胞壁表达HSP65-IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌的构建和鉴定

目的:获得胞壁表达结核分枝杆菌热激蛋白65(HSP65)和人白细胞介素2(IL-2)融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法:将HSP65和IL-2融合基因克隆入大肠杆菌-卡介苗(E.coli-BCG)穿梭质粒pCW,构建成重组质粒HSP65-IL-2-pCW,电穿入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选和PCR方法选取阳性克隆;用间接免疫荧光法对重组耻垢分枝杆菌进行表型鉴定;用重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,检测其诱导的抗体水平。结果:筛选获得的重组耻垢分枝杆菌增殖特性与普通耻垢分枝杆菌无明显区别;与抗人的IL-2抗体和HSP65抗体均可形成免疫印迹条带;间接荧光染色后,可见细菌表面有极强的绿色荧光;重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠2周后,小鼠血清中HSP65抗体平均滴度为1∶4000,而生理盐水组的抗体几乎为阴性。结论:结核分枝杆菌HSP65和人IL-2融合基因在耻垢分枝杆菌胞壁获得表达,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。

HSP65-MUC1肿瘤疫苗对小鼠胰腺组织的分子模拟作用

目的:探讨重组抗肿瘤融合蛋白疫苗热激蛋白65-黏蛋白1(HSP65-MUC1)在小鼠体内通过分子模拟方式损伤小鼠胰腺的可能性。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、HSP65组和HSP65-MUC1组(每组7只),分别皮下注射PBS、HSP65和HSP65-MUC1,每周1次,给药3周。无菌分离小鼠脾细胞,利用流式细胞术检测特异性淋巴细胞的增殖情况,组织病理学观察小鼠胰腺的病理改变。结果:流式细胞术检测,与PBS对照组和HSP65组比较,HSP65-MUC1肿瘤疫苗组HSP65-MUC1特异性淋巴细胞升高了16.88%(P<0.001);HSP65特异性淋巴细胞升高了7.29%(P<0.01);与HSP60交叉识别的特异性淋巴细胞升高了5.79%(P<0.05)。3个免疫组小鼠胰腺组织HE染色病理均正常。结论:HSP65-MUC1肿瘤疫苗没有通过分子模拟诱导损伤小鼠胰腺。