华癸中慢生根瘤菌焦磷酸硫胺素结合蛋白基因tpp的功能研究

在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突变对菌株生长及共生固氮功能的影响。结果显示:tpp基因突变会减缓菌株生长,突变菌株胞内的谷胱甘肽还原酶活性显著降低。植物盆栽试验表明,突变菌株感染紫云英宿主形成有效的红色根瘤,但是其固氮酶活降低了26.4%。结果表明:tpp基因在根瘤菌的生长和共生固氮中发挥着重要作用。

拟南芥H^+_-焦磷酸化酶AVP1互作小GTP结合蛋白AtRAB的特性鉴定与功能分析

以拟南芥AVP1为诱饵,采用膜蛋白酵母双杂交系统筛选拟南芥cDNA文库,获得一个与AVP1互作的小GTP结合蛋白AtRAB。酵母互作试验表明,AVP1和AtRAB存在互作;双分子荧光互补实验(BiFC)证明,AVP1和AtRAB能在质膜和细胞核上发生相互作用。野生型拟南芥(WT)、AtRAB和AVP1的拟南芥突变体rab和avp1在高盐胁迫条件下,随着NaCl浓度的加大,突变体rab和avp1的表型变化相似,相对于WT都表现为根长缩短,侧根数减少;在低磷处理条件下,随着磷浓度的逐渐降低,2个突变体的表型相似,相对于WT同样表现为根长缩短,总根面积减少,侧根数减少;在相同磷浓度条件下,突变体rab对胁迫的反应比avp1强;在低钾处理条件下,随着钾浓度的降低,2个突变体的表型与在低磷胁迫处理条件下的表型相似。结果说明,AVP1和AtRAB可以在细胞膜和细胞核上相互作用,AtRAB能够影响植物对离子的吸收,AVP1和AtRAB的突变体在高盐、低磷和低钾等胁迫条件下表型变化相似,证明了2个基因都正向调控植物对高盐、低磷和低钾胁迫的反应,它们属于同一信号途径。

基于核酶开关的哺乳细胞内硫胺素焦磷酸荧光生物传感器的建立

硫胺素焦磷酸(Thiamine pyrophosphate,TPP)是维生素B1在细胞内的主要活性形式,也是糖、脂肪酸和氨基酸氧化代谢中重要的辅助因子。在细胞内,利用TPP适配体与天然核酶组装成的人工核酶开关调节靶基因表达,目前仅局限于原核、真菌或植物细胞。本实验将原核生物中筛选的"Switch-on"与"Switchoff"的两种类型的TPP核酶开关,运用重叠延伸PCR的方法构建于增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的3'非翻译区(UTR),转染人胚肾上皮细胞(HEK293),通过荧光显微镜和流式细胞仪分析,观察了不同浓度TPP对EGFP表达能力的调控。结果表明,构建的两种"Switch-on"和一种"Switch-off"核酶开关均表现出明显的TPP浓度依赖性,且具有良好的特异性,在150μmol/L TPP时分别将EGFP的荧光强度提高3.1倍、1.9倍和降低2.3倍。这种构建通过TPP与核酶开关中其适配体的特异性作用直接将TPP浓度的变化转化为报告基因表达的改变,利于通过荧光检测方法实现对哺乳活细胞内代谢物或因子的无标记、无损伤、可视、高效的检测。

荞麦种子的蛋白质研究

荞麦种子蛋白质含量为15%～17%,富含赖氨酸、甲硫氨酸、色氨酸等人体必须氨基酸.蛋白质作为荞麦主要的生物活性成分之一,具有特殊的营养保健与生理功能.本文综述了荞麦种子各蛋白组分清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,以及一些特殊功能的蛋白质如荞麦蛋白酶抑制剂、变应原、硫胺素结合蛋白的研究现状,并讨论目前研究中存在的问题及今后发展的趋势.

重组大肠杆菌单链结合蛋白性质表征及其在提高焦磷酸测序准确性中的应用

利用基因工程手段表达了分子量约为24 kDa的重组大肠杆菌单链结合蛋白(r-SSBP),通过凝胶阻滞电泳与DNA熔解温度(Tm)影响实验表征了r-SSBP与单链DNA(ssDNA)结合的特性,结果表明,r-SSBP可以与ssDNA结合,并且能够降低DNA的Tm值,同时还能增大含有单个错配碱基的DNA与完全匹配的DNA的Tm值差异,这一特性在提高单核苷酸多态性检测的特异性方面具有潜在的应用价值。此外,将r-SSBP应用于本课题组开发的高灵敏度焦磷酸测序体系中测定已知序列ssDNA模板,结果表明,r-SSBP能够有效降低非特异信号,改善信号峰比例,提高焦测序的准确度,为完善高灵敏度焦磷酸测序体系奠定了基础。

五种常量元素在家禽体内的分布与作用

1镁 禽机体内约70%的镁存在于骨骼中，骨骼灰分中镁占0.5%-0.7%，而其余的镁分布于软组织细胞中，细胞外液中的镁占体内镁总量的1%。血液中含镁3~5毫克，其中75%在细胞内，25%在血浆中。血浆中的镁约87%呈游离状态，其余和蛋白质结合或以磷酸盐、柠檬酸盐的形式存在。每枚鸡蛋中含镁约25毫克，其中蛋黄含2毫克，蛋白含4.3毫克，蛋壳与壳膜中含18.7毫克。镁的作用除参与骨骼和蛋壳的组成，还是焦磷酸酶、胆碱酯酶和肽酶等多种酶的活化剂或组成成分，在糖和蛋白质代谢中起重要作用。每千克日粮含镁500-600毫克能满足家禽生长、生产和繁殖的需要。一般家禽饲料含镁量充足，无需额外添加。禾谷类籽实料每千克含镁15克，糠麸和油饼柏类饲料中的含镁量可超过籽实料的2~6倍，尤以棉籽饼和亚麻籽饼含镁量特别丰富。镁的不足早期表现为外周血管扩张充血，脉搏次数增加，随后血清中含镁量显著降低，当血清中含镁量低于0.5毫克时表现痉挛抽搐，患禽神经过敏，颤抖，步态蹒跚与惊厥。饲料中含镁量过高时，家禽采食量降低并引起腹泻，母鸡日粮中镁含量超过0.7%时排粪极稀，高于1%时影响产蛋。高镁也抑制育成禽的生长。