ECHS1基因突变致线粒体短链烯酰CoA水合酶1缺乏症1例

对重庆医科大学附属儿童医院诊治的1例ECHS1基因突变致线粒体短链烯酰CoA水合酶1缺乏症患儿的临床资料及相关文献进行回顾性分析。患儿,男,3个月28 d,病史特点:哭吵、惊厥发作;查体:竖颈不稳,双侧巴氏征引出。血乳酸增高。头颅核磁共振提示双侧基底核区对称性病变。基因检查示患儿ECHS1基因复合杂合突变:c.796A>G(p.T266A)和c.463G>A(pG155S),结合患儿病史推测此为致病基因。故幼儿期有肌张力异常、运动发育迟缓或倒退、痉挛、乳酸增高、头颅磁共振成像示基底核区异常低密度影,病因未明时,应考虑到线粒体方面的疾病。

烯酰辅酶A水合酶短链1、表皮生长因子及低糖环境促进肝癌细胞侵袭转移

目的研究肝细胞癌(HCC)组织中能量代谢相关酶的表达及对肝癌细胞侵袭能力的影响,探讨烯酰辅酶A水合酶短链1(ECHS1)、AMP蛋白激酶(AMPK)、脂肪合成酶(FAS)、乙酰CoA羧化酶(ACC)等相关酶及低糖环境在HCC发生发展过程中的作用。方法选取解放军第一七五医院2015年6月-2016年6月经手术切除的32例HCC患者肝癌及癌旁组织,通过免疫组化技术,检测不同分化程度肝癌及癌旁组织中能量代谢过程中关键酶FAS、ACC及AMPK等表达情况。构建两组肝癌细胞株,对照组:转染空白对照质粒的肝癌细胞Huh7-plv、HepG2-PU6;实验组:转染小干扰RNA(siRNA)的肝癌细胞株Huh7-siECHS1、HepG2-siECHS1。应用Transwell小室实验观察ECHS1及低糖培养和加入表皮生长因子(EGF)等不同营养条件对肝癌细胞侵袭能力的影响。计量资料组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果免疫组化结果显示,肝癌细胞中ACC、AMPKβ表达高于癌旁组织,差异均有统计学意义(21/11 vs 7/25,χ~2=12.44,P<0.05;31/1 vs 26/6,χ~2=4.68,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,在正常营养条件(Huh7-plv-N、HepG2-PU6-N)及加入EGF的正常营养条件(Huh7-plv-N-EGF、HepG2-PU6-NEGF)的肝癌细胞侵袭数均明显大于相应干扰ECHS1后(Huh7-siECHS1-N、HepG2-siECHS1-N、Huh7-siECHS1-N-EGF、HepG2-siECHS1-N-EGF)的侵袭细胞数(t值分别为6.93、6.51、7.55、4.93,P值均<0.05);低糖培养环境(Huh7-plvLowGlu、HepG2-PU6-LowGlu)及加入EGF的低糖培养环境(Huh7-plv-LowGlu-EGF、HepG2-PU6-LowGlu-EGF)的肝癌细胞侵袭数亦大于相应干扰ECHS1后(Huh7-siECHS1-LowGlu、HepG2-siECHS1-LowGlu、Huh7-siECHS1-LowGlu-EGF、HepG2-siECHS1-LowGlu-EGF)的侵袭细胞数,差异均有统计学意义(t值分别为9.52、5.80、20.52、8.80,P值均<0.05)。表明不同营养条件下,干扰ECHS1后肝癌细胞Huh7、HepG2的侵袭能力均明显降低。此外,加入EGF后(Huh7-plv-N-EGF、HepG2-PU6-N-EGF)与正常营养条件(Huh7-plv-N、HepG2-PU6-N)相比,穿透小室的细胞数明显增多(t值分别为4.44、3.17,P值均<0.05);而低糖条件下(Huh7-plv-LowGlu、HepG2-PU6-LowGlu)与正常营养环境相比,发生侵袭的细胞数有所增加,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论 ECHS1、EGF可明显增强肝癌细胞侵袭转移能力,低糖饥饿条件亦可对肝癌细胞侵袭能力起到一定促进作用。

线虫烯脂酰CoA水合酶的克隆、表达、纯化及初步晶体学分析

生物体β-氧化循环是脂肪酸氧化分解的主要途径,许多代谢疾病都与其密切相关。线虫β-氧化循环与人类相似,但与其相关的研究报道却很少。线虫基因C32E8.9编码的蛋白被WormBase命名为烯脂酰CoA水合酶(WormBase ID:CE29693),被推测具有催化β-氧化循环第二步反应的功能。作者将C32E8.9基因克隆到原核表达载体上,在大肠杆菌中获得高效表达,并分别纯化了母体蛋白以及硒代蛋白衍生物。多角度静态光散射实验表明该蛋白的聚合状态为三聚体。该蛋白在沉淀剂2-甲基-2,4-戊二醇的作用下形成可供衍射分析的六棱柱形状晶体,空间群为P21,晶胞参数为a=79.0,b=82.4,c=79.2,α=γ=90.0°,β=120°,数据分析表明该晶体非单晶,是一种罕见的蛋白质"三晶"——包含三套晶格。

烯酯酰辅酶A水解酶1基因在小鼠肝癌细胞株中的表达及其与增殖和迁移能力的关系

目的 研究烯酯酰辅酶A水解酶1（ ECH1）在小鼠肝癌高、低淋巴转移Hca-F/Hca-P细胞株中的表达及ECH1基因表达下调后对Hca-F细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用免疫荧光方法检测ECH1在小鼠肝癌细胞株中的表达.构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1表达载体,稳定转染至高淋巴转移Hca-F细胞中干扰ECH1基因的表达,通过CCK8法检测肿瘤细胞的增殖能力,Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移能力,并应用流式细胞仪检测肿瘤细胞的细胞周期情况.结果 ECH1在小鼠肝癌细胞株中主要表达于细胞质,且ECH1在Hca-F细胞的表达强于其在Hca-P细胞的表达.ECH1表达下调后,Hca-F细胞的增殖能力明显下降.Transwell小室检测穿膜细胞数pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组（27.07±17.49）较阴性对照组（72.38±18.83）和Hca-F组（59.06±30.33）明显减少,细胞周期S期pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组（86.1％）较阴性对照组（75.8％）和Hca-F组（66.2％）停留细胞数明显增多,G1期pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组（9.4％）较阴性对照组（24.2％）和Hca-F组（30.3％）停留细胞数明显减少.结论 ECH1可能在肿瘤淋巴转移中发挥作用,抑制ECH1的表达可有效降低体外高淋巴转移肿瘤细胞的增殖和迁移能力.

线虫β-氧化循环的结构生物学研究

β-氧化循环是生物体脂肪酸的氧化分解的主要途径。在真核细胞内脂肪酸经过活化生成脂酰CoA,而后在线粒体基质中进入β氧化循环被逐步氧化分解。