基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

一测多评法同时测定熟地黄中4种苯乙醇苷

目的建立一测多评法同时测定熟地黄中毛蕊花糖苷、洋地黄叶苷C、焦地黄苯乙醇苷A1、焦地黄苯乙醇苷B1的含有量。方法熟地黄60%甲醇提取物的分析采用MGⅡC_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长334 nm;柱温30℃。以毛蕊花糖苷为内标,建立毛蕊花糖苷与洋地黄叶苷C、焦地黄苯乙醇苷A1、焦地黄苯乙醇苷B1的相对校正因子,再测定另3种成分的含有量;采用外标法和一测多评法同时测定17批熟地黄和18批生地黄中4种成分的含有量,以验证一测多评法的可行性和准确性。结果毛蕊花糖苷、洋地黄叶苷C、焦地黄苯乙醇苷A1、焦地黄苯乙醇苷B1分别在9.496～118.70μg/mL(r=1.000 0)、8.192～102.40μg/mL(r=1.000 0)、11.000～137.50μg/mL(r=1.000 0)、3.019 2～37.74μg/mL(r=1.000 0)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.31%、98.30%、99.15%、101.88%,RSD分别为1.12%、1.35%、1.33%、1.19%。一测多评法所得结果接近于外标法。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于熟地黄和生地黄的质量评价。

人参皂苷Rb1通过调控Nrf2/ARE信号通路抗氧糖剥夺/复氧后神经细胞焦亡的研究

目的从Nrf2/ARE抗氧化信号通路探讨人参皂苷Rb1抗氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后SH-SY5Y细胞焦亡的作用机制。方法野生型SH-SY5Y细胞设立对照组、模型组、不同剂量人参皂苷Rb1组,CCK-8法检测细胞存活率。构建Nrf2沉默SH-SY5Y(si-Nrf2-SH-SY5Y)细胞,设立对照组、模型组、人参皂苷Rb1组、si-Nrf2-SH-SY5Y模型组、si-Nrf2-SH-SY5Y人参皂苷Rb1组。CCK-8法检测细胞存活率;LDH漏出率、Hoechst/PI染色和caspase-1蛋白的表达评价细胞焦亡;免疫荧光染色检测Nrf2蛋白活化;Western blot法检测全细胞Nrf2和HO-1蛋白的表达。结果人参皂苷Rb1能够提高OGD/R后细胞存活率,降低细胞焦亡,上调Nrf2蛋白的表达,维持HO-1蛋白的高表达。沉默Nrf2基因可导致细胞损伤和细胞焦亡进一步加重,同时人参皂苷Rb1激活Nrf2/ARE信号通路和抗细胞损伤、细胞焦亡的作用受到抑制。结论Nrf2/ARE抗氧化信号通路负调控OGD/R后SH-SY5Y细胞焦亡,人参皂苷Rb1通过调控Nrf2/ARE抗氧化信号通路,从而发挥抗细胞焦亡的作用。

广防风中的苯乙醇苷类化合物

目的研究广防风属植物广防风 Epimeredi indica的化学成分 ,从中寻找具有生物活性的天然化合物。方法采用硅胶和反相硅胶 RP- 18柱色谱分离 ,运用有机波谱分析确定化合物结构。结果从广防风水提取物中分离得到 3个苯乙醇苷类化合物 ,经鉴定分别为 :2 - (3-甲氧基 - 4 -羟基 )苯基 -乙醇 1- O -α- L - [(1→ 3) -鼠李糖基 - 6 - O-阿魏酰基 ]葡萄糖苷 (I)、2 - (3,4 -二羟基 )苯基 -乙醇 1- O一 α- L- [(1→ 3) -鼠李糖基 - 4 - O-咖啡酰基 ]葡萄糖苷 ( )、2 - (3,4 -二羟基 )苯基 -乙二醇 (1→ 1) (2→ 2 ) [(1→ 3) -鼠李糖基 - 4 - O-咖啡酰基 ]葡萄糖苷 ( )。结论化合物 I为新化合物 ,命名为广防风苷 A。 和 都是首次从该植物中得到。

神经节苷脂预处理对布比卡因诱导N2a细胞焦亡的影响及其机制

目的观察神经节苷脂(GM-1)预处理对布比卡因诱导N2a细胞焦亡的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期N2a细胞随机分为3组:布比卡因组(B组)加入终浓度为900μmol/L的布比卡因培养24 h,GM-1预处理组(G+B组)加入5μmol/L GM-1预处理24 h后再加入900μmol/L的布比卡因继续培养24 h,对照组(C组)不加入GM-1或布比卡因。取各组细胞,分别用倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态;采用CCK-8法测算细胞存活率,以细胞存活率表示细胞活力;采用TUNEL染色试验测算TUNEL染色阳性细胞率,以TUNEL染色阳性细胞率表示细胞凋亡率;采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验测算各组细胞中LDH含量;采用天冬氨酰特异性半胱氨酰蛋白酶1(Caspase-1)活性实验测算各组细胞中Caspase-1活性;采用Western blotting法检测各组细胞焦亡相关蛋白细胞炎症小体活化蛋白质-gasdermin D(GSDMD)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)和Caspase-1蛋白表达量。结果C组细胞胞体形态多样且饱满、形态规则,细胞膜完整且光滑;B组细胞皱缩变圆,细胞突触折断、消失,产生凋亡小体样的细胞突起囊泡;G+B组细胞损伤形态明显减轻,未见细胞膜的完整性丧失及微孔形成。与C组相比,B组细胞活力下降,细胞凋亡率升高,LDH含量升高,Caspase-1活性升高,GSDMD、NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量均升高(P均<0.05);与B组相比,G+B组细胞活力升高,细胞凋亡率下降,LDH含量下降,Caspase-1活性下降,GSDMD、NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量均降低(P均<0.05)。结论布比卡因可通过提高N2a细胞膜通透性,导致细胞活力下降、LDH释放、Caspase-1活性和细胞凋亡率升高,促进细胞焦亡,其机制可能与GSDMD,NLRP3,Caspase-1蛋白相对表达量升高有关;GM-1预处理可抑制布比卡因诱导的N2a细胞焦亡过程,其机制可能与降低GSDMD、NLRP3、Cas⁃pase-1蛋白相对表达量有关。

HPLC法测定软脉灵口服液中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷

目的建立HPLC法测定软脉灵口服液中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷。方法采用Venusil XBP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5µm);以乙腈–0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为330 nm(0~17 min检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)、280 nm(17~50 min检测迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10µL。结果毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷分别在1.23~30.75、0.59~14.75、0.71~17.75、1.47~36.75、9.78~244.50、6.57~164.25、1.19~29.75μg/mL线性关系良好(r≥0.9991);平均回收率分别为99.14%、97.62%、96.84%、98.96%、100.11%、99.46%、98.92%,RSD值分别为1.15%、1.27%、1.02%、0.96%、0.65%、1.41%、0.87%。结论该方法操作简便、重复性好,为软脉灵口服液中多指标质量评价和临床应用提供参考依据。

消风止痒颗粒中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素的HPLC法测定及其化学计量学综合评价

目的建立HPLC法同时测定消风止痒颗粒中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素,并采用化学计量学方法对检测结果进行综合评价。方法采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:330 nm(0~14 min检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)、254 nm(14~31 min检测升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷)、270 nm(31~55 min检测苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素);体积流量0.9 mL/min;柱温25℃;进样量10μL。采用SPSS26.0统计软件对消风止痒颗粒中9种成分进行聚类分析和主成分分析。结果毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素分别在2.53~63.25、1.09~27.25、8.17~204.25、2.38~59.50、4.07~101.75、1.74~43.50、0.66~16.50、1.47~36.75、2.86~71.50μg/m L线性关系良好;平均回收率分别为99.01%、98.17%、100.13%、97.63%、98.72%、97.22%、96.93%、99.24%、100.01%,RSD值分别为1.42%、1.26%、0.72%、1.55%、0.84%、1.06%、1.18%、0.67%、0.95%;11批样品聚类分析为3类,主成分1~3是影响消风止痒颗粒质量评价的主要因子。结论该方法操作简便、重复性好,可作为消风止痒颗粒中多指标成分质量评价模式。

HPLC法测定舒筋跌打膏中哈巴苷、哈巴俄苷、梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷和藁本内酯

目的建立HPLC波长切换法同时测定舒筋跌打膏中哈巴苷、哈巴俄苷、梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷、藁本内酯的方法。方法 Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;0~31.0 min在210 nm波长下检测哈巴苷、哈巴俄苷和梓醇,31.0~55.0 min在330 nm波长下检测毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷和藁本内酯;体积流量0.9 mL/min;柱温30℃;进样量20μL。结果哈巴苷、哈巴俄苷、梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷、藁本内酯分别在2.06~51.50、0.78~19.50、4.07~101.75、2.66~66.50、1.09~27.25、1.71~42.75、13.58~399.50μg/mL线性关系良好;各成分的平均回收率分别为99.41%、97.38%、99.18%、98.53%、97.98%、98.98%、99.96%,RSD值分别为0.86%、1.41%、1.11%、1.23%、0.92%、0.95%、0.76%。结论该方法操作便捷、重复性好,可用于舒筋跌打膏的质量控制。

六味地黄汤干预肾纤维化作用机制的网络药理学分析

目的基于网络药理学方法及体内外实验探讨六味地黄汤(LWDHD)干预肾纤维化的潜在作用机制。方法(1)通过TCMSP平台检索筛选LWDHD的活性成分及其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、TTD数据库检索肾纤维化疾病相关靶点;利用R语言VennDiagram包对LWDHD活性成分靶点和肾纤维化疾病相关靶点取交集,得到共同(交集)靶点,即为LWDHD治疗肾纤维化的关键靶点;运用Cytoscape 3.9.1软件构建LWDHD治疗肾纤维化的“活性成分-关键靶点”网络,分析核心活性成分;通过STRING平台构建共同靶点蛋白互作(PPI)网络;分别通过DAVID数据库、R语言软件的Pathview包对共同靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析;采用AutoDock Vina软件对核心活性成分与核心靶点进行分子对接。(2)体内实验:将24只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、LWDHD组(6.75 g·kg^(-1))及依那普利组(10 mg·kg^(-1)),每组6只。采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾纤维化大鼠模型。各组以相应药物灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,连续7 d。采用HE、MASSON染色法观察大鼠肾脏组织病理变化和胶原沉积情况。(3)体外实验:将体外培养的HK-2细胞分为正常对照组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清+200μmol·L^(-1)CoCl_(2))、LWDHD组(10%含药血清+200μmol·L^(-1)CoCl_(2));采用200μmol·L^(-1)CoCl_(2)模拟肾内缺氧环境,同时加入空白或含药血清,培养24 h后收集细胞;采用Western Blot法检测HK-2细胞HIF-1α蛋白表达水平。结果(1)共得到LWDHD活性成分40个,活性成分作用靶点194个,肾纤维化疾病相关靶点5135个,共同(交集)靶点即LWDHD治疗肾纤维化的关键靶点159个。筛选核心活性成分主要有槲皮素、豆甾醇、山柰酚、β-谷甾醇、薯蓣皂苷元等,核心靶点有热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、c-Jun氨基末端激酶(JUN)、蛋白激酶B(AKT1)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)等。GO功能主要与细胞因子介导信号通路、基因表达正向调控、凋亡过程负调控、缺氧反应等生物过程相关;KEGG关键通路有动脉粥样硬化、癌症途径、病毒感染、晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、白细胞介素17(IL-17)信号通路、HIF-1信号通路等。槲皮素与HSP90AA1、HIF-1α结合力中等,豆甾醇与HSP90AA1、JUNE、AKT1、HIF-1α结合力中等,薯蓣皂苷元与HIF-1α有较强的结合力。(2)体内实验显示,与假手术组比较,模型组大鼠出现肾间质炎性细胞浸润、空泡化、肾小管萎缩,部分肾小管代偿性扩张;肾组织纤维化明显,可见大量染成蓝色的胶原纤维,胶原容积分数显著升高(P<0.01)。与模型组相比,LWDHD组及依那普利组大鼠肾组织病变程度减轻,炎性细胞减少,肾小管结构损伤明显减轻;肾组织蓝色胶原纤维明显减少,纤维化程度明显减轻,胶原容积分数显著降低(P<0.01)。(3)体外实验显示,与正常对照组比较,模型组细胞HIF-1α蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,LWDHD组细胞HIF-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论LWDHD治疗肾纤维化作用可能是通过槲皮素、豆甾醇、薯蓣皂苷元等多种活性成分,作用于HSP90AA1、JUNE、AKT1、HIF-1α等多靶点,通过AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路等多条信号通路来实现的。

以caspase-1介导细胞焦亡筛选治疗糖尿病肾病潜在的中药及单体成分

目的以caspase-1介导细胞焦亡为基础,筛查并探究中药及单体有效成分治疗糖尿病肾病(DN)的分子机制。方法利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选靶向caspase-1的中药以及活性单体成分,并通过GeneCards数据库检索单体成分潜在的作用基因靶点,运用Cytoscape构建单体化合物-基因靶点网络构图。采用基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析,预测中药及其单体的分子作用机制。实验SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组(DM)和人参皂苷Rh2药物治疗组(Rh2)。DM组和Rh2组通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(60 mg/kg)构建DN大鼠,对照组注射等量生理盐水。在造模成功后Rh2组大鼠给予Rh2(20 mg·kg^-1·d^-1)灌胃12周,对照组和DM组大鼠给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察大鼠肾脏形态;Western blot检测焦亡标志蛋白caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达;试剂盒检测大鼠血浆IL-1β、IL-18含量以及cathepsin B和cathepsin L活性。结果人参皂苷Rh2与caspase-1靶点蛋白能够有效分子对接,数据库筛选共涉及14个靶基因,GO功能富集分析共27个条目,其中分子功能(MF)条目4个,细胞组成(CC)条目10个,生物过程(BP)条目13个。KEGG通路富集筛选涉及溶酶体、糖胺聚糖降解、半乳糖代谢和鞘脂代谢通路。DM大鼠造模12周后肾脏出现显著的病理学改变,cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18表达显著增加(P<0.05或P<0.01),血浆IL-1β、IL-18含量显著升高(P<0.01),cathepsin B、cathepsin L活性显著降低(P<0.01)。与DM组相比,Rh2组大鼠肾脏病变得到显著改善,焦亡标志蛋白(cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18)表达显著下调(P<0.05或P<0.01),血浆IL-1β、IL-18含量显著降低(P<0.01),cathepsin B和cathepsin L活性显著增加(P<0.05)。结论人参皂苷Rh2可能通过溶酶体途径抑制caspase-1介导的细胞焦亡进而改善DN肾脏损伤。

HPLC法同时测定春血安胶囊中8种成分的含量

目的建立能同时测定春血安胶囊中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B 1、肉桂酸、桂皮醛、泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B含量的HPLC法。方法采用Kromasil C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:25℃;流动相:乙腈-1 mL·L^-1磷酸,梯度洗脱;流速:0.8 mL·min^-1;检测波长:330(检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B 1),280(检测肉桂酸和桂皮醛)和208 nm(检测泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B)。结果8种成分分别在12.68~253.60,4.96~99.20,0.89~17.80,14.07~281.40,0.66~13.20,1.38~27.60,1.14~22.80,4.46~89.20μg·mL^-1范围内线性关系良好(r≥0.9991);平均回收率分别为99.39%,98.55%,97.14%,100.01%,96.94%,98.78%,97.43%,99.20%;RSD值分别为0.91%,1.43%,1.21%,0.84%,1.18%,1.33%,1.05%,0.79%。结论该方法操作简便、重复性好,可用于春血安胶囊的质量控制。

高效液相色谱波长切换法同时测定清凉膏药中7种成分的含量

目的建立高效液相色谱波长切换法测定清凉膏药中氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷的含量。方法采用Dikma Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃;采用甲醇-乙腈(3∶1)与0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min^-1;氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素的检测波长为310 nm,梓醇的检测波长为210 nm,毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷的检测波长为330 nm。结果氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷的线性范围分别为2.17~43.40 mg·L^-1(r=0.9991),1.76~35.20 mg·L^-1(r=0.9998),0.88~17.60 mg·L^-1(r=0.9993),3.26~65.20mg·L^-1(r=0.9996),2.37~47.40 mg·L^-1(r=0.9999),1.19~23.80 mg·L^-1(r=0.9995),1.46~29.20 mg·L^-1(r=0.9994);平均加样回收率分别为98.3%(RSD=1.4%)、97.6%(RSD=1.1%)、97.0%(RSD=1.5%)、100.0%(RSD=0.69%)、99.2%(RSD=0.99%)、97.4%(RSD=1.0%)、98.4%(RSD=0.89%)。结论该方法操作便捷、重复性好,可用于清凉膏药的的定量分析和质量评价。

HPLC梯度洗脱法测定抗饥消渴片中7种成分的含量

目的建立HPLC梯度洗脱法同时测定抗饥消渴片中原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B的含量,为抗饥消渴片质量标准提升提供数据支持。方法采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温35℃;流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1;检测波长分别为280 nm(0~24.0 min检测原儿茶醛、儿茶素和表儿茶素)、330 nm(24.0~36.0 min检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)和296 nm(36.0~50.0 min检测麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B)。结果原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B分别在5.96~119.20、1.18~23.60、8.76~175.20、2.87~57.40、1.59~31.80、1.26~25.20、0.88~17.60μg·mL^-1内与峰面积线性关系良好(r≥0.9991);7种测定成分的平均回收率均>96.0%,RSD均≤2.0%。结论该方法操作简便、重复性好,可用于抗饥消渴片中多种指标性成分的质量控制。

基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准研究

目的 建立基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准,为鲜地黄配方颗粒质量控制提供参考。方法 根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》,制备25批鲜地黄标准汤剂,测定各批次标准汤剂的出膏率、指标成分梓醇和地黄苷D的含量,构建能全面表征鲜地黄环烯醚萜苷类成分和苯乙醇苷类成分的UPLC特征图谱;基于标准汤剂出膏率、指标成分含量、特征图谱的一致性,制备3批鲜地黄配方颗粒,验证制定标准的合理性。结果 鲜地黄标准汤剂出膏率实测范围为13.93%~20.09%;梓醇和地黄苷D的质量分数分别为36.14~73.37、2.96~5.33 mg/g;环烯醚萜苷类成分特征图谱共标定了10个共有峰,指认峰3、4、6分别为梓醇、地黄苷D、益母草苷;苯乙醇苷类成分特征图谱共标定了8个共有峰,指认峰1、4、5、6分别为洋地黄叶苷C、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、异毛蕊花糖苷;3批鲜地黄配方颗粒出膏率、指标成分含量、特征图谱均与同批次药材制备的标准汤剂接近,且均在质量标准规定范围内。结论 该研究建立的基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准科学合理、稳定可行,可为鲜地黄配方颗粒的质量控制提供参考。

基于一测多评法同时测定乌发丸中7种成分的含量

目的:建立一测多评(QAMS)法,同时测定乌发丸中梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、异去甲基蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯的含量。方法:采用高效液相色谱法,选取Agilent SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃。以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子,并计算其含量。结果:梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、马替诺皂苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、异去甲基蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯分别在4.67~116.75、2.74~68.50、1.06~26.50、1.68~42.00、6.44~161.00、0.86~21.50、1.29~32.25μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率及相对标准偏差(RSD)分别为98.79%(1.38%)、97.85%(1.05%)、97.29%(1.40%)、99.05%(0.83%)、100.19%(0.71%)、98.22%(0.96%)和96.98%(1.20%),QAMS法所测乌发丸中7种指标性成分的含量与外标法差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究建立的QAMS法简单、准确,可同时测定乌发丸中7种成分含量。

芪明颗粒中8种成分的含量测定及聚类分析

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定芪明颗粒中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、决明子苷B2、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 ml·min-1,检测波长为330 nm(检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)、250 nm(检测3’-羟基葛根素、葛根素和3’-甲氧基葛根素)和284 nm(检测决明子苷B2、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C)。采用SPSS 26.0统计软件对含量测定结果进行聚类分析。结果:毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、决明子苷B2、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C分别在1.76~35.20μg·ml-1,0.64~12.80μg·ml-1,4.48~89.60μg·ml-1,13.59~271.80μg·ml-1,3.52~70.40μg·ml-1,2.18~43.60μg·ml-1,4.66~93.20μg·ml-1和1.29~25.80μg·ml-1范围内线性关系良好(r≥0.9991);平均加样回收率分别为99.24%,96.85%,99.69%,100.02%,98.89%,99.22%,98.11%和97.64%,RSD分别为0.95%,1.06%,0.81%,0.74%,1.45%,1.34%,1.17%和1.25%(n=9)。10批样品聚类分析为2类。结论:所建立的方法操作简便、重复性好,通过聚类分析提出了含量差异的影响因素,可用于芪明颗粒的质量控制。

地黄的化学成分研究

目的研究地黄Rehmanniaglutinosa块根的化学成分。方法通过正相硅胶、SephadexLH-20以及反相HPLC柱色谱方法对地黄的化学成分进行分离纯化，应用谱学技术鉴定化合物的结构。结果从地黄块根乙醇提取物中分离得到29个化合物，分别鉴定为1，2，5，6-四氢-1-甲基-2-氧代-4-吡啶乙酸（1）、5-deoxyantirrhinoside（2）、5-deoxylamiol（3）、去乙酰野芝麻苷（4）、栀子新苷（5）、genipin-gentiobioside（6）、genamesideC（7）、68-hydroxy-2-oxabicyclo[4．3．0]△^8-9_nonen-l-one（8）、焦地黄素D（9）、焦地黄素E（10）、地黄苷（11）、sculponiside（12）、2-phenylethyl—O-β-9-xylopymnosyl-（1—6）-β-D—glucopyranoside（13）、毛蕊花糖苷（14）、红景天昔（15）、leueoseeptosideA（16）、焦地黄苯乙醇苷D（17）、deacyl-martynoside（18）、焦地黄苯乙醇苷A1（19）、焦地黄苯乙醇苷B1（20）、3，4-dihydroxy—p-phenethyl—O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→3）-O-β-D—galacopyranosyl-（1→6）-4-O—caffeoyl-β-D—glucopyranoside（21）、1-（4-methy-2-furanyl）-2-（5-methyl-5-ethenyl-2-tetrahydrofuranyl）-propan-1-one（22）、2-methoxy-4-methylphenyl-O-β-D—apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glueopyranoside（23）、rhamnopyranosylvanilloyl（24）、syringicacid-4·O-α-L-rhamnopyranoside（25）、（7R，8S,7＇R，8S,7＇4，9，4’，9＇-tetrahydroxy-3，3＇-dimethoxy-7，7＇-epoxylignan9-O-β—D-glucopyranoside（26）、1-methyl-1，2，3，4-tetrahydro-β—carboline-3-carboxylicacid（27）、异直蒴苔苷（28）、直蒴苔苷（29）。结论29个化合物包括9个环烯醚萜类（2-10）、11个苯乙醇苷类（11-21）和9个其他类型（1、22-29）化合物，其中化合物1为新化合物，命名为地黄啶，化合物2～8和24-29为首次从该属植物中分离得到。经体外活性筛选发现化合物1、4、13、15、24、25、27和28对D-半乳糖胺诱导的人肝细胞HL-7702损伤有较明显的保护作用。

基于HPLC-UV-DPPH法的地黄和熟地黄药材抗氧化活性成分比较研究

目的建立HPLC-UV-DPPH在线分析方法,比较不同生产企业的地黄药材在炮制前后抗氧化活性成分的变化,为中药炮制及质量控制提供有效的评价方法。方法 HPLC-UV-DPPH在线联用筛选系统中HPLC流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为1.0 m L/min,色谱柱为Aglient Extend C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,检测波长334 nm,DPPH溶液体积流量0.5 m L/min,检测波长517 nm。以毛蕊花糖苷为阳性对照,通过"量-效"研究思路评价样品的总抗氧化活性及各成分对总抗氧化活性的贡献率。采用HPLC-FT-MS对药材中主要的抗氧化活性成分进行鉴定并比较药材炮制前后的差异。结果 HPLC-UV-DPPH方法检测到地黄中主要含有9个抗氧化活性成分,而熟地黄含有13个,地黄和熟地黄有8个共有抗氧化活性成分,地黄在炮制前后抗氧化活性成分明显不同,不同生产企业的样品中各抗氧化活性成分的活性差异较大。抗氧化活性贡献率较高的成分分别为玉叶金花苷酸、海胆苷、焦地黄苯乙醇苷A1/A2、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷。结论 HPLC-UV-DPPH法稳定、灵敏、重现性好,适用于地黄和熟地黄中抗氧化活性成分的快速筛选和质量评价。

基于化学特征和核心功效的经典名方清胃散中地黄炮制品研究

目的辨析地黄不同炮制品(鲜地黄、生地黄、干地黄、酒地黄、熟地黄)的化学特征,结合经典名方清胃散的核心功效,明确其地黄的炮制方法和炮制品种,为中药新药的开发和中药临床的合理应用提供参考。方法采用液质联用法和液相色谱法对地黄不同炮制品中的共有成分和特有成分进行定性和定量分析。运用现代网络药理学筛选和分析地黄的成分作用靶点和通路,构建成分-靶点-通路网络,进一步预测地黄的化学成分和核心功效的相关性。结果在地黄的不同炮制品中共鉴定出55个成分,其中26个为5种地黄炮制品共有,鲜地黄经炮制后,大部分化学成分的含量有不同程度的下降,其中干地黄的环烯醚萜类成分下降幅度最小。采用网络药理学对焦地黄素D、桃叶珊瑚苷、益母草苷、梓醇、地黄苷A、地黄苷D、连翘酯苷、6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇进行机制预测,富集的通路中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)信号通路、乙型肝炎、血清素突触、缺氧诱导因子-1(hypoxiainduciblefactor-1,HIF-1)信号通路等与清热作用相关。结论干地黄的化学特征与鲜地黄最为相似,药性和功效与清胃散中地黄的核心功效最为接近,故干地黄为清胃散中地黄的最适宜炮制品。

枸杞子中1个新的环香叶烷类单萜

目的研究宁夏枸杞Lycium barbarum果实(枸杞子)正丁醇部位的化学成分。方法运用D101大孔吸附树脂、硅胶、ODS和Sephadex LH-20等柱色谱以及反相制备型HPLC等各种现代色谱分离技术进行系统的分离纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质进行结构鉴定。结果从枸杞子正丁醇部位中分离得到11个化合物,分别鉴定为(3S,5R)-allenic ketodiol 5-O-β-D-glucosyl-(1→3)-β-D-glucoside(1)、citroside B(2)、alangionoside D(3)、turpinionoside D(4)、莨菪亭-7-O-β-D-木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、2-苯乙醇-β-D-葡萄糖苷(6)、2-苯乙醇-β-纤维二糖苷(7)、tuberonoid A(8)、对羟基肉桂酸(9)、3-甲氧基-4-羟基苯丙酸(10)、阿魏酸(11)。结论化合物1为1个新的环香叶烷类单萜,命名为柑橘苷C。化合物2和3为首次从枸杞属植物中分离得到。体外降血糖活性实验表明,化合物1和4在浓度10.0μmol/L时,可以增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量。