干扰素α对真性红细胞增多症患者非促红细胞生成素依赖性红系祖细胞生长的影响

目的:探讨干扰素α(IFN-α)治疗真性红细胞增多症(PV)的作用机制.方法:采用体外半固体集落培养的方法,观察IFN-α对PV患者体内外骨髓非促红细胞生成素(Epo)依赖性红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落生长的影响.结果:28例PV患者中有26例骨髓中存在非Epo依赖性BFU-E集落生长,平均集落数为196±15/2×105单个核细胞(MNC),对照组均无非Epo依赖性BFU-E集落生长.IFN-α在体外对PV患者骨髓中非Epo依赖性BFU-E集落生长呈剂量依赖性抑制作用;IFN-α治疗后,PV患者骨髓非Epo依赖性BFU-E集落数与治疗前比较明显减少(P<0.05), 治疗时间越长,BFU-E集落数减少越明显.结论:IFN-α在体内外对PV患者骨髓非Epo依赖性BFU-E集落生长有抑制作用.

当归多糖促进5-氟尿嘧啶作用后小鼠应激性红细胞发生

目的探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)拮抗5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对小鼠脾脏应激性红细胞发生的影响及其相关机制。方法选取6~8周龄的C57BL/6J小鼠,雌雄各半,分为对照组、ASP组、5-FU组、ASP+5-FU组。记录建模时期小鼠体质量,血细胞计数仪分析外周血常规;观察脾脏组织切片病理学改变;计算脾指数;台盼蓝染色法计数小鼠股骨骨髓单个核细胞及脾细胞数;分离培养及计数脾脏单个核细胞爆氏红系集落形成单位;流式细胞术检测F4/80+脾巨噬细胞数量;qRT-PCR检测脾脏黏附分子基因Emp,铁转运基因Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR以及核内吞基因Tim4、MerTK表达水平。结果ASP部分逆转5-FU致伤小鼠体质量、红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积、骨髓单个核细胞数量下降;ASP增大脾脏体积、提升脾指数、红髓面积、脾细胞数量,促进脾脏BFU-E形成;ASP拮抗5-FU,维持F4/80+脾巨噬细胞数量,促进Emp、Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR、Tim4及MerTK基因表达。结论ASP通过保护脾脏幼红细胞岛中央巨噬细胞数量及功能,促进小鼠脾脏应激性红细胞发生。

人胚胎干细胞来源红系细胞膜蛋白表达的研究

目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养12 d的细胞,同时磁珠分选人脐血中的CD34^+细胞,在多种特定细胞因子SCF、IL-6、IL-3、FLT3-L、TPO、EPO等诱导下,分别进行集落培养12-14 d产生红系爆发式集落形成单位(BFU-E),运用流式细胞术(FACs)、qRT-PCR和免疫荧光染色等方法检测并比较hESCs和人脐血CD34^+细胞2种来源的红系细胞膜蛋白的表达情况,并以后者作为对照组。结果 hESCs来源BFU-E的膜蛋白的表达趋势与对照组相近:其膜骨架蛋白和跨膜蛋白的基因,如SPTA、SPTB、ANK1、EPB41等基因转录水平都在逐渐增强,而一些膜蛋白如黏附分子CD49d、CD29、CD71等的表达逐渐降低,CD47基本不表达;带3蛋白(Band 3)表达量较高且与成体型血红蛋白β-globin的表达呈正相关。结论在hESCs向红系诱导生成过程中,一些膜表型分子表达在逐渐降低,而膜蛋白表达逐渐增强。

重组人红细胞生成素在恶性肿瘤贫血中的应用

目的 评价重组人红细胞生成素(rHuEPO)治疗恶性肿瘤贫血的疗效。方法 首先体外应用rHuEPO对5例正常人和5例恶性肿瘤贫血患者骨髓做红系集落形成单位(CFU—E)培养。将45例妇科恶性肿瘤患者分治疗组23例和对照组22例做临床观察。结果 体外实验表明,在大剂量rHuEPO作用下,肿瘤患者骨髓CFU—E数明显增加,接近正常。临床观察治疗组血红蛋白(HGB)从用药第2周开始升高,而对照组HGB逐渐降低。rHuEPO每周应用169.69±38.82 U/kg的有效率为72.2％。结论rHuEPO是治疗恶性肿瘤相关贫血的有效药物。

尿毒症患者红细胞生成抑制因子的实验研究

目的本文采用甲基纤维素细胞培养的方法,分析尿毒症患者血清及超滤液对小鼠骨髓红系造血祖细胞集落形成的影响,初步探讨红细胞生成抑制因子的存在、其相对分子质量大小及高通量透析器与普通低通量透析器对其清除的不同影响。方法选择北京朝阳医院肾内科12例尿毒症肾性贫血未透析患者为实验组,另选正常健康体检者12例为正常对照组,将实验组、正常对照组血清及应用F80透析器对实验组患者采用单纯超滤的方法所得超滤液(A组)、并将上述超滤液再用F6透析器进行循环超滤所得的超滤剩余液(B组)及F6超滤液(C组)分别稀释成不同终浓度,采用甲基纤维素细胞培养的方法与小鼠骨髓细胞进行培养,对比不同浓度血清组红系集落形成单位(CFU-E)、红系爆式形成单位(BFU-E)的集落数,A、B、C3组超滤液在相同浓度时CFU-E、BFU-E集落的数量。结果在实验组中,与血清浓度为0的浓度组相比,与各浓度组血清共同培养的小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数均明显减少,且随血清浓度的增加,小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数逐渐减少,各浓度组间差异有显著性(P<0.05);在A、B、C3组的各组内,与超滤液浓度为0的浓度组相比,与各浓度组超滤液共同培养的小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数均明显减少,且随超滤液浓度的增加小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数逐渐减少,各浓度组间差异有显著性(P<0.05);相同浓度时,与A组滤过液共同培养的小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数较B组、C组均明显减少;B组、C组两组之间差异无显著性(P>0.05)。结论尿毒症患者血中存在红细胞生成抑制因子,其对红系造血祖细胞的抑制作用具有剂量依赖性;红细胞生成抑制因子既可有大、中分子物质也有小分子物质;高通量透析器较普通低通量透析器能更有效清除红细胞生成抑制因子。

重组人红细胞生成素对骨髓增生异常综合征患者CFU-E的作用

应用CFU-E培养技术观察28例骨髓增生异常综合征(MDS)患者对EPO的反应,表明MDS患者CFU-E的形成能力明显低于正常人,其中反应好者,加入EPO后CFU-E可达正常水平,占观察组17.3％;反应差者,即使加入足量EPO后,CFU-E增殖仅为对照组的20％以下;CFU-E对EPO还有剂量依赖性。通过EPO对MDS患者CFU-E不同反应,可能与MDS病因、发病机理有关,或部分患者病变发生在BFU-E或其以上水平,故对EPO无反应。

胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段抑制EPO促CFU-E形成的研究

目的:观察胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段能否抑制EPO促红系形成。方法:对大鼠骨髓进行红系定向体外培养,加入胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段干预,观察红系集落形成单位(CFU-E)之数量,判定胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段对红系增殖活性的影响。结果:胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段加入干预培养后,CFU-E数量明显减少(P<0.01)。结论:胰蛋白酶酶切EPO之多肽产物体外能对抗EPO,抑制红系增殖。其可作为治疗高原红细胞增多症的可能药物进一步研究。

特发性血小板减少性紫癜骨髓造血干细胞的功能及与疗效的关系

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患者骨髓造血干细胞的增殖分化功能,并从巨核细胞集落形成单位的数量和血小板上升的幅度探讨两者之间的疗效关系。方法:用甲基纤维素半固体培养ITP患者粒-巨噬细胞集落形成单位、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位,观察巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值的关系。结果:ITP患者骨髓粒-巨噬细胞集落、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位集落数低于正常对照组,粒-巨噬细胞集落数及丛落数高于正常对照组,巨核细胞数大于5/高倍视野的ITP患者其巨核细胞数与血小板上升无关,巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值有关。结论:ITP患者骨髓造血干细胞增殖分化功能异常,提示ITP可能是造血干细胞异常的疾病。ITP的巨核细胞集落形成单位与血小板上升幅度有关,巨核细胞集落形成单位可以预测ITP的治疗效果。

烧伤血清对骨髓红系及粒系造血功能影响的实验研究

目的 观察烧伤血清对正常小鼠骨髓红系、粒系造血功能的影响,初步探讨其可能的机制。 方法 常规制备小鼠骨髓细胞(BMC),用其分别建立红系集落形成单位(CFU -E)培养体系和粒单核细胞集落形成单位(CFU -GM)培养体系。在两体系中均加入15%TBSAⅢ度烧伤小鼠伤后12h及1、3、5、7、10d的血清(烧伤血清组)和小鼠正常血清(正常血清组),另设阳性对照组和空白对照组,检测各血清对两培养体系的刺激活性。用放射免疫法检测烧伤血清中红细胞生成素(EPO)和粒巨噬细胞集落刺激因子(GM -CSF)浓度的变化,并将此二指标分别与烧伤血清对CFU- E、CFU -GM培养体系的刺激活性作对数线性拟合相关分析。 结果 (1)烧伤血清对CFU- E、CFU -GM培养体系的刺激活性明显升高,均在伤后1d达峰值[ (384±60)、(127±16)CFU](P<0. 01),此后逐渐下降,到伤后7d[(125±14)、(34±20)CFU]接近正常血清组水平(P>0. 05). (2)烧伤血清中EPO浓度在伤后12h—7d较正常值显著升高(P<0. 01);GM -CSF浓度在伤后12h、1d显著高于正常值(P<0. 05). (3)烧伤血清EPO浓度与烧伤血清对CFU- E培养体系的刺激活性呈显著对数正相关(r=0.857 0,P=0. 013 7);GM- CSF浓度与烧伤血清对CFU GM培养体系的刺激活性无显著相关性(r=0.704 9,P>0. 05). 结论 小鼠烧伤?

重型再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗后骨髓造血祖细胞水平的变化及其意义

为更好地评价重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)后骨髓造血功能恢复程度,采用造血祖细胞体外培养技术,动态观察了48例接受IBT的SAA患者及20例正常对照者骨髓晚期红系爆式集落形成单位(mBFU-E)及粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的水平变化。结果表明,IST前所有SAA患者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平均显著低于正常对照组(P<0.001);IST后1年,29例有效者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平显著增高,增高程度与其临床疗效相关;12例mBFU-E及10例CFU-GM水平恢复正常,其中8例患者mBFU-E及CFU-GM水平同时恢复正常。这表明SAA确是一组异质性疾病,其造血功能衰竭与异常免疫关系密切,若去除这种异常,造血功能可获得部分甚至完全重建。

银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖活性研究

目的进一步了解银屑病患者骨髓造血细胞是否有异常。方法采用密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照组骨髓单一核细胞,然后在含有甲基纤维素的半固体细胞因子培养体系中进行体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)、粒-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)及红系集落形成单位(CFU-E)集落形成实验,培养一定时期后计数集落。结果与正常对照比较,银屑病患者的HPP-CFC及CFU-GM的集落形成数显著减少,而CFU-E形成的集落数无统计学意义。结论银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖能力明显降低,这种异常的造血细胞可能在银屑病的免疫发病机制中发挥一定作用。

多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞冻存前后的生物学特性

背景:多发性骨髓瘤患者的骨髓间充质干细胞具有多向分化、免疫调节和支持造血作用,但是这些功能是否受冻存的影响目前尚不清楚。目的:探讨冻存对多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。方法:采用细胞贴壁法获取多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞,将传代后的细胞用IMDM细胞冻存液(含10%的二甲基亚砜和体积分数40%的胎牛血清)保存在-196℃液氮中。检测短期(1个月)和长期(12个月)冻存复苏后间充质干细胞的活性和增殖能力;将冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞作为滋养层,应用甲基纤维素半固体培养,检测其支持造血的能力;混合淋巴细胞反应检测冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞调控免疫能力。结果与结论:经过短、长期冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的细胞活性分别为(92.9±7.5)%和(86.7±9.2)%;短、长期冻存后细胞的增殖能力与冻存前间充质干细胞相似;冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞仍具有支持造血祖细胞生长的作用和抑制T淋巴细胞增殖的能力,与冻存前相比,没有明显差别。说明冻存可以降低多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的细胞活性,但是并不影响间充质干细胞的增殖、支持造血和免疫调节的能力。

EPO单克隆抗体抑制CFU-E研究

目的探讨EPO单克隆抗体是否具有抑制红系集落形成单位(CFU-E)形成的功能。方法对大鼠骨髓进行定向体外CFU-E培养,按以下条件进行分组培养:空白对照组(不加EPO)、常规组(加EPO,不加EPO单克隆抗体)、EPO单克隆抗体干预组(EPO+EPO单克隆抗体)。培养168 h后,观察各组CFU-E数量。结果空白对照组、常规组、EPO单克隆抗体干预组的CFU-E集数落分别为0.0±0.0、151.8±23.3和10.7±3.9。EPO单克隆抗体干预组与常规组比较,CFU-E集落数存在非常显著性差异(P<0.01)。结论该EPO单克隆抗体可明显抑制CFU-E形成,即抑制红细胞系的增殖,是治疗高原红细胞增多症的可能药物。

环孢菌素A体外对再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征患者造血祖细胞作用的研究

目的 观察了环孢菌素A(CSA)体外对 18例再生障碍性贫血 (AA) ,17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 10例正常对照粒系和红系祖细胞 (CFU GM、CFU E)的作用。方法 采用RPMI16 4 0琼脂和McCoy’S5A甲基纤维素半固体平皿法。 结果 (1)AA和MDS患者的CFU GM和CFU E较正常对照明显减低 (P <0 0 0 0 1) ;(2 )CsA能明显促进AA和MDS患者CFU GM、CFU E的增殖 ,这种促增殖作用随CsA剂量增加而增加 ;(3)SAA患者CFU GM和CFU E对CsA的有效率较CAA高 ;(4)MDS RAEB和RAEB T型患者CFU GM、CFU E对CsA有效率较RA、RAS高 ;(5 )MDS和AA患者中CFU GM、CFU E值重、中度减低者对CsA有效率较零者高。结论 CsA体外可促进部分AA和MDS患者CFU GM、CFU

基因重组干扰素γ体外对骨髓增生异常综合征患者治疗作用的研究

目的方法:用基因重组干扰素γ(IFN-γ)体外对41例骨髓增生异常综合征(MIDS)患者造血祖细胞的作用进行了观察,结果结论:①IFN-γ体外对正常对照组患者的CFU-E和CFU-GM无明显促增殖作用。而对MDS患者CFU-E和CFU-GM有明显促增殖作用。其作用为剂量依赖型,在1~U/ml时作用最小,100~U/ml时作用最强;②IFN-γ对MDS原CFU-E和CFU-GM增殖正常组加入IFN-γ后集落数增加最明显,而对增殖明显减低组集落效无明显增加;③IFN-γ对MDS不同FAB亚型患者CFU-E和CFU-GM作用不同,其中对RAEB-T型患者有效率较高。

1152例次脐血输注的临床应用及护理

人脐血中造血细胞含量丰富,静脉输入脐血是造血干细胞移植重建造血功能的有效方法之一,也是某些疾病辅助治疗的重要手段。我院自1991年以来开展脐血输注造血细胞移植治疗恶性血液病和非肿瘤性疾病1152例次,现将临床应用和护理报告如下: