肉鸭消化道酵母益生菌热胁迫耐受性及其机理研究

从肉鸭消化道内分离筛选出的5株酿酒酵母益生菌中,筛选高耐热性的菌株,并探究酵母菌胞内热休克蛋白表达与环境温度的相关性。通过热应激处理比较不同菌株的耐热性,然后对酵母细胞破壁,释放胞内蛋白,再利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)技术,分析不同菌株的热应激蛋白表达特性。结果显示,5个酿酒酵母菌株中有4株在常态时即存在热休克蛋白70家族和90家族热激蛋白的少量表达。3号酵母菌株在45℃和48℃相对于其他菌株而言耐受性更佳,其热休克蛋白70家族和90家族表达水平也更高。本试验还显示,冻融、超声波、高压均质三种不同破壁方法相比较,高压均质法效果最好。最佳工艺条件为:均质压力140 MPa,循环3次,原菌液稀释102倍,此时胞壁破壁率可达94.54%。可见,肉鸭消化道酵母菌株的耐热性存在差异,不同菌株的耐热性与热休克蛋白70家族和90家族的表达密切相关。试验菌株中3号菌株的热应激耐受性最佳,可以作为后续肉鸭专用饲用酵母益生菌的备选菌株。

出芽酵母蛋白激酶TOS3的过量表达及其在热胁迫应答中的作用

出芽酵母SNF1蛋白激酶参与葡萄糖阻遏和细胞胁迫应答.TOS3可通过磷酸化激活SNF1,参与SNF1调控的信号途径.本研究利用PCR方法扩增tos3基因的蛋白质编码序列,克隆到多拷贝表达载体pYES2/NTA上构建真核表达载体,转化酵母细胞并诱导TOS3过量表达.带HIS6标签的重组TOS3蛋白通过免疫印迹得以鉴定.进一步研究了过量表达TOS3对细胞热胁迫耐受性的影响,发现在热胁迫处理条件下,TOS3过量表达可恢复△_(sn)f1突变体细胞的生长缺陷,表明TOS3可能通过不依赖SNF1的其他信号途径参与细胞对热胁迫应答的调控.