类泛素蛋白FAT10对人肾上皮细胞α-烯醇酶共价修饰的初步研究

目的:构建带Flag标签的α-烯醇酶(ENO1)基因以及带Myc标签的人白细胞抗原F相关转录物10(FAT10)基因的真核表达质粒载体,鉴定ENO1和FAT10在人肾上皮细胞株HEK293中的表达,检测类泛素蛋白FAT10是否共价修饰ENO1。方法:以人宫颈癌细胞系He La的c DNA为模板进行PCR,得到eno1目的片段,与分别经EcoRⅤ和SalⅠ酶切的pFlag-CMV载体连接得到重组质粒pFlag-CMV-eno1并进行鉴定测序;以人脑组织c DNA文库为模板进行PCR,得到fat10目的片段,与分别经Eco RⅠ和XhoⅠ酶切的p CMV-Myc载体连接得到重组质粒p CMV-Myc-fat10并进行鉴定并测序。将重组质粒用脂质体法转染HEK293细胞,用Western印迹检测ENO1和FAT10蛋白的表达。将重组质粒共转染HEK293细胞,用免疫共沉淀检测FAT10对ENO1的修饰情况。结果:重组克隆载体内的eno1和fat10序列与Gen Bank报告的序列完全一致;转染HEK293细胞后,ENO1和FAT10蛋白过表达;FAT10能够共价修饰ENO1。结论:类泛素蛋白FAT10共价修饰ENO1,为肿瘤的发生、发展及迁移的研究提供了新的研究思路。

α-烯醇化酶1对非小细胞肺癌侵袭转移的影响

目的探讨α-烯醇化酶1(alpha-enolase 1,ENO1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)侵袭转移的影响。方法利用生物信息学数据库分析ENO1在NSCLC组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系;利用siRNA干扰A549、H460细胞中ENO1表达,实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法验证干扰效果,探索ENO1对NSCLC增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果数据库分析结果显示,ENO1在NSCLC组织中高表达,且与患者预后不良显著相关(P<0.05);ENO1的表达与患者组织学分型及是否复发显著相关(P<0.001),在TNM分期中仅与肺腺癌具有一定的相关性(P<0.05)。体外功能实验表明,干扰ENO1表达后,NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制。结论ENO1能够促进NSCLC的侵袭、转移,且其表达水平升高提示患者预后不良。

烯醇化酶-1在口腔鳞状细胞癌患者唾液和组织中的表达研究

目的:探究烯醇化酶-α(ENO-1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者和正常人组织和唾液中的表达。方法:免疫组化(IHC)法检测在高、中、低分化各15例OSCC患者肿瘤中ENO-1蛋白的表达;qRT-PCR、Western Blot检测16例OSCC患者肿瘤中ENO-1蛋白质及mRNA的表达;ELISA检测20例OSCC患者及正常人唾液中ENO-1的表达;Pearson相关分析OSCC组织及唾液中ENO-1蛋白表达与临床病理的相关性。结果:IHC结果显示,ENO-1在OSCC和正常组织中均有表达,且肿瘤组织中表达明显增强(P<0.001);不同病理分级的OSCC组织中ENO-1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。qRT-PCR结果显示,ENO-1mRNA的表达高于正常人(P<0.001)。Western Blot和ELISA结果显示,OSCC患者组织和唾液中ENO-1蛋白表达高于正常人(P<0.001);与正常对照组相比,OSCC组织和唾液中ENO-1表达的Pearson相关系数为ρ=0.75,具有相关性(P<0.001)。结论:ENO-1在OSCC组织和唾液中的表达变化一致,唾液检测具有无创、简便的优点,唾液中ENO-1 mRNA表达的检测有望成为OSCC早期筛查和早期诊断的生物标志物之一。

人肝癌细胞系HepG2与HepG2.2.15差异HLA结合肽的分离与鉴定

目的:分离并鉴定整合表达HBV的人肝癌细胞系HepG2.2.15及其母细胞系HepG2的差异HLAⅠ类分子结合肽,寻找与HBV感染相关的HLA结合肽.方法:洗涤法得到HepG2和HepG2.2.15细胞表面的HLAⅠ类分子及与其结合的肽段.效液相色谱(HPLC)对两种细胞的洗脱肽段进行分离和图谱比较,挑选出HepG2.2.15特有的峰段进行纳升电喷雾串联质谱(nano ESI-MS/MS)分析,结合MASCOT数据库检索和从头测序,分析多肽的序列和来源.后采用RT-PCR法进行mRNA表达检测.结果:HPLC对比显示HepG2和HepG2.2.15的HLA结合肽存在显著差异.利用nanoESI-MS/MS技术从HPLC差异峰段中分离鉴定出一条来源于已知蛋白人烯醇酶-1(enolase1,ENO1)的多肽SPDDPSRYISPDQ.RT-PCR结果显示,ENO1在HepG2和HepG2.2.15细胞中均有表达,且在HepG2.2.15细胞中表达明显高于HepG2细胞.结论:来自ENO1的多肽SPDDPSRYISPDQ能够被HLAⅠ类分子提呈到HepG2.2.15细胞表面,且ENO1 mRNA在HepG2.2.15细胞中的表达显著高于HepG2细胞.提示HBV感染可能引起ENO1表达上调.

基于Oncomine数据库分析ENO1在卵巢癌中的表达及其预后价值

目的:拟探讨α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)在卵巢癌中的表达及其预后意义。方法:收集Oncomine数据库中关于ENO1的信息,并对目前数据库中资料进行二次分析,对其在卵巢癌中的作用进行荟萃分析,同时利用Kaplan-Meier Plotter进行卵巢癌患者生存分析。结果:Oncomine数据库中共有14项研究涉及ENO1在卵巢癌组织和正常组织中的表达,共包括1 001个样本。与对照组相比,ENO1在卵巢癌组织中高表达(P<0.05)。高表达ENO1的卵巢癌患者总体生存率较高,而低表达ENO1的卵巢癌患者预后较差(P<0.05)。进一步亚组分析发现,ENO1表达水平对浆液性卵巢癌患者预后有显著影响,而在子宫内膜样卵巢癌患者中,其表达水平对预后无显著影响(P<0.05)。结论:通过对Oncomine基因芯片数据库中肿瘤相关基因信息的深入挖掘,发现ENO1在卵巢癌中高表达,且与卵巢癌的预后有关,可作为肿瘤预后标志物及替代药物治疗的新靶点。

抗瓜氨酸化α烯醇化酶多肽1抗体在类风湿关节炎诊断中的意义

方法应用ELISA法定量检测129例RA、32例SLE、32例OA、31例pSS及106名健康体检者血清抗CEP-1抗体水平，分析其与RA患者临床表现、病情活动度、实验室检查及Sharp评分的相关性。统计软件采用t检验比较，Mann-Whitney U检验，χ2检验。结果①抗CEP-1抗体在RA组阳性率为64.3%（83/129），而pSS、SLE、OA和健康对照组阳性率分别是22.6%（7/32）、12.5%（4/32）、0和0，抗CEP-1抗体在RA患者的阳性率显著高于其他CTD及健康对照组（χ2值分别为17.7、25.7、42.5、102.6，P均〈0.01）。抗CEP-1抗体对RA诊断的特异性为94.5%。②抗CEP-1抗体在抗瓜氨酸化蛋白/多肽抗体（ACPA）阴性、RF阴性、ACPA和RF均阴性患者的阳性率分别为30.3%（10/33）、41.9%（18/43）、22.7%（5/22）。③抗CEP-1抗体阳性患者关节畸形及骨侵蚀发生率、疾病活动度均高于抗CEP-1抗体阴性患者（P〈0.05）。④抗CEP-1抗体阳性患者更容易合并肺间质纤维化（19.3%和4.3%，χ2=5.494，P〈0.05）。⑤抗CEP-1抗体阳性患者ESR增快及白蛋白减少的发生率明显升高（χ2分别为6.543、6.59，P〈0.05）。结论抗CEP-1抗体为诊断RA的特异性自身抗体之一，与其他RA相关抗体联合检测可提高RA的诊断率。抗CEP-1抗体与关节损害、疾病活动度、肺间质纤维化密切相关。

难治性哮喘患者血清相关蛋白因子表达水平及其与预后的相关性分析

目的探究难治性哮喘患者血清相关蛋白因子表达水平及其与预后的相关性分析。方法选取2018年1月至2019年12月于郑州市第二人民医院收治的84例急性发作期难治性哮喘患者为研究组,选择同期来院行体检的84例健康成年人为对照组。比较研究组、对照组患者肺功能[深吸气量(IC)、1 s用力呼吸容积占预计值(FEV_(1))]、血清相关蛋白因子[C-反应蛋白(CRP)、烯醇酶-1(ENO1)、髓过氧化物酶(MPO)、丝氨酸蛋白酶抑制蛋白E1(SERPINE1)]水平。根据研究组患者3个月内是否再入院进行分组,分为再入院组和未入院组两个治疗亚组。比较两治疗亚组患者治疗前、治疗3个月后肺功能(IC、FEV_(1))、血清相关蛋白因子(CRP、ENO1、MPO、SERPINE1)水平差异,分析其与预后的相关性。结果治疗前,研究组患者IC、FEV1水平均低于对照组;治疗3个月后,研究组患者IC、FEV_(1)水平均较治疗前升高(P<0.05);治疗前,研究组患者CRP、ENO1、MPO、SERPINE1水平均高于对照组;治疗3个月后,研究组患者CRP、ENO1、MPO、SERPINE1水平均较治疗前下降(P<0.05)。治疗前,再入院组患者IC、FEV1均低于未入院组;治疗后两治疗亚组患者IC、FEV_(1)均较治疗前上升,且再入院组低于未入院组(P<0.05);治疗前,再入院组患者CRP、ENO1、MPO、SERPINE1均高于未入院组;治疗后两组患者CRP、ENO1、MPO、SERPINE1均较治疗前降低,且再入院组高于未入院组;经Pearson线性相关分析,难治性哮喘患者预后与CRP、ENO1、MPO、SERPINE1水平呈负相关,与IC、FEV_(1)水平呈正相关(P<0.05)。结论肺功能指标IC、FEV_(1)与血清相关蛋白因子(CRP、ENO1、MPO、SERPINE1)水平均与难治性哮喘患者预后有一定的相关性。

ENO1在胰腺上皮内瘤变和胰腺导管腺癌中的表达

[目的]检测烯醇化酶-1(ENO1)在人和大鼠胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺导管腺癌组织中的表达情况。[方法]收集病理科存档人组织标本,胰腺导管腺癌18例,PanIN 4例,正常胰腺组织7例,免疫组化检测ENO1蛋白表达。SD大鼠20只采用胰腺包埋种植7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)诱导法,建立大鼠PanIN和胰腺导管腺癌模型,Real-time PCR检测ENO1 mRNA表达,免疫组化和免疫印迹检测ENO1蛋白表达。[结果 ] ENO1蛋白在人PanIN(9.63±1.80)和胰腺导管腺癌组织(12.14±2.71)中的表达均显著高于人正常胰腺组织(P<0.01)。与造模后大鼠正常胰腺比较,ENO1 mRNA在大鼠PanIN-3(P<0.01)和胰腺导管腺癌组织(P<0.001)中表达显著增加,在大鼠PanIN-2(P<0.001)、PanIN-3(P<0.01)和PDAC(P<0.001)组织中,ENO1蛋白表达呈进行性升高。[结论] ENO1在PanIN和胰腺导管腺癌的表达显著增高,在胰腺上皮的癌变过程中可能发挥重要作用。