环状RNA在缺氧/复氧诱导的大鼠H9c2细胞焦亡中的作用及其机制

目的探讨环状RNA(circRNA)在缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为A~F组,分别进行缺氧0、1、3、6、12、24 h处理后,再进行6 h复氧,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及Western blot方法检测H/R处理的H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白表达水平,确定诱导H9c2细胞焦亡的最佳缺氧时间。将H9c2细胞分为对照组和实验组,对照组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,实验组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测两组H9c2细胞中circRNA的表达水平。将H9c2细胞分为G~I组,G组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,H组转染对照siRNA(NC),I组转染mmu_circ_0000723特异性siRNA(siRNA-mmu_circ_0000723)。转染24 h后,采用RT-qPCR方法检测各组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平。将H9c2细胞分为J~M组,J组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,K组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,L组和M组H9c2细胞分别转染对照NC和siRNA-mmu_circ_0000723,并于转染24 h后进行H/R处理。分别采用碘化丙啶(PI)染色、LDH试剂盒和Western blot方法检测J~M组的PI阳性细胞比率、细胞上清液中LDH活性,以及焦亡相关蛋白的表达水平。结果A~F组H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异有显著性(F=24.86~2153.00,P<0.05)。与A组相比,D组H9c2细胞中LDH活性及焦亡相关蛋白的表达显著性差异最明显(t=4.14~62.88,P<0.05)。与对照组相比,实验组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平明显降低(t=9.78,P<0.05)。G~I组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达差异有显著性(F=348.20,P<0.05);与G组相比,I组H9c2细胞中mmu_circ_0000723相对表达水平显著降低(t=22.88,P<0.05)。J~M组PI阳性细胞比例、细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异均有显著性(F=34.39~8528.00,P<0.05);与K组相比,M组H9c2细胞上述5个指标均明显升高(t=4.99~54.00,P<0.05),而L组细胞上述5个指标差异无显著性(P>0.05)。结论mmu_circ_0000723通过调控焦亡相关蛋白的表达,在H/R诱发的H9c2细胞焦亡中发挥重要作用。