不同降胆固醇能力的植物乳杆菌烯酰-ACP还原酶基因的mRNA表达分析

为了研究烯酰-ACP还原酶基因在不同降胆固醇能力的植物乳杆菌中的m RNA表达水平,通过提取植物乳杆菌M1和UVs29的总RNA,利用RT-PCR方法克隆了2株菌的烯酰-ACP还原酶基因,利用荧光定量PCR方法分析了烯酰-ACP还原酶基因在2株菌中的m RNA表达水平,结果显示:植物乳杆菌UVS29中烯酰-ACP还原酶基因的m RNA表达量高于植物乳杆菌M1,说明烯酰-ACP还原酶的表达量可能会对植物乳杆菌降胆固醇能力产生影响。

基于反义RNA技术的FabI抑制剂筛选模型的构建

目的基于反义RNA沉默技术构建针对细菌FabI的超敏全细胞筛选模型，用于筛选FabI抑制剂。方法以Escherichia coli基因组DNA为模板，PCR扩增屈6，基因的-74～86bp核苷酸序列，反向插入携带pairedtermini结构的反义质粒pHN678中，得到重组质粒pHNF，再转化至E-coli中，得到反义工程菌E．coli／pHNF；通过平板表型观察对反义工程菌进行筛选；考察了IPTG浓度对筛选模型的影响，确定96孔板抗菌筛选模型的条件，并用三氯生作为阳性对照、氨苄西林和浅蓝菌素作为阴性对照对该模型进行评价。结果获得了针对廊6，的反义工程菌，确定了最适IPTG浓度为40μmol／L，成功构建了FabI特异性酶抑制剂的超敏全细胞筛选模型，并验证了其可行性。应用该筛选模型对5847个内生真菌次级代谢产物进行活性筛选，初筛阳性率约为9．7％，经复筛后获得8份阳性样品。结论成功建立了基于反义RNA沉默技术的FabI超敏全细胞筛选模型，并利用该模型筛选到8份阳性样品。