超嗜热古菌耐热酸性α-淀粉酶的发酵条件和酶学性质研究

对一株分离自深海热液口的超嗜热古菌(Thermococcus sp.HJ21)菌株进行了α-淀粉酶发酵条件的优化和酶学性质的研究。该菌株发酵9h后到达产酶高峰,产酶温度范围为60—90℃,其最适产酶温度为80℃。产酶pH范围为5.0—9.0,最适产酶pH为7.5。产酶NaCl浓度范围为0.5%—4.0%,2.5%为最适宜NaCl浓度。糖原、淀粉、麦芽糖、酵母膏和蛋白胨促进产酶。该菌株产生的α-淀粉酶的分子量为51.4kDa,酶的最适作用温度为95℃,在100℃仍有60%的酶活力。酶在90℃的半衰期为5h,在100℃2h仍有40%的残余酶活,酶的热稳定性不依赖Ca2+。酶的最适作用pH为5.0,pH4.5仍有80%的酶活力,pH在5.5—7.0较稳定(80℃4h)。金属离子1mmol/L的Mg2+、Co2+、Sr2+、Ba2+、K+、Na+对酶有激活作用,Cu2+、Pb2+、Hg2+、Zn2+、Al3+对该酶均有抑制作用。

深海热液区超嗜热古菌Thermococcus sp.TVG2的培养分离与鉴定

【目的】培养分离大西洋脊热液区的超嗜热古菌,为进一步认识该生态系统中的物种及其特点奠定基础。【方法】将大西洋脊热液区海水样品用YTSV培养基富集培养,选取其中富集效果最佳的TVG2培养物用减绝稀释法分离纯化。对所分离菌株进行形态、生理生化特征等分析,并通过分子生物学手段对其进行初步鉴定。【结果】菌株TVG2属于超嗜热厌氧球菌,直径约1.0μm;生长温度范围50-88°C,最适生长温度82°C;生长p H范围为5.0-9.0,最适生长p H值为6.5;生长Na Cl浓度为1.0%-4.0%(质量体积比),最适生长浓度为2.5%;元素硫可显著提高菌株TVG2的生物量,但非生长必需;丙酮酸钠能显著促进该菌株生长,但葡萄糖对其生长则有抑制作用。根据其形态特征、生理生化特性及16S r RNA基因序列分析,确定菌株TVG2属于热球菌属。【结论】用YTSV培养基从大西洋脊热液区样品中分离获得超嗜热厌氧菌株TVG2,并确定其为Thermococcus属成员,命名为Thermococcus sp.TVG2。

新型超耐热菌的单链DNA结合蛋白表达和纯化及其增强DNA、cDNA的合成

目的表达和纯化一种新的来自于超耐热菌（thermococcuskodakarensis）KODl的单链DNA结合蛋白（缩写为kod—ssb），并探讨其对DNA、cDNA合成的影响。方法采用Transrtta（DE3）表达kod-ssb，用镍柱亲和层析纯化，经SDS—PAGE分析检测表达纯化后的kod—ssb。使用PCR及qRT／qPCR检测kod-ssb对DNA、cDNA合成的影响。结果将质粒pETlla—kod转化Transetta（DE3）中，得到重组菌株Transetta（pETlla—kod），经IPTG诱导。由SDS—PAGE分析可见表达的约40×103的特异条带；使用人类B球蛋白基因作为模板分别扩增5kbp，9kbp和13kbp目的片段，结果加了kod—ssb的PCR目的片段比没加的产量高很多，而且kod—ssb显著降低了PCR反应的非特异性扩增。以流感细胞培养上清抽提的RNA为模板，实施RT-／qPCR反应。结果加kod的平均Ct值是19．42，而没加的为22．15。结论kod-ssb在未来将被用于增强DNA和cDNA的合成。