熟地黄提取物对糖尿病肾病大鼠AKT/GSK-3β信号通路及足细胞上皮间质转化的影响

目的探讨熟地黄提取物(RGE)对糖尿病肾病(DN)大鼠蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)信号通路及足细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用高糖高脂、链脲佐菌素(STZ)诱导建立DN大鼠模型,建模成功60只,随机分为模型组、RGE(低、中、高)剂量组、阳性对照组,每组12只;另择12只大鼠作为对照组,对照组基础饲料、0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液对照处理。RGE(低、中、高)剂量组(1、2、4)g/kg RGE灌胃,阳性对照组4 mg/kg贝那普利灌胃,对照组、模型组0.9%氯化钠溶液灌胃,灌胃液体体积均为10 ml/kg,1次/d,连续6周。观察6组大鼠一般情况;血糖仪检测血糖,尿蛋白定量测试盒检测24 h尿蛋白,分光光度计检测肾功能指标尿肌酐、血清肌酐、血清尿素氮水平;HE染色、糖原(PAS)染色、马森三色(MASSON)染色观察肾脏组织形态;qRT-PCR法检测肾脏组织中E-钙黏素(E-Cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维粘连蛋白(FN)mRNA表达水平;Western blot法检测大鼠肾脏组织中磷酸化AKT(p-AKT)、AKT、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、GSK-3β蛋白表达水平。结果模型组大鼠毛色灰暗、精神萎靡,尿液量明显增多且发臭,肾脏组织肾小管空泡变性,肾小球系膜基质扩张,肾小球硬化和胶原沉积现象明显;RGE(低、中、高)剂量组、阳性对照组较模型组毛色有明显缓和、精神状态缓解,尿液量相对减少,肾脏组织病理变化明显减轻。与对照组相比,模型组血糖、24 h尿蛋白、尿肌酐、血清肌酐、血清尿素氮水平,肾脏组织中α-SMA、FN mRNA表达水平,p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达水平升高(均P<0.05),E-Cad mRNA表达水平降低(P<0.05)。与模型组相比,RGE低剂量组血糖、24 h尿蛋白、血清肌酐、血清尿素氮,肾脏组织中α-SMA、FN mRNA水平,p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白水平降低(均P<0.05);RGE(中、高)剂量组、阳性对照组血糖、24 h尿蛋白、尿肌酐、血清肌酐、血清尿素氮水平,肾脏组织α-SMA、FN mRNA表达水平,p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均降低(均P<0.05),E-Cad mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论RGE通过抑制AKT/GSK-3β信号通路活化和缓解足细胞EMT,实现对DN大鼠的保护。

基于AKT/GSK-3β信号通路探讨熟地黄提取物对糖尿病肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞表型转化的影响

目的基于蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶(GSK)-3β信号通路,探讨熟地黄提取物对糖尿病肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞表型转化的影响。方法建立糖尿病肾病大鼠模型,分为对照组、模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组,分别进行8 w给药治疗,统计治疗后各组尿蛋白、尿肌酐、血糖、血清肌酐等指标,并统计肾脏E-钙黏蛋白(cadherin)、肾病蛋白(Nephrin)、肌间线蛋白(Desmin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)mRNA及蛋白和p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果各组尿蛋白和尿肌酐差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组尿蛋白和尿肌酐均显著升高,且模型组和阳性对照组尿蛋白及尿肌酐明显高于熟地黄提取物组(均P<0.05)。各组血糖和血清肌酐差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组血糖和血清肌酐均显著升高,且模型组和阳性对照组血糖及血清肌酐明显高于熟地黄提取物组(均P<0.05)。各组E-cadherin、Nephrin、Desmin、α-SMA mRNA及蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组E-cadherin、Nephrin mRNA及蛋白表达均显著降低而Desmin、α-SMA mRNA及蛋白均显著升高(P<0.05),且模型组E-cadherin、Nephrin mRNA及蛋白表达明显低于阳性对照组和熟地黄提取物组,Desmin、α-SMA mRNA及蛋白表达明显高于阳性对照组和熟地黄提取物组(P<0.05)。各组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达均显著升高,且模型组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达明显高于阳性对照组和熟地黄提取物组(P<0.05)。结论熟地黄提取物可能是通过影响AKT/GSK-3β信号通路抑制糖尿病肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞表型转化。

生地黄、熟地黄水提取物通过抑制铁死亡进程改善肝缺血再灌注损伤的药效对比研究

目的 对比熟地黄水提取物(RRPAE)与生地黄水提取物(DRRAE)治疗肝缺血再灌注损伤的药效和机制,以期为临床患者更优的治疗选择提供科学依据。方法 将48只C57雄性小鼠随机分为8组(每组6只):假手术组,模型组,RRPAE低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 g·kg^(-1))组,DRRAE低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 g·kg^(-1))组。ig给药,假手术组和模型组ig 0.9%氯化钠溶液,每天1次,连续1周;各组小鼠于末次给药2 h后行手术建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,假手术组仅开腹不缺血,再灌注后6 h取材。检测各组小鼠肝脏、脾脏系数;苏木素-伊红染色观察各组小鼠肝脏组织病理学改变;试剂盒法检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)水平;试剂盒法检测小鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、NO、丙二醛(MDA)水平;Western blotting法检测各组小鼠肝脏组织中铁死亡相关蛋白转铁蛋白(Transferrin)、溶质载体家族7成员11 (SLC7A11)、溶质载体家族39成员14 (SLC39A14)、poly结合蛋白2(PCBP2)的表达水平。培养BRL肝细胞,用50、100、150mg·mL^(-1)的RRPAE处理1h(对照组不加药)后,加野百合碱(500μmol·L^(-1))或埃拉斯汀(10μmol·L^(-1))处理24 h,试剂盒法分别检测细胞亚铁/总铁离子以及谷胱甘肽水平。结果 与模型组比较,经过RRPAE或DRRAE预给药后,给药组小鼠的肝脏、脾脏系数出现下降趋势,其中RRPAE低、高剂量组肝脏系数差异显著(P<0.05、0.001);病理染色结果显示模型组肝脏出现明显的缺血-充血区和肝细胞坏死,经过RRPAE与DRRAE给药后肝细胞状态均有所恢复,且前者的效果明显优于后者。生化结果显示,与模型组相比,RRPAE可显著降低血清中肝损伤指标AST、ALT、LDH水平,升高NO含量;显著降低肝脏MDA水平,升高SOD和NO水平(P<0.05、0.01);而DRRAE给药后对上述肝损伤及氧化应激相关指标的恢复作用整体并不显著。Western blotting实验结果显示,与模型组比较,RRPAE能够显著抑制促进铁死亡相关蛋白Transferrin、SLC39A14的表达,上调抑制铁死亡相关蛋白SLC7A11、PCBP2的表达(P<0.05、0.001),而DRRAE对铁死亡相关蛋白的调控并不明显。与模型组比较,RRPAE可上调野百合碱或铁死亡激动剂埃拉斯汀诱导的肝细胞培养基中亚铁/总铁离子以及谷胱甘肽水平(P<0.05、0.01、0.001)。结论 熟地黄缓解肝缺血再灌注损伤效果更好,其作用机制可能与调控Transferrin、SLC7A11、SLC39A14、PCBP2蛋白的表达,抑制小鼠铁死亡进程有关。