱法和切割法。综合分析上述结果可知,联合热洗脱与切割法更适用于大量黏附素抗原的提取。