基于NLRP3/Caspase-1细胞焦亡通路研究金匮肾气丸治疗慢性肾衰竭大鼠的疗效机制

目的以NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like protein3,NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)细胞焦亡通路为切入点,研究金匮肾气丸改善慢性肾衰竭大鼠的疗效机制。方法将80只7周龄雄性Wistar大鼠以随机的方式抽取正常组和假手术组各20只,其中正常组不行手术干预,假手术组仅行手术剥离双肾被膜;40只造模组大鼠依据文献方法行5/6肾切除术制备慢性肾衰竭模型,4周后将造模组造模成功并存活的34只大鼠随机平均分为金匮肾气丸组17只及模型组17只。其中金匮肾气丸组予金匮肾气丸药液,正常组、假手术组及模型组予等量生理盐水进行灌胃56 d。期间观察大鼠一般情况。第57天取材检测大鼠的红细胞(red blood cell,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)值。并测定左肾组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白[apoptosis-associ-ated speck-like protein containing caspase recruitment domain(CARD),ASC]、Caspase-1、白细胞介素(interleukin,IL)-18及IL-1β的mRNA及蛋白含量表达情况及肾组织病理形态。结果正常组和假手术组大鼠各项指标无明显差别(P>0.05)。金匮肾气丸组大鼠的RBC、Hb水平相对模型组显著升高(P<0.05)。金匮肾气丸组大鼠的Scr、BUN水平相对模型组显著降低(P<0.05)。金匮肾气丸组大鼠相对于模型组大鼠NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1β的mRNA和蛋白表达含量则显著降低(P<0.05),光学显微镜及透射电镜观察显示:正常组及假手术组结构形态正常。金匮肾气丸组大鼠病变程度明显轻于模型组大鼠。结论金匮肾气丸可明显改善CRF大鼠的贫血状态、肾功能情况,升高RBC、Hb水平,降低Scr、BUN水平。金匮肾气丸可明显减轻慢性肾衰竭大鼠炎症反应情况,延缓肾衰竭进展。金匮肾气丸延缓慢性肾衰竭进展的机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路,下调NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1β的表达有关。

ROCK通路抑制剂对糖氧剥夺星形胶质细胞的保护作用及机制

目的研究糖氧剥夺(OGD)及ROCK通路抑制对星形胶质细胞的保护作用及机制的影响。方法2022年6月—12月以大鼠CTX TNA2星形胶质细胞系为实验对象,分为对照组A组、糖氧剥夺组B组和法舒地尔组C组。B组构建糖氧剥夺(OGD)干预星形胶质细胞体外模型,C组选用ROCK通路抑制剂法舒地尔(Fasudil)干预模型细胞。分析糖氧剥夺及Fasudil对星形胶质细胞形态、焦亡通路、炎性反应及NRF2/HO-1通路mRNA表达的影响。结果与对照组相比,糖氧剥夺(OGD)干预星形胶质细胞胞体皱缩,延展性减低,细胞伪足减少,细胞体萎缩;转录组测序结果显示,焦亡通路NLRP3、Caspase-1及炎性因子IL-1β、IL-18 mRNA表达相对增加(P<0.05);NRF2、OH-1 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与糖氧剥夺(OGD)干预组相比,法舒地尔(Fasudil)干预后星形胶质细胞延展性增强,细胞伪足增多;转录组测序结果显示,焦亡通路NLRP3、Caspase-1及炎性因子IL-1β、IL-18 mRNA表达降低(P<0.05);NRF2、OH-1 mRNA表达明显升高(P<0.05);所有数据以mean±SEM形式显示,两组比较选用Student’s t-test;多组比较选用one-way ANOVA,多组组内比较选用LSD post-hoc test;P<0.05代表有统计学意义。结论本实验证实,糖氧剥夺(OGD)能够破坏星形胶质细胞形态,抑制NRF2/HO-1信号通路表达;促进焦亡通路及炎性因子表达。法舒地尔(Fasudil)能够改善糖氧剥夺(OGD)干预后星形胶质细胞形态;逆转糖氧剥夺(OGD)干预对星形胶质细胞焦亡通路、炎性反应及NRF2/HO-1通路相关基因NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NRF2、OH-1 mRNA表达的影响;进而发挥保护作用。