基于网络药理学和实验验证探讨熄风清火活血化痰方治疗缺血性脑卒中的作用机制

目的基于网络药理学方法探讨熄风清火活血化痰方治疗缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)潜在的作用机制,并对其潜在的功能靶点进行实验验证。方法采用TCMSP平台、ETCM平台、TCMID平台、BATMAN-TCM、文献筛选熄风清火活血化痰方中各中药的活性成分,利用TCMSP靶点预测模型、STITCH、SwissTarget、SEA数据库预测活性成分的潜在靶点;利用Genecards、OMIM、Disgenet数据库检索缺血性卒中的相关靶点并筛选得到疾病靶点,取疾病靶点与药物靶点的交集,利用STRING 11.0对药物与疾病的交集靶点进行蛋白质相互作用网络进行构建,通过Cytoscape 3.6.0软件进行拓扑分析获得熄风清火活血化痰方治疗缺血性卒中的关键靶点;利用Metascape对关键靶点进行GO和KEGG富集分析。通过Western blot检测对网络药理学的富集分析结果进行验证。结果共得到有效成分203个,药物靶点3971个,筛选缺血性脑卒中靶点1798个,最终获得关键靶点60个,KEGG通路富集分析筛选得到前20条信号通路。熄风清火活血化痰方治疗缺血性卒中主要成分为槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、木樨草素、豆甾醇等,关键靶点AKT1、TP53、IL-6、MAPK1、MAPK8等。关键的信号通路可能包括AGE-RAGE信号通路、流体剪切力与动脉粥样硬化信号通路、NF-kB信号通路、PI3k-Akt信号通路、VEGF信号通路等。Western blot检测结果表明,与空白组比较,模型组p-AKT1、p-P53、p-JNK1、p-ERK2表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,中药组p-AKT1、p-P53、p-JNK1、p-ERK2、IL-6表达降低,AKT1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论揭示了熄风清火活血化痰方多成分、多靶点、多途径治疗缺血性卒中的机制,初步证实了该方对靶点蛋白AKT1、TP53、IL-6、MAPK1、MAPK8表达的影响,为熄风清火活血化痰方的临床开发利用提供了依据。