贵州羔羊致病性大肠杆菌血清型和热稳定性肠毒素的研究

从腹泻羔羊中分离到大肠杆菌80株,对80株菌株做血清型鉴定,55株为埃希氏大肠杆菌。分属为O119、O34、O8、O78O101、O96种血清型,其中O119、O24为主要“O”类型。每个血清型筛选出的CH9612、SC9938、CH986、CH9817、LL9934、GL988株菌6株。用乳鼠胃内投服试验,测定出6株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性(ST)。

嗜水气单胞菌分离株的鉴定与菌株肠毒素及致病性研究

目的对嗜水气单胞菌进行鉴定并进行肠毒素检测与致病性分析。方法采用常规法分离培养,电子显微镜观察形态,用法国梅里埃VITEK32全自动微生物鉴定仪进行系统鉴定。乳鼠灌胃法测定热稳定性肠毒素(ST),小白鼠腹腔注射法测定其毒力。结果检出的嗜水气单胞菌均产热稳定性肠毒素(ST),具备较强的致病性。结论分离的嗜水气单胞菌具有较强毒力,与致病性密切相关。

利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88的热不稳定性肠毒素(heat-labile toxin,LT)基因进行无痕敲除并获得K88 LT-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列,并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段;将供体片段转化至ETEC K88,同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统,对LT基因进行敲除;通过PCR验证获得了K88 LT-缺陷菌株,并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示,λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段,CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除,最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明,K88 LT-缺陷菌株的溶血能力丧失,并且生长速度比野生型菌株减缓,LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。

云南边防部队产酸克雷伯菌生化特性与致病性研究

目的对从云南边防部队腹泻患者中分离的产酸克雷伯菌进行鉴定,并对其进行生化特性鉴定、肠毒素检测及致病性和药敏分析研究。方法在SS琼脂平板上分离获纯培养菌,光学显微镜和电子显微镜观察形态,常规生化鉴定并用VITEK32全自动微生物生化分析仪进行系统鉴定并做药敏分析,乳鼠灌胃测定热稳定性肠毒素(ST),小白鼠腹腔注射测定毒力。结果分离的产酸克雷伯菌产热稳定性肠毒素(ST),致病性较强。结论本次分离的产酸克雷伯菌是具有较强毒力的菌株,与临床症状密切有关,应继续加强菌株感染率和毒力监测。