焦曲霉产木聚糖酶的研究

从１１４４株真菌中筛选到一株产木聚糖酶活力较高的焦曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｕｓｔｕｓ）。该菌株适宜的产酶条件为在４％麸皮液中添加０５％葡萄糖，０４％硝酸钠及０１％氯化钠，３０℃振荡培养６ｄ，木聚糖酶活力可达２１７６ｕ／ｍＬ。酶反应的最适温度为５５℃，最适ｐＨ为５５，在ｐＨ５～８酶活力稳定。４５℃保温１ｈ，酶活力剩余３５％。酶水解桦木木聚糖的Ｋｍ值为４３×１０－３ｇ／ｍＬ，Ｖｍａｘ值为４９ｍｇ／（ｍＬ·ｍｉｎ）。酶解产物以木三糖和木四糖为主，表明该酶是一种典型的内切糖苷酶。

焦曲霉右旋糖酐酶的纯化和性质

用制备凝胶电泳从焦曲霉(Aspergilluts ussus)菌株的培养液中分离纯化了右旋糖酐酶(EC 3.2.1.11)。纯酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析为均一的,比活力为820 u/mg,提高20.5倍。酶作用最适 pH 为5.0—5.5,最适温度为50℃,在 pH 4.5—7.5和40℃以下稳定,在50℃保温30分钟酶活力损失55%。用 SDS-凝胶电泳测定酶的分子量为68000,用聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦电泳测得 pI 值为5.5。紫外吸收光谱在274nm 有最大吸收值,低谷在252 nm。纯酶只作用于α-1,6-葡萄糖苷键,水解右旋糖酐的产物为异麦芽糖、异麦芽三糖、葡萄糖和少量的较高聚合度的异麦芽寡糖,该酶为内切型的。作用于交联葡聚糖凝胶(Sephadex)时,随其交联度的增加酶作用能力减弱。纯酶作用于不同分子量的右旋糖酐(MW:2×10~4、1×10^(?)、4×10~4)的K_m值分别为0.30%、0.61%和0.70%。Hg^(2+)、Ag^+对酶完全抑制,Cu^(2+)、Mn^(2+)、Pb^(2+)、Be^(2+)、Fe^(3+)和 F^-对酶有一定的抑制作用,金属螯合剂 EDTA 对酶活性无影响,N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)对酶强烈抑制。

海鞘内生真菌焦曲霉Aspergillus ustus TK-5的化学成分研究

焦曲霉(Aspergillusustus)TK-5是分离自土耳其海域海鞘(Pyuramomus)新鲜组织中的一株内生真菌,利用正相与反相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析以及高效液相制备等色谱方法从其发酵产物中分离得到17个化合物,通过一维、二维核磁共振、质谱等技术鉴定了所有化合物的结构,分别为血苋烷型倍半萜类化合物strobilactone A(1), ustusolate E(2), ustusolate C(3), ustusolate D(4),11-hydroustusolate E(5), 11, 6’-hydroustusolate E(6),(2’E, 4’E, 6’E)-6-(1’-carboxyocta-2’, 4’, 6’-triene)-11,12-epoxy-9, 11-dihydroxydrim-7-ene(7), 12-hydroxy-6-epi-albrassitriol (8), ustusolate A (9), deoxyuvidin B(10)和二倍半萜类化合物6-epi-ophiobolinG(11),(6α)-21,21-O-dihydroophiobolinG(12),6-epi-ophiobolin K(13), ophiobolin P(14) ophiobolin H(15), ophiobolin Q(16)及ophiobolin R(17)。活性筛选表明化合物2、6、7、9、11和13对神经氨酸酶具有一定的抑制活性,其半数抑制浓度(IC50)分别为31.8、37.3、28.4、36.8、46.6和37.6μmol/L。

焦曲霉色素结构的鉴定及产色素条件的优化

微生物源天然食用色素具有较多的优势,但目前开发不足。对分离的1株焦曲霉菌进行发酵培养,能产生丰富的棕红色色素,对其发酵液进行离心、醇沉、冷冻真空干燥处理,得到色素的粗提物。利用薄层层析与柱层析对色素粗提物进行分离纯化,以了解色素的组成特性,并获取色素滤液。通过紫外可见光谱(ultraviolet-visible spectroscopy,UV-vis)、红外光谱(infrared spectroscopy,IF)、GC-MS对色素滤液检测,以判断该色素的最大吸收峰、重要基团与化学结构。作碳氮源单因素试验,获取最适碳氮源,进而应用均匀设计法优化焦曲霉的产色素条件,以提高其产量。结果表明,焦曲霉色素是水溶性的胞外色素,极性较强,且色素组分相对单一,硅胶薄层层析与柱层析能将色素分离纯化。色素在298 nm处有最大吸收峰,色素含有吡咯吡嗪二酮与二蒽酮类2种结构的聚酮类色素,是一种新的微生物源天然色素。焦曲霉产色素的最优条件为pH 7.1、温度25.8℃、转速221.8 r/min、脱色时间128.7 h、接种量2.8 mL/150 mL、葡萄糖16 g/L、蛋白胨12 g/L。该结果为开发一种新的微生物源天然色素提供一定的研究基础。

急弯棘豆内生真菌的分离与鉴定

为探明我国青海主要疯草类植物——急弯棘豆中是否含有内生真菌,本研究对采自青海的急弯棘豆样品采用组织分离法对内生真菌进行分离,运用形态学和分子生物学方法对筛选到的内生真菌菌株进行种属鉴定。结果表明,从采集的急弯棘豆样品中共分离获得3株内生真菌,分别命名为EFJ-3、EFJ-4和EFG-8,通过形态学和分子生物学方法确定这3株内生真菌分别为分层镰刀菌、褶皱裸孢壳菌和焦曲霉。结果提示,我国青海地区急弯棘豆植株中存在多种内生真菌。