爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的分析爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法采用UALCAN数据库分析TPX2 m RNA和蛋白在HCC组织中的表达情况;K-M Plot数据库分析TPX2表达情况对HCC患者预后的影响;HPA免疫组化分析TPX2蛋白在HCC组织中的表达情况;GEPIA及UALCAN数据库分析HCC组织中TPX2与肿瘤蛋白p53(TP53)表达的相关性;ACLBI数据库分析TPX2在HCC组织中的表达水平及对患者预后的预测价值。结果UALCAN数据库分析结果显示,不同分期和分级HCC组织中TPX2 mRNA表达水平均高于正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。K-M Plot数据库分析结果显示,TPX2低表达HCC患者的无复发生存期(RFS)、总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)及疾病特异性生存期(DSS)均优于TPX2高表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。HPA数据库免疫组化分析结果显示,HCC组织中TPX2蛋白阳性表达高于正常肝组织。UALCAN与GEPIA数据库分析结果显示,HCC组织中TPX2与TP53表达呈正相关(r=0.34,P﹤0.05),且TP53突变组TPX2 m RNA表达水平高于TP53未突变组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。ACLBI数据库分析结果显示,随着TPX2表达的增高,患者预后不良风险增加;TPX2低表达HCC患者的OS明显优于TPX2高表达患者,差异有统计学意义(P﹤0.01);TPX2表达预测HCC患者1、3、5年OS的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.731(95%CI:0.659~0.803)、0.664(95%CI:0.588~0.739)和0.644(95%CI:0.551~0.738)。结论TPX2是一种癌基因,不利于HCC患者的预后,可作为HCC诊断与预后的生物标志物。

爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白在肝细胞癌的表达及临床预后的意义

目的 分析爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)在肝细胞癌(HCC)的表达及其临床预后的意义。方法 首先,分别利用UALCAN、K-M Plot以及HPA数据库分析TPX2在HCC的表达水平、生存预后及其相关性;再次,利用TIMER、GEPIA和SangerBox数据库分析TPX2的免疫细胞浸润以及与TP53突变相关性和突变景观图;最后,通过HCCDB数据库分析在HCC中TPX2的共表达基因及其预后价值,并对共表达基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果 TPX2在HCC高表达且不利于患者的总体生存(OS)、疾病特异性生存(DSS)、无进展生存(PFS)和无复发生存(RFS);同时,TPX2在HCC组织与肿瘤细胞纯度和多种免疫细胞(B细胞、CD4+T以及CD8+T等)显著相关;并且,TPX2在HCC中的表达水平与TP53突变显著相关。TPX2对HCC患者1年、3年和5年OS预后诊断的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别是0.73,95%CI(0.669~0.79)、0.668,95%CI(0.604~0.732)和0.654,95%CI(0.574~0.734)。TPX2的共表达基因在HCC均不利于患者的OS;其GO功能主要富集在有丝分裂与核分裂、微管细胞骨架以及微管运动等,KEGG主要富集在细胞周期、卵母细胞减数分裂以及p53信号等通路上,且对HCC患者1年、3年和5年OS预后诊断的ROC曲线下面积AUC分别是0.801,95%CI(0.745~0.856)、0.725,95%CI(0.667~0.786)和0.711,95%CI(0.635~0.788)。结论 TPX2与HCC的发生密切相关,不利于HCC患者的生存预后,可作为HCC诊断与预后的生物标志物。

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白C'末端SBP-3×Flag标记的HCT 116结直肠癌细胞模型的建立

目的建立非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。方法 PCR扩增同源臂,构建TPX2的腺相关病毒打靶载体,包装病毒后打靶HCT116结直肠癌细胞,G418和PCR筛选获得含有新霉素抗性基因的阳性细胞株,最后通过Cre病毒感染去除抗性基因,并用PCR方法筛选获得TPX2C末端SBP和3×Flag内源性双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果筛选获得2个含有新霉素抗性基因的细胞株,随后经Cre病毒感染得到去除新霉素抗性基因的阳性细胞克隆,并经Western blot检测验证了SBP-3×Flag基因的敲入。结论成功建立了TPX2 C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制

目的研究非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制。方法2018年10月至2019年8月,将非小细胞肺癌A549、H1299细胞株分为三组:空白对照组(未经转染的细胞);阴性对照组[转染非特异性的小干扰RNA(siRNA)的细胞];siRNA-TPX2组(转染TPX2特异性的siRNA的细胞)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)方法对转染小干扰RNA(siRNA)前后的非小细胞肺癌A549、H1299细胞株进行鉴定。人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力。Tanswell小室迁移实验检测细胞迁移和侵袭的影响。蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路关键分子及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的变化。结果siRNA-TPX2组中TPX2 mRNA和蛋白的相对表达水平显著低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05)。与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制A549细胞的增殖[24 h(0.71±0.02)比(0.62±0.03);48 h(1.62±0.03)比(0.69±0.02);72 h(2.08±0.03)比(0.95±0.02)]、迁移[(91.18±13.97)个比(49.95±12.15)个]、侵袭[(165.46±19.19)个比(93.37±13.54)个](P<0.05)。与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制H1299细胞的增殖[24 h(0.81±0.03)比(0.65±0.02);48 h(1.73±0.02)比(0.78±0.01);72 h(2.18±0.03)比(1.16±0.02)]、迁移[(74.31±13.86)个比(38.76±9.05)个]、侵袭[(158.46±19.58)个比(88.47±11.23)个](P<0.05)。TPX2表达下调能显著降低非小细胞肺癌A549、H1299细胞中PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶12(MMP12)蛋白的表达(P<0.05)。激动剂胰岛素生长样因子1(IGF-1)能完全削弱TPX2-siRNA抑制A549、H1299细胞中PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达(P<0.05)。结论TPX2通过调控PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达促进非小细胞肺癌细胞侵袭转移。

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2在乳腺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)在乳腺癌与癌旁组织中的差异性表达及其与其他临床病理指标的关系, 分析TPX2表达与患者生存率的相关性。方法采用免疫组织化学检测广州医科大学附属第一医院115例乳腺癌组织及69例癌旁组织中TPX2的表达, 比较两组TPX2表达率的差异, 以及TPX2的表达同其他临床病理指标的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线法进行生存分析, 采用COX比例风险回归模型分析影响预后的危险因素。结果乳腺癌组织中TPX2的阳性表达率高于癌旁组织(54.8%比11.6%, χ^(2)=9.358, P<0.05)。TPX2的表达与肿瘤较低的分化程度(P<0.05)及ER表达(P<0.05)明显相关, 与患者年龄、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)表达无明显相关。Kaplan-Meier法生存分析显示, TPX2蛋白表达水平高的患者预后较低表达的患者差, 差异有统计学意义(P<0.05)。Cox比例风险回归模型分析显示, 雌激素受体(ER)与TPX2是乳腺癌患者的独立预后因子。结论 TPX2在乳腺癌组织中的表达水平明显升高, 且TPX2高表达的乳腺癌患者表现出较差预后, 表明TPX2可能促进乳腺癌的发生与发展, 并可作为潜在的治疗靶点。

微小RNA-570-3p靶向TPX2爪蟾运动蛋白样蛋白2靶向蛋白调控肝胆管癌细胞凋亡的研究

目的探讨微小RNA(miR)-570-3p调控肝胆管癌细胞凋亡的潜在机制。方法纳入2019年1月至2020年1月于山西省人民医院收治确诊为肝胆管癌患者30例,收集胆管癌患者癌组织样本(胆管癌组)和癌旁组织样本(癌旁组)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测30例肝胆管癌患者癌组和癌旁组中miR-570-3p的表达量,同时过表达或敲低miR-570-3p后,Annexin染色测肝胆管癌细胞的凋亡。过表达或敲低miR-570-3p后,检测这些潜在底物的表达量过表达或敲低潜在底物,检测其对肝胆管癌细胞凋亡的影响。通过t检验分析组间差异。胆管癌组与癌旁组使用Mann-Whitney检验分基因表达量差异。结果胆管癌组中miR-570-3p的相对表达量低于癌旁组(0.76±0.14比1.91±0.34,U=42.123,P<0.05)。过表达miR-570-3p后,过表达组的肝胆管癌细胞RB3的凋亡水平高于对照组(0.79±0.20比0.21±0.05,t=4.873,P<0.05);敲低miR-570-3p后,敲低组中爪蟾运动蛋白样蛋白2靶向蛋白(TPX2)和磷脂酰肌醇特异性磷酯酶CB1(PLCB1)的表达水平均高于对照组(1.34±0.28比0.32±0.28,t=4.462,P<0.05;0.39±0.13比0.14±0.04,t=3.184,P<0.05),过表达miR-570-3p后,过表达组中TPX2和PLCB1的表达水平均低于对照组(1.34±0.28比2.06±0.33,t=2.882,P<0.05;0.39±0.13比1.43±0.39,t=4.382,P<0.05);敲低TPX2和PLCB1后,敲低TPX2组中肝胆管癌细胞RBE的凋亡水平高于对照组(0.72±0.13比0.21±0.05,t=6.342,P<0.05),而敲低PLCB1组中肝胆管癌细胞RBE的凋亡水平与对照组比较差异无统计学意义(0.23±0.04比0.21±0.05,t=0.541,P>0.05)。过表达TPX2后,过表达TPX2组中肝胆管癌细胞RBE的凋亡水平低于对照组(0.04±0.01比0.21±0.06,t=4.841,P<0.05);同时,胆管癌组中TPX2的相对表达量高于癌旁组(1.25±0.15比0.59±0.04,U=85.152,P<0.05)。结论 miR-570-3p靶向TPX2的3端非编码区,减少了TPX2的表达,最终增加了肝胆管癌细胞的凋亡水平。

TPX2基因沉默对膀胱癌耐药细胞株T24/DDP顺铂化疗敏感性的增强作用及其机制

目的:探讨爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因沉默对膀胱癌耐药细胞株T24/顺铂(DDP)的化疗敏感性的影响,并阐明其作用机制。方法:采用DDP浓度梯度刺激法建立DDP耐药细胞株T24/DDP,将细胞分为T24细胞组和T24/DDP细胞组。MTT法检测各组细胞增殖活性,并根据半数抑制浓度(IC50)值计算耐药指数(RI);实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和Westernblotting法检测细胞中TPX2mRNA及蛋白表达水平。通过小干扰RNA(siRNA)沉默T24/DDP细胞中TPX2基因表达,再将细胞分为空白对照组、阴性对照干扰(si-NC)组、TPX2沉默(si-TPX2)组、si-NC+DDP(2 mg·L^(-1) DDP)组和si-TPX2+DDP(2 mg·L^(-1) DDP)组。RT-qPCR法和Western blotting法检测转染后细胞中TPX2 mRNA及蛋白表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组凋亡细胞率和细胞周期G2/M期百分率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin、P-糖蛋白(P-gp)、锌指蛋白转录因子1(Snail1)和Survivin蛋白表达水平。结果:成功建立膀胱癌DDP耐药细胞株T24/DDP,RI值为8.76。与T24细胞组比较,T24/DDP细胞组中TPX2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组和si-NC组比较,si-TPX2组T24/DDP细胞中TPX2mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),且DDP的IC50值明显降低(P<0.01)。与si-NC组比较,si-TPX2组T24/DDP细胞凋亡率和细胞周期G2/M期百分率明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显降低(P<0.01),T24/DDP细胞中β-catenin、P-gp、Snail1和Survivin蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与si-NC+DDP组比较,si-TPX2+DDP组T24/DDP细胞凋亡率和细胞周期G2/M期百分率明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显降低(P<0.01),T24/DDP细胞中β-catenin、P-gp、Snail1和Survivin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:TPX2基因沉默通过抑制Wnt/β-catenin信号通路增强膀胱癌耐药细胞株T24/DDP对DDP的化疗敏感性。

TPX2通过p38 MAPK信号通路诱导直肠癌HR-8348细胞凋亡

目的:研究下调非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)对直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:用TPX2小干扰RNA(si RNA)转染直肠癌HR-8348细胞,记为TPX2 si RNA组;以不做转染的细胞作为正常对照(control)组;以转染si RNA阴性对照(si RNA-NC)的细胞作为si RNA-NC组;用p38 MAPK抑制剂处理敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞记为TPX2 si RNA+SB203580组。RT-qPCR和Western blot测定TPX2的表达水平,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、cleaved caspase-3和Bcl-2的蛋白水平。结果:TPX2 si RNA转染后HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白表达水平显著下降(P <0. 05),而转染si RNA-NC对HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白水平没有影响。敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中的cleaved caspase-3、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显升高,Bcl-2水平水平降低,与control组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。与TPX2 si RNA组相比,TPX2 si RNA+SB203580组的HR-8348细胞凋亡率、cleaved caspase-3水平和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显降低,存活率明显升高(P <0. 05)。结论:TPX2表达下调可以通过激活p38 MAPK促进直肠癌HR-8348细胞凋亡。

肝癌组织TPX2、TUFT1、Vimentin表达与癌细胞恶性生物学行为的关系及预测远处转移的价值研究

目的:探讨肝癌组织爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)、釉丛蛋白1(TUFT1)、波形蛋白(Vimentin)表达与癌细胞恶性生物学行为的关系及预测远处转移的价值。方法:选取2018年1月~2020年4月收治的51例肝癌远处转移患者为观察组,51例肝癌无远处转移患者为对照组,比较两组患者一般资料、TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白、癌细胞恶性生物学行为指标[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA、survivin mRNA、Bax mRNA、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA],分析TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白之间及与癌细胞恶性生物学行为指标、病理特征的相关性,并分析TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白预测远处转移的价值。结果:观察组患者TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白表达高于对照组患者(P<0.05)。TPX2 mRNA与TUFT1、Vimentin蛋白呈正相关,TUFT1蛋白与Vimentin蛋白呈正相关(P<0.05)。TPX2 mRNA、TUFT1蛋白、Vimentin蛋白与Bcl-2 mRNA、survivin mRNA均呈正相关,与Bax mRNA、caspase-3 mRNA均呈负相关(P<0.05)。TPX2 mRNA、TUFT1蛋白、Vimentin蛋白与肿瘤T、N分期呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。TPX2 mRNA、TUFT1、Vimentin联合预测肝癌远处转移的AUC最大,为0.932。结论:肝癌组织TPX2、TUFT1、Vimentin表达与癌细胞恶性生物学行为存在一定相关性,早期采用三者联合检测方式,有望成为临床预测肝癌远处转移、制定恰当治疗方案的新途径。