固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定六神曲中4种烷基间苯二酚

建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定六神曲中5-十五烷基间苯二酚(AR-15)、5-十七烷基间苯二酚(AR-17)、5-十九烷基间苯二酚(AR-19)和5-二十一烷基间苯二酚(AR-21)4种烷基间苯二酚含量.分析采用Brownless Spp C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm),流动相:A相为5 mmol/L乙酸铵溶液,B相为甲酸∶乙腈溶液(体积比为1∶1000),采用梯度洗脱方式,体积流速为0.5 mL/min.柱温为35℃,使用电喷雾离子源,负离子扫描,多反应监测模式.结合主成分分析与正交偏最小二乘法判别分析,寻找影响六神曲炮制前后质量的主要化学成分.结果表明,4种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9926),平均加样回收率在99.36%~101.36%之间,相对标准偏差(RSD)为0.85%~2.10%.通过化学模式识别分析发现造成主要差异的质量差异物是AR-21.方法简便可行,稳定可靠,可用于炮制不同六神曲的质量控制.

膳食烷基间苯二酚在癌症预防中的研究进展

烷基间苯二酚(alkylresorcinols,ARs)是一种酚类脂类化合物,主要来源于小麦、黑麦等全谷物的麸皮。目前研究认为ARs可作为全谷物摄入量的膳食生物标志物,同时广泛应用于全谷物与癌症等慢性疾病的流行病学研究中。ARs具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、调节人体代谢以及调节肠道菌群等生物活性,可能在癌症的化学预防中发挥重要作用。本文基于膳食ARs的化学结构和生物来源,阐述膳食ARs在癌症预防中的作用及相关机制,以期为癌症预防研究提供新线索。

全麦中烷基间苯二酚的研究概述

烷基间苯二酚(ARs)是大量存在于小麦、黑麦麸皮中的一类酚类类脂。近年来,由于ARs可能具有多种生理效应、作为摄食全谷食品生物标记的极大潜能及在全麦食品中独特存在,使得各种关于ARs的色谱分析方法得到了极大的发展,有关ARs的研究不断涌现。本文总结了ARs的多种生理生物活性,提取分析方法及其作为全麦食品生物标记的研究进展。

5-二十一烷基间苯二酚抑制α-葡萄糖苷酶活性的分子机制

小麦麸皮烷基间苯二酚可抑制α-葡萄糖苷酶活性,具有控制餐后高血糖的潜在作用,但是其作用分子机制尚未阐明。本实验采用荧光光谱、圆二色光谱以及分子对接技术研究小麦麸皮中含量最高的5-二十一烷基间苯二酚与α-葡萄糖苷酶的相互作用及抑制机制。结果显示,5-二十一烷基间苯二酚可使α-葡萄糖苷酶的内在荧光静态猝灭,不同温度(298、304、310 K)条件下结合常数K_A分别为149.8、46.2、20.3 L/mol;5-二十一烷基间苯二酚与酶分子结合降低酶分子结构中α-螺旋含量,增加β-折叠、β-转角以及无规卷曲含量;5-二十一烷基间苯二酚的苯环3—OH可与酶分子Tyr158的—COOH形成氢键,苯环5—OH的氢原子和氧原子分别与Lys156的—NH_2氢原子和Leu313的—COOH氧原子形成氢键,另外推测酶分子中Phe159、Pro312、Phe314、Asn415等氨基酸是与烷基间苯二酚形成疏水作用的重要位点。

浮小麦与小麦的止汗作用及5-二十一烷基间苯二酚等化合物含量比较研究

目的:研究浮小麦与小麦的止汗作用以及其5-二十一烷基间苯二酚等化合物含量的差异。方法:以大鼠体重差值、大鼠足趾部位汗点数、大鼠足趾部位肉垫皮肤汗腺的空泡发生率为指标,观察浮小麦与小麦止汗作用的差异。采用HPLC法测定浮小麦与小麦中5-二十一烷基间苯二酚等化合物的含量,比较其含量差异。结果:浮小麦组大鼠体重减少值不显著,汗点数增加不显著,光镜下足趾汗腺导管扩张不明显,而小麦组大鼠体重显著减少,汗点数增多,光镜下大鼠足趾汗腺细胞发生明显空泡样变化,汗腺导管扩张明显。HPLC法测得浮小麦与小麦所含5-二十一烷基间苯二酚等化合物的含量有一定的差别。结论:浮小麦有明显的止汗作用,小麦止汗作用不明显。

5-烷基间苯二酚诱导人结直肠癌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨5-烷基间苯二酚(5-alkylresorcinols,5ARs)诱导人结直肠癌细胞凋亡及与BCL2、Bax、PARP1和Caspase3表达的影响.方法体外细胞实验应用5AR s直接对HT29、HCT116进行干预诱导.利用倒置相差显微镜观察5ARs对HT29、HCT116干预后细胞形态的变化.CCK8法测定不同浓度5ARs诱导人HT29及HCT116抑制率.Annexin V-F ITC/P I流式细胞术检测5ARs诱导人HT29及HCT116凋亡.Western-blot检测分析不同浓度5ARs诱导HT29及HCT116后凋亡相关蛋白变化(BCL2、Bax、PARP1和Caspase3).结果5A R s可呈浓度依赖性地抑制H T 2 9及HCT116增殖(P<0.05);5ARs可诱导HT29及HCT116凋亡,并可增强Bax、PARP1和Caspase3表达,抑制BCL2表达,并提高Bax/BCL2的比值比例(P<0.05).结论5ARs可诱导HT29及HCT116凋亡,并且可能与激活Bax、PARP1和Caspase3表达及增加Bax/BCL2比值比例相关.

小麦麸皮烷基间苯二酚抑制α-葡萄糖苷酶的构效关系研究

为了阐明两亲性酚类类脂烷基间苯二酚(alkyresorcinols,ARs)抑制α-葡萄糖苷酶的构效关系,以小麦麸皮ARs(C17∶0、C19∶0、C21∶0、C23∶0、C25∶0)为研究对象,测定其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制,并利用分子对接及LogP值分析软件初步研究了抑制活性差异的可能机制.结果表明,随着烷基侧链的增长,ARs的LogP值逐渐增加,对α-葡萄糖苷酶活性的抑制呈先上升后下降的变化,其中ARs(C19∶0)的抑制活性最强,IC50值为66.17μmol/L.ARs(C17∶0)通过亲水头部进入酶分子活性区,通过苯环羟基和酶分子Glu422形成氢键,而ARs(C19∶0)则是以疏水性尾部进入酶分子活性区,通过苯环羟基、酶分子Glu422及His423形成氢键,同时还存在疏水性氨基酸和烷基侧链之间的疏水作用;ARs(C21∶0)与酶的作用类似于ARs(C19∶0),但是苯环羟基仅和酶分子Glu422形成氢键,烷基链与酶分子的疏水作用则增强;ARs(C23∶0)和ARs(C25∶0)均未能在酶分子活性区域完成分子的对接.由此可知,ARs分子亲水、亲脂基团的平衡是影响其与酶分子相互作用及抑制活性的重要因素.

分光光度法快速测定糙米中烷基间苯二酚的研究

建立了快速测定糙米中烷基间苯二酚的分光光度法。以固蓝RR盐为显色剂,质量分数5%的K2CO3为碱化剂,调节介质pH值为10,室温下反应15min,烷基间苯二酚与固蓝RR盐特异性结合呈紫红色化合物,在480nm处有最大吸光度。用此法定量测定糙米中烷基间苯二酚的含量,重复性试验相对标准偏差为0.24%,加标回收率为98.8%~100.4%。与传统定量检测方法相比,该方法不需要将样品进行粉碎,不仅节省能源与人力,还能避免粉碎过程对活性成分造成的损失与损害,因此具有很好的推广价值。

利用酿酒酵母重组表达Sporotrichum laxum聚酮合酶2并发酵生产烷基间苯二酚

烷基间苯二酚(ARs)是一类在麦类等作物中存在的特殊酚类类脂,具有抗菌等重要的生物活性.本研究以酿酒酵母BJ5464-NpgA为宿主,成功重组表达了来自Sporotrichum laxum ATCC 15155的三型聚酮合酶2(Sl-PKS2).利用高效液相和质谱检测表明,该重组菌具有发酵生产5种不同ARs的能力.在发酵48 h后,上述5种ARs的产量达到最高.研究表明生物安全的宿主酿酒酵母具有发酵生产ARs的潜力.本研究对利用工业发酵生产ARs有重要的理论意义及实践价值.

GC-MS和LC-MS/MS分析麦粉中烷基间苯二酚同系物组成

建立气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用法和液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法测定麦粉中烷基间苯二酚组成。样品经乙酸乙酯超声提取,在GC-MS中,硅烷化衍生处理,采用选择离子监测模式进行测定,以外标法进行定量;在LC-MS/MS中,经固相萃取富集净化,以C18色谱柱分离,采用电喷雾负离子模式扫描、多反应监测模式检测,以外标法进行定量。结果表明,GC-MS和LC-MS/MS均在0.001~5μg/mL质量浓度范围内有良好的线性关系(R^(2)>0.98),GC-MS法的检出限为2.0~6.1μg/g,加标回收率在94.17%~99.15%之间,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)在2.94%~4.87%之间;LC-MS/MS法的检出限为2.0~8.4μg/g,加标回收率在89.05%~99.06%之间,RSD在2.21%~4.17%之间。本研究建立了2种线性关系良好、低检测限、高灵敏度的检测方法,均可适用于市售麦粉产品中烷基间苯二酚同系物定性定量分析,将为麦类全谷物产品品质控制与检测提供技术指导。

5-十七烷基间苯二酚对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用

为研究5-十七烷基间苯二酚(AR-C17)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其潜在机制,采用CCK-8方法检测不同处理下的细胞存活率变化;DCF-DA荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)变化情况;流式细胞术测定胞内肿瘤增殖标记物Ki-67的表达,细胞凋亡的变化,线粒体膜电位的变化及自噬体的形成情况;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ等凋亡、自噬相关蛋白的表达情况。结果表明,与对照组相比,AR-C17显著抑制了MDA-MB-231细胞存活率,促进胞内ROS的生成,降低肿瘤增殖标志物Ki-67的表达,降低线粒体膜电位,上调Bax/Bcl-2的蛋白表达比率,增加活性Caspase的表达量,诱导MDA-MB-231细胞发生线粒体途径的凋亡;同时,AR-C17能够增加LC3-Ⅱ蛋白表达量,促进自噬体形成,诱导细胞发生自噬;此外,采用自噬抑制剂与AR-C17共同作用能够降低细胞存活率,进一步促进细胞凋亡。研究结果表明,AR-C17能够诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡和自噬,达到抑制乳腺癌细胞增殖的作用。

超声波辅助提取全麦粉中烷基间苯二酚的工艺优化

烷基间苯二酚(ARs)是小麦麸皮中的酚类类脂,具有多种生理活性,也是粮食行业标准(LS/T 3244—2015)评判全麦粉的重要生物标记物。为高效、稳定地提取全麦粉中的ARs,采用超声波辅助提取手段,研究了超声功率、提取时间及料液比3个因素对ARs提取量的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验对提取工艺参数进行了优化。结果表明:超声波辅助提取全麦粉中ARs的最佳工艺参数为超声功率285 W、提取时间2 min、料液比1∶50(g/mL)。此条件下ARs提取量不低于连续振荡提取法,但将提取时间由48 h缩短至2 min,且样品用量少、重复性好,适用于全麦粉中ARs的快速提取。

麦麸中烷基间苯二酚诱导HepG2细胞自噬和凋亡

采用制备色谱从麦麸中制备烷基间苯二酚同系物(alkylresorcinols,ARs),研究其诱导HepG2细胞自噬和凋亡作用。结果表明:经液相色谱-质谱确认制得的烷基间苯二酚为C19:0、C21:0同系混合物;细胞毒性实验结果显示,10~320 μg/m L的ARs能显著抑制Hep G2细胞生长(P<0.05、P<0.01、P<0.001),且呈剂量依赖效应;与对照组相比,160 μg/m L ARs作用24 h,Hep G2细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),剪切型Caspase3、Bax/Bcl-2蛋白表达高度显著升高(P<0.001),Beclin-1、LC3II蛋白表达极显著升高(P<0.01),p62蛋白表达极显著降低(P<0.01)。这些结果表明,ARs可以诱导Hep G2细胞自噬,激活Caspase通路诱导Hep G2细胞凋亡,抑制Hep G2细胞生长。

小麦烷基间苯二酚对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗改善作用及机制

低度慢性炎症状态是肥胖导致机体胰岛素抵抗的重要原因之一。小麦烷基间苯二酚(alkylresorcinols,ARs)是全麦食品膳食的生物标记物和重要的活性功能成分。利用体外炎症因子诱导,建立3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素抵抗模型,通过检测脂肪细胞脂质分解和葡萄糖吸收与利用情况,探讨小麦ARs在炎症状态下对脂肪细胞胰岛素抵抗的保护机制。研究结果表明:不同浓度小麦ARs(5~20μmol/L)干预能够剂量依赖性地改善炎症因子诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,脂肪细胞对葡萄糖利用率分别提升了4.3%、10.2%和24.0%;小麦ARs可以显著缓解炎症因子导致的脂肪细胞脂质分解。进一步机制解析发现:炎症因子显著降低了脂肪细胞糖代谢两个关键蛋白Akt的磷酸化(p-Akt)及其下游GLUT4蛋白表达,导致其葡萄糖利用障碍,而ARs干预显著提升了这两个蛋白的表达;采用PI3K抑制剂(LY294002)预处理脂肪细胞后,ARs对于脂肪细胞p-Akt及GLUT4表达的增加被抑制,相应的对于葡萄糖吸收的改善作用也被显著降低,脂肪细胞脂质分解增加,表明ARs通过特异性激活p-Akt/GLUT4信号通路改善了3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗。最后,研究了小麦ARs的5种主要单体成分分别对于脂肪细胞胰岛素抵抗的改善作用,结果表明,十七烷基间苯二酚是小麦ARs发挥生理功能的主要活性物质。

烷基间苯二酚分析技术及其生理活性研究进展

小麦、黑麦等谷物中存在一类特殊的两亲性酚类类脂——烷基间苯二酚。烷基间苯二酚是鉴别谷物中的生物标记物,可作为全谷物品质评价的一项重要指标。烷基间苯二酚具有多种生理活性,因而受到研究者的广泛关注。该文首先介绍了烷基间苯二酚的分离提取方法,进而综述了烷基间苯二酚的定量定性分析方法以及生理活性,最后对烷基间苯二酚的分析研究方法和未来的发展方向进行了展望,期望能为烷基间苯二酚的绿色提取和潜在活性的进一步研究提供科学参考。

电化学分析法快速测定紫小麦中的烷基间苯二酚

研究了烷基间苯二酚在玻碳电极上的氧化还原特征,建立了紫小麦中烷基间苯二酚的快速检测方法。根据循环伏安图显示0.52 V处有一个峰形良好的氧化峰,无还原峰,表明烷基间苯二酚在电极表面发生了氧化反应,且反应不可逆。利用微分脉冲伏安法对其检测条件进行优化,得到检测条件:电解质溶液为Na_( 2 )HPO_( 4)-KH_( 2 )PO_( 4)溶液,pH=9,电参数条件为电位增量0.008 V,脉冲间隔0.3 s。在此条件下,研究烷基间苯二酚浓度对氧化峰电流的影响,二者在2.5~50μmol/L范围内呈良好线性关系,线性回归方程为I_( p)=0.57595+0.06763 C(R^( 2)=0.99972),最低检测限为5.78×10^(-7) mol/L(R_( SN)=3)。采用该方法检测紫小麦样品中的烷基间苯二酚含量,样品平均加标回收率在99.5%~102.0%之间,该检测结果与国标方法基本一致。且此方法可以缩短检测时间,节约成本,灵敏度较高,从而达到快速、灵敏检测样品,可广泛用于麦类中烷基间苯二酚的检测中。

麦源烷基间苯二酚的提取及其功能特性研究进展

简要介绍了烷基间苯二酚(ARs)的来源和结构特性,综述了麦源烷基间苯二酚的提取技术、主要生理活性及其作用机制的研究进展,提出了烷基间苯二酚的研究、开发中存在的问题及建议。

链霉菌Streptomyces sp.KIB-H1424中的一个新的烷基间苯二酚类化合物

运用色谱学方法对一株来自云南省玉溪市元江县的土壤链霉菌Streptomyces sp.KIB-H1424的次级代谢产物进行分离纯化,得到6个单体化合物。运用NMR、MS及与文献数据对比等手段,确定其为一系列的烷基间苯二酚类似物,其中包括1个新的烷基间苯二酚类化合物Adiposatatin E(1)以及5个已知的烷基间苯二酚类似物Adipostatin A(2)、Adiposatin B(3)、Adipostatin C(4)、Adipostatin D(5)和5-Heptadecyl-1,3-benzenediol(6)。运用滤纸片法测定6个化合物对几种病原细菌和真菌的抑菌活性,发现化合物1~6不具有显著的抑菌活性。

全麦粉和小麦粉中烷基间苯二酚同系物组成的对比分析

[目的]建立全麦粉标记物烷基间苯二酚(ARs)的高效液相检测方法,对全麦粉和小麦粉中ARs同系物组成进行分析,实现全麦粉真伪品质评价.[方法]探究高效液相条件,建立ARs同系物5-十七烷基间苯二酚(C17:0)、5-十九烷基间苯二酚(C19:0)、5-二十一烷基间苯二酚(C21:0)、5-二十三烷基间苯二酚(C23:0)和5-二十五烷基间苯二酚(C25:0)的高效液相检测方法,并进行方法学评价.以国内外全麦粉、小麦粉及小麦麸皮等共47份样品为研究对象,测定ARs同系物的含量,分析其ARs同系物组成,并进行热图分析和主成分分析.[结果]选用ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm,Agilent)色谱柱,流动相选用0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸甲醇溶液进行梯度洗脱,在紫外检测波长280 nm、柱温35℃、流速0.5 mL·min^-1、进样量20μL条件下,可在35 min内有效分离5种ARs同系物,各个同系物的色谱峰峰形对称,分离度好.经方法学评价,该方法具有良好的精密度和灵敏度,标准曲线线性相关系数均大于0.999,检出限为0.06-0.19μg·mL^-1,回收率为81.16%-112.92%,精密度标准偏差为0.02%-4.02%,可作为ARs同系物的测定方法.通过热图聚类分析可知不同检测样品中ARs同系物组成及总量存在显著差异(P<0.05).麦粉样品ARs同系物组成中C21:0最多,占33%-61%;C19:0次之,占12%-44%;C17:0、C23:0和C25:0的含量占比较小.美国、加拿大全麦粉的ARs同系物组成丰富度和含量相近,国外全麦粉中ARs同系物组成含量高于国内全麦粉.国内全麦粉中的ARs同系物组成比小麦粉中的ARs同系物组成丰富度高,但个别小麦粉除外.小麦麸皮F1中ARs同系物组成和总含量显著高于全麦粉和小麦粉,其ARs总含量高达1795.78μg·g^-1,与其他样品相比差异显著(P<0.05).经主成分分析得出,麦粉样品间的主要差异指标为ARs同系物组成含量,作为第1主成分,其累积贡献率为98.40%.小麦麸皮与其他麦粉样品的相对分散最远,中国小麦粉的分散度最大.美国全麦粉和加拿大全麦粉几乎重叠,而中国全麦粉和部分小麦粉与美国、加拿大全麦粉部分交叉.[结论]本研究建立的液相方法能够有效、快速的对全麦粉中ARs同系物进行定量,适用于麦类全谷物产品中ARs同系物含量的测定.同时,通过全麦粉和小麦粉中ARs同系物组成对比分析可知,全麦粉中的ARs同系物组成丰富度优于小麦粉中的ARs同系物组成丰富度.

烷基间苯二酚甲醛树脂与间苯二酚-80在半钢子午线轮胎带束层胶料中的应用对比

对比两种间苯二酚改性物在半钢子午线轮胎带束层胶中的应用效果。试验结果表明,应用烷基间苯二酚甲醛树脂的配方其胶料与钢丝帘线的粘合性能优于应用间苯二酚-80的配方。