爪哇根结线虫-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长克隆和序列分析

以爪哇根结线虫为材料,根据同源序列法分别进行3′末端和5′末端的RACE,获得-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长。此cDNA全长序列为1 675 bp,包括1 521 bp的完整ORF,编码一含506 aa的多肽。该基因命名为M j-eng3-,其推导蛋白的编码氨基酸与南方根结线虫的-β1,4-内切葡聚糖酶基因M I-ENG-1、M I-ENG-3和M I-ENG-4的同源性为95.3%、95.8%和85.3%,与另外5个植物寄生线虫β-1,4-内切葡聚糖酶基因推导蛋白PP-ENG-1、GR-ENG-1、GT-ENG-1、HG-ENG-1、HS-ENG-1编码氨基酸的同源性分别为51.2%、43.7%、43.7%、46.8%和45.3%。

南方根结线虫和爪哇根结线虫的发育

为了比较根结线虫的发育，纯种的南方根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）和爪哇根结线虫（Ｍ．ｊａｖａｎｉｃａ）用接种一解剖等方法进行研究．结果其新鲜卵块中的卵多集中在第２～６天的时间段内孵出，滞育率均低于１．０％，分别有６．８％和１０．６％在孵化过程中死亡．２８℃ 时其胚胎发育时间分别为８．５～９． ５ ｄ（９． ２ ｄ）和 ９． ０～１０．０ ｄ（９． ６ ｄ）．初侵入很内的根结线虫幼虫有重新侵入的能力．完成寄生阶段发育前者在平均 １７． ２℃下经 ４４ ｄ（７５６． ４ Ｄ℃）而后者在平均 １９． 1℃ 下需 ４５ ｄ（８５８． ８ Ｄ ℃ ）．根结线虫在不同的寄主上发育程度有较大差异．爪哇根结线虫中有大量雌雄间体出现，间体在形态上有较大变异，其性别分化是在一个较长阶段内完成，由于分化阶段不同，引起间体的发生并决定间体的不同形态．

淡紫拟青霉MCWA18菌株对爪哇根结线虫卵孵化的影响

采用双温测定法 ,室内测定淡紫拟青霉 MCWA18菌株对爪哇根结线虫卵孵化的影响 ,相对抑制率为 6 2 .0 8%。MCWA18菌株对经表面消毒和未经表面消毒的爪哇根结线虫卵囊的相对孵化抑制率分别为 49.15 %和 2 2 .70 % ,差异不显著 ;对爪哇根结线虫的卵囊和分散卵粒的相对孵化抑制率分别为 5 7.40 %和 2 3.75 % 。

爪哇根结线虫Mi-毒性和无毒近等基因系的制备及其遗传变异的初步分析(英文)

爪哇根结线虫是以孤雌生殖方式繁殖的农作物重要病原物。通过将爪哇根结线虫一无毒群体在抗病番茄品种Momotaro上连续选择 19代 ,获得了一对针对抗性基因Mi的毒性和无毒近等基因系。用 10 2种引物对该近等基因系进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析显示 ,除一种引物外两者的RAPD带谱基本一致 ,证实了该毒性和无毒群体的基因组组成十分近似。对一种引物扩增出的一个无毒群体特异性的RAPD片段进行了克隆。Southern杂交结果提示该多态性片段及其同源序列在毒性选择过程中被从毒性线虫的基因组中删除。但DNA序列分析和数据库检索表明 ,该片段与迄今发表的核酸序列均不存在显著的同源性 ,因此尚无法预测其潜在的功能性。爪哇根结线虫Mi-毒性和无毒近等基因系的制备为进一步鉴定和分离该线虫毒性相关基因打下了坚实的基础。

爪哇根结线虫一种新酯酶谱带类型的发现

１９９５年，在我国云南省路南县发现了根结线虫的一种未见报道的酯酶谱带类型，分别为０．４７和０．５９，与以往报道的爪哇根结线虫酯酶谱带类型Ｊ３相比缺少Ｒｆ值为０．５５的谱带；结合形态特征和鉴别寄主试验结果，将这种根结线虫鉴定为爪哇根结线虫，将其酯酶谱带类型称为Ｊ２型。讨论了爪哇根结线虫是否有种下分类的可能。

新颖杀线虫剂MCW-2对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)的防治活性

随着甲基溴等高效土壤熏蒸剂以及非熏蒸杀线虫剂的退出或禁用,当前线虫的防治难度日益加大。由于杀线虫剂市场小于除草剂、杀菌剂和杀虫剂,许多农化企业认为开发新颖杀线虫剂无利可图。此外,对人类与非靶标生物安全的有效物质的开发可行性极低。目前,广泛应用的杀线虫剂有涕灭威、硫线磷、克百威、丙线磷、苯线磷、噻唑磷、

4种杀线虫剂对爪哇根结线虫2龄幼虫及卵块孵化的影响

为了筛选出对爪哇根结线虫防效高的药剂,采用浸渍法测试阿维·苏云菌、克百威·敌、阿维纳米·线虫丹、丁硫·毒死蜱对爪哇根结线虫2龄幼虫和卵块的影响。结果表明,阿维·苏云菌对爪哇根结线虫2龄幼虫有较强的致死作用,50 g/L质量浓度处理48 h后,线虫的死亡率为100%,其LC_(50)为9.33 g/L;克百威·敌和阿维纳米·线虫丹活性较差;丁硫·毒死蜱没有作用。在同等条件下,阿维·苏云菌对卵块孵化抑制率最高,达99.88%,其次依次为丁硫·毒死蜱为95.63%,阿维纳米·线虫丹为86.22%,克百威·敌为6.06%。

茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫的毒杀活性

【目的】研究了茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)的毒杀活性,以及茶枯饼粉末拌土处理对空心菜和落葵爪哇根结线虫病的盆栽防治效果,为线虫病的生物防治提供理论依据。【方法】以茶枯饼为材料,采用药液直接浸泡法和粉末拌土盆栽法,分别研究了茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫2龄幼虫的毒杀活性、对卵的孵化抑制性,以及茶枯饼粉末拌土处理对空心菜和落葵爪哇根结线虫病的防效。【结果】茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫2龄幼虫有较强的毒杀活性,以50,100,150mg/mL茶枯饼乙醇抽提物处理72h,经清水复苏24h后,校正死亡率分别为39.94%,58.80%,70.68%;对爪哇根结线虫卵的孵化表现出较强抑制活性,以50,100,150mg/mL茶枯饼乙醇抽提物处理5d后,抑制孵化率均达到58%以上。茶枯饼粉末拌土处理对空心菜(9g/L)及落葵(11g/L)爪哇根结线虫均有较好的防治效果,茶枯饼粉末拌土能显著降低根结数及雌虫产卵量,并使植株地上部鲜质量显著增加。【结论】茶枯饼中存在杀线虫成分,可作为潜在的防治根结线虫病资源用于线虫病的防治。

堆肥浸提物和堆肥茶抑制爪哇根结线虫的盆栽试验

利用腐熟堆肥的浸提液(1∶3,W/V)和由浸提液制备的堆肥茶作为盆栽番茄的液态肥,以评估其对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)种群的影响。盆栽番茄苗并于4周龄时接种根结线虫第二期幼虫(J2)。试验期间用30%稀释的堆肥浸提液和堆肥茶原液淋灌。与对照组相比,在接种35 d后,堆肥茶使根部的根结数量约下降56.9%,土壤和根中的线虫数量分别下降了45.5%和33.9%;接种70 d后,根结数量约下降51.4%,土壤和根中的线虫数量分别下降了49.4%和66.3%。随着堆肥浸提物和堆肥茶使用浓度的增加,根结数量和最终种群数量均呈指数降低,堆肥茶的效果略优于浸提液。

黄皮酰胺纳米微乳剂的制备和特性及其对爪哇根结线虫杀线活性的测定

【目的】利用纳米技术,将黄皮酰胺(Clausenamide)制备成纳米微乳剂,增强其在使用环境中的稳定性,延长药效并提高其生物活性和防治效率。【方法】使用界面聚合法制备黄皮酰胺纳米微乳剂(NMEC),用zeta激光粒度分析仪和透射电镜(TEM)对纳米颗粒的粒径及形态进行测试和表征观察,在紫外灯下进行光降解测试,并用NMEC对爪哇根结线虫进行室内杀线活性测定和盆栽防效试验。【结果】制备的NMEC的等效粒径为(124.4±5.5)nm,包封率达到(95.17±1.42)%,4和6 h光降解率分别较黄皮酰胺丙酮溶液低18.52%和14.32%。NMEC对爪哇根结线虫的卵和2龄幼虫表现出良好的生物活性,100 mg/L NMEC处理卵的孵化率显著低于对照药剂(常规黄皮酰胺、灭线磷和克线磷)处理;在48 h时,200和400 mg/L NMEC处理2龄幼虫的死亡率分别为90.67%和99.33%,显著高于同质量浓度对照药剂处理,并且200 mg/L NMEC的杀线活性显著高于400 mg/L对照药剂处理。在盆栽试验中,NMEC处理空心菜的鲜质量显著高于清水对照和对照药剂处理;在药剂质量浓度为100 mg/L时,NMEC处理的根结数和根结指数分别为17.67和2.91,均低于或显著低于对照药剂处理;在药剂质量浓度为200 mg/L时,NMEC处理的根结数和根结指数分别为8.91和1.75,与质量浓度400 mg/L对照药剂处理间无显著差异。【结论】NMEC对爪哇根结线虫具有良好的杀线活性和防治效果,应用和开发前景广阔。

3种桉属植物乙醇抽提物对爪哇根结线虫的毒杀活性

采用直接浸泡法,测定了桉属(Eucalyptus)植物柠檬桉(E.citriodora)、杂交桉(E.urophyla×E.grand)和尾叶桉(E.urophyla)小枝条乙醇抽提物对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)卵孵化的抑制活性以及对2龄幼虫的毒杀活性。结果表明:柠檬桉、杂交桉和尾叶桉乙醇抽提物对爪哇根结线虫卵的孵化均有较强抑制活性,以20 mg/mL乙醇抽提物液处理24、48、72 h后,抑制孵化率均达94%以上;对爪哇根结线虫2龄幼虫也有较强的毒杀活性,3种桉属植物以20 mg/mL乙醇抽提物液处理2龄幼虫72 h后,线虫校正死亡率均达90%以上。将柠檬桉和杂交桉的茎、叶干粉分别拌土盆栽防治空心菜(Ipomoea aquatica)和黄瓜(Cucumis sati-vus)爪哇根结线虫病。结果表明:柠檬桉和杂交桉茎、叶干粉对爪哇根结线虫病均有较好的防治效果,植株根系的根结数、根结内雌虫数和雌虫产卵粒数均下降,植株地上部鲜质量增加,且均与对照差异显著。

盆栽条件下低C/N率堆肥中K^+水平对其抑制爪哇根结线虫危害的影响

利用茶叶渣、生活污泥和猪粪为原料按不同比例充分混合并进行强制好氧静态发酵,得到C/N在11~17之间的腐熟堆肥,分别以它们作为盆栽番茄的土壤有机添加物,以评估其在控制爪哇根结线虫形成根结中的作用.从堆肥中的N、P和K与根结数之间的关系看,基本上呈现出随堆肥中氮和磷含量的增加,根结数量下降的趋势.在相对低K含量范围内,根结数随K含量的升高而下降;而在相对高K含量范围内,根结数却随K含量的增加而增加,氮钾比在1~2之间时的抑制效果最好.与对照组相比较,用添加比例在30%~50%的腐熟堆肥可以明显减少根结线虫在番茄上的根结数量,而且随着添加比例的增加,根结数量呈指数下降.

桃树砧木品种筑波4号筑波5号对爪哇根结线虫的抗性

为探明桃树砧木品种筑波4号(Prunus persica‘tsukuba-4’)和筑波5号(P.persica‘tsukuba-5’)的抗根结线虫性能和抗原价值,对实生钵苗采用人工接种、根系次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了其对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)的抗性。结果表明:接种后30～40 d,90株筑波4号中9株有线虫侵入,1株产生根结,侵入根中的13条线虫有11条未发育,2条发育至3龄阶段,无雌成虫形成;90株筑波5号中11株有线虫侵入,5株产生根结,侵入根中的24条线虫20条未发育,4条发育至3龄阶段,无雌成虫形成。表明2品种高抗爪哇根结线虫;实生苗个体间存在显著的抗性分离现象,但分离范围较小,只存在免疫和高抗2种基因型;免疫株率分别为98.9%和94.4%;对爪哇根结线虫均具有极强的抗侵入与抗发育能力,接种侵入率分别为0.014%和0.027%,根中线虫分别有15.4%和16.7%发育至3龄幼虫阶段,未形成成虫。筑波4号、筑波5号是极优异的抗爪哇根结线虫桃砧木品种和抗原植物种质资源。

爪哇根结线虫Mj-1-1基因的克隆、鉴定及RNAi表型分析

根据爪哇根结线虫食道腺内表达的EST序列,结合反式剪接序列SL1,从爪哇根结线虫中克隆了一个假定寄生基因Mj-1-1(KU358725),该基因的c DNA全长为573 bp,包含450 bp的开放阅读框(ORF),编码149个氨基酸。DNA全长为740 bp,包含2个内含子,长度分别为20 bp和111 bp。NCBI BLASTn比对表明,Mj-1-1与南方根结线虫的M.incognita zk1236.5(JQ284068)基因相似性最高,为97%。原位杂交表明Mj-1-1基因在爪哇根结线虫的背食道腺中表达,qRT-PCR结果表明Mj-1-1基因在爪哇根结线虫寄生性3龄幼虫阶段表达量最高。对爪哇根结线虫侵染前2龄幼虫的Mj-1-1基因进行沉默,调查发现,沉默Mj-1-1后,爪哇根结线虫对番茄的侵染力显著下降,表明Mj-1-1对爪哇根结线虫侵染和寄生具有重要的调控作用。

南方、花生和爪哇根结线虫PCR检测方法

为快速、准确、稳定的鉴定南方、花生和爪哇根结线虫,利用已报道的南方和爪哇根结线虫的两对特异性引物,结合本研究设计的花生根结线虫特异性引物,通过优化PCR反应体系,建立了3种根结线虫的PCR检测方法。结果表明,该方法能够特异性扩增以上3种根结线虫,特征片段长度分别为399、335和670 bp,灵敏度达到单条2龄幼虫的水平。研究结果将为以上3种根结线虫的快速鉴定提供技术支持。

华东地区根结线虫的调查

通过对华东地区 6个省 10 4个样本根结线虫区系调查 ,应用会阴花纹技术和酯酶同工酶技术将 65种植物上的根结线虫鉴定为南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫。南方根结线虫是华东地区的优势种群 ,3种线虫所占比例分别为 88%、4 %和 8%。同时增补了该地区 2 6种根结线虫寄主国内新记录。

根结线虫种群的线粒体DNA分析

在同工酶和形态学鉴定的基础上, 利用引物#C2F3和#1108对42个根结线虫种群线粒体DNA(mtDNA)中的COII和LrRNA间区域进行特异性PCR扩增, 35个种群的扩增产物约为1. 7kb,其中29个是南方根结线虫, 6个是爪哇根结线虫; 3个花生根结线虫种群的扩增产物约为1. 1kb; 1个种群的扩增产物约为0. 7kb,为根结线虫属在中国的新记录种; 3个北方根结线虫种群的扩增产物约为0. 5kb。用单条2龄幼虫提取物作模板得到的结果与大量提取DNA作模板的结果相同。为了区分产生相同大小片段的南方根结线虫和爪哇根结线虫,用限制性内切酶HinfⅠ对扩增产物进行酶切,结果表明:所有供试的南方根结线虫都可以被HinfⅠ酶切,且产生约1. 3和0. 4kb的2个限制性片段;但供试的爪哇根结线虫种群不能被酶切。由此表明,利用mtDNA PCR及酶切实验可以作为快速而准确地鉴定常见根结线虫的方法。

南方、爪哇和花生根结线虫的快速灵敏的PCR鉴定方法

为了研制南方、爪哇和花生根结线虫快速灵敏的检测和鉴定方法，分别分离了4个南方根结线虫和3个爪哇根结线虫特异性的随机扩增多态性DNA(RAPD)片段。在这些RAPD标记DNA序列的基础上，设计了多对SCARPCR引物，并用源于国内外的南方、爪哇、花生、北方和象耳豆根结线虫群体验证其扩增特异性和灵敏度。最终确定了3对高效扩增的SCAR引物，