燀桃仁中D-苦杏仁苷的UPLC含量测定研究

目的建立燀桃仁中D-苦杏仁苷UPLC含量测定方法。方法样品采用甲醇超声处理的方法进行提取,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.4mL·min^-1,柱温20℃,进样体积1μL,检测波长210nm。结果所采用的提取方法能有效地抑制D-苦杏仁苷的受热转化和降解,且方法能有效地分离L-苦杏仁苷和D-苦杏仁苷这一对差向异构体,D-苦杏仁苷的线性方程为y=0.0390x+0.1741(r=0.9999),进样量在23.015~736.470ng范围内与响应值呈良好的线性关系,平均回收率为101.3%,RSD为1.5%。结论所建立的UPLC含量测定方法简便、准确,能为燀桃仁药材质量标准的提高提供参考。

基于化学模式识别的桃仁及其炮制品差异性研究

基于超高液相色谱法建立桃仁及其炮制品的指纹图谱及含量测定方法,并结合化学模式识别法比较分析其差异性。采用ACQUITY UPLC HSS T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.30 mL/min,柱温为20℃,进样体积为2μL,检测波长为210 nm,建立其指纹图谱及D-苦杏仁苷含量测定方法。采用方差分析(variance analysis,VA)、聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)和偏最小二乘法-判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)对桃仁及其炮制品进行差异性分析。结果显示18批桃仁及其炮制品饮片UPLC指纹图谱相似度均在0.990以上,桃仁和燀桃仁的指纹图谱确认8个共有峰,炒桃仁确认7个共有峰,指认3个成分。通过化学模式识别分析,桃仁及其炮制品之间存在显著性差异,可聚为桃仁、燀桃仁、炒桃仁三类。含量测定结果显示桃仁、燀桃仁、炒桃仁饮片中D-苦杏仁苷含量的平均值分别为3.194%、3.048%、2.250%。本研究所建立的UPLC指纹图谱及含量测定方法专属性强,稳定性高,分离度良好,可用于桃仁、燀桃仁、炒桃仁的鉴别及D-苦杏仁苷含量的准确测定。

基于特征图谱及D-苦杏仁苷转移率评价燀桃仁配方颗粒的关键生产环节

建立燀桃仁配方颗粒的特征图谱和含量测定方法,基于特征图谱相关性和D-苦杏仁苷转移率评价燀桃仁配方颗粒的生产环节,明确关键控制点。采用Waters CORTECS C18色谱柱(4. 6 mm×150 mm,2. 7μm),流动相为乙腈-0. 1%磷酸水溶液,等度洗脱,流速0. 6 m L·min-1,检测波长207 nm,柱温20℃。与燀桃仁标准汤剂相比,饮片、提取液、浓缩液、喷干粉、配方颗粒中均存在5个特征峰,相对保留时间、峰型基本一致,且D-苦杏仁苷从燀桃仁饮片到配方颗粒的总转移率满足标准汤剂转移率范围。D-苦杏仁苷在提取、浓缩、喷干、制粒各环节间的平均转移率分别为56. 65%,72. 85%,94. 58%,99. 29%,故进一步对提取环节中D-苦杏仁苷的影响因素进行分析。结果显示,在水提取环节中D-苦杏仁苷易向L-苦杏仁苷转化,导致D-苦杏仁苷在该环节的转移率低。D-苦杏仁苷在碱性环境下不稳定,易发生异构化;液料比、提取时间对D-苦杏仁苷的提取率均有明显影响。该研究基于特征图谱和D-苦杏仁苷在各环节之间的量值传递,明确燀桃仁配方颗粒生产过程的关键环节,为企业生产和质量控制提供一定的理论依据。

多指标综合评分法优化桃仁“燀”炮制工艺

目的:优化桃仁"燀"最佳炮制工艺条件。方法:以苦杏仁苷的含量、高效液相色谱(HPLC)指纹图谱特征峰峰面积之和、桃仁油含量为综合评价指标,采用L9(34)正交设计考察沸水烫时间、冷水浸泡时间、干燥温度和干燥时间对以上指标的影响,确定桃仁"燀"的最佳炮制工艺参数。结果:桃仁"燀"最佳工艺为净制后放入沸水中烫3min,冷水浸泡1min,去皮,在60℃的条件下干燥4h。结论:燀桃仁的工艺稳定,可为规范桃仁"燀"的炮制工艺提供依据。

桃仁燀制机制探讨

目的:通过比较不同桃仁炮制品的苦杏仁酶活性、苦杏仁苷含量及其毒性大小,探究桃仁的燀制机制。方法:通过苦味酸试纸变色反应测定桃仁中苦杏仁酶的活性。采用HLPC测定不同桃仁炮制品中苦杏仁苷含量,流动相乙腈-0.1%磷酸水(15∶85),检测波长210 nm。利用急性毒性试验比较桃仁不同炮制品的毒性大小。结果:生桃仁可使苦味酸试纸变为红色,桃仁不变色。生桃仁中苦杏仁苷质量分数3.48%,贮藏6个月后苦杏仁苷含量明显降低至2.53%;桃仁中苦杏仁苷质量分数(3.19%)较生桃仁略低,贮藏6个月后苦杏仁苷含量(3.10%)变化不显著。燀桃仁(未去皮)水提物的半数致死量(LD50)55.907 g·kg-1,燀桃仁(去皮)水提物的LD5082.943 g·kg-1。结论:桃仁经燀制后会使苦杏仁酶完全灭活,可防止有效成分苦杏仁苷因酶解而损失。桃仁燀制后去皮可降低毒性,提示桃仁燀后去皮的炮制方式具有合理性,应按照传统后燀去皮用,为桃仁炮制工艺研究及炮制技术规范提供参考。