定量PCR和Western blot结合检测回药爱康方对肺癌细胞EGFR、NF-κB的表达影响

目的:探讨定量PCR和Western blot结合检测对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞表皮生长因子受体(EGFR)、NF-κB表达影响,观察该方对调节癌细胞信号转导作用机制。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药高剂量组(AKH);2荷瘤模型组(对照组);3回药中剂量组(AKM);4单纯化疗药组(CTX组);5回药中剂量组加化疗组(AKM+CTX);6回药低剂量加化疗药组(AKL+CTX);7回药低剂量组(AKL);8回药高剂量加化疗药组(AKH+CTX)。采用RT-PCR和western blot方法检测小鼠组织样本中EGFR、NF-κBm RNA转录水平和蛋白质表达的变化情况。结果:实时荧光定量PCR结果显示:与模型组小鼠比较,给予回药爱康方,高、中、低剂量干预后,小鼠瘤细胞中EGFR m RNA表达水平显著下调(P<0.01),而低剂量对NF-κBm RNA的表达水平无统计学差异(P>0.05),给予回药爱康方,高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX后,小鼠瘤细胞中EGFR表达水平显著下调(P<0.01),小鼠瘤细胞中NF-κBm RNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,给予回药爱康方高、中、低剂量干预后,Lewis肺癌C57小鼠EGFR、NF-κB蛋白表达水平无统计学差异性(P>0.05),给予回药爱康方高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX干预后,Lewis肺癌C57小鼠EGFR蛋白表达水平显著下调、NF-κB蛋白表达水平显著上调(P<0.01或P<0.05)。结论:回药爱康方高、中、低与回药开康方高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX均对EGFRm RNA的表达水平有影响,仅低剂量对NF-κBm RNA的表达水平无影响,同时回药爱康方高、中、低剂量均对EGFR、NF-κB蛋白表达无影响。

HE法观察回药爱康方对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的:观察回药爱康方对小鼠Lewis肺癌的抑制作用。方法:将55只C57荷瘤小鼠随机分为荷瘤模型组为对照组,环磷酰胺(CTX)单纯化疗组,回药爱康方低剂量组、回药爱康方低剂量加化疗组、回药爱康方高剂量加化疗组均为实验组。治疗后观察各组小鼠生活状态,抑瘤率、免疫器官指数、HE染色法观察各组小鼠瘤细胞的病理学改变。结果:①与对照组比较,除CTX组外,其余各实验组小鼠体重差异均有统计学意义(P<0.05);各实验组小鼠瘤重与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);②病理切片观察:实验组均有细胞形态改变,以回药爱康方高剂量加CTX最明显,有大片肿瘤细胞坏死和凋亡。结论:回药爱康方对小鼠Lewis肺癌细胞生长有抑制作用,并呈现量效关系。

回药爱康方治疗中晚期原发性肺癌30例效果评价

为评价回药爱康方对中晚期原发性肺癌的治疗效果,选择2006年10月至2008年12月宁夏医科大学中医门诊部收治的原发性支气管肺癌病人30例,口服回药爱康方3个月,观察患者主要症状变化、瘤灶稳定率、Kamofsky评分以及1年生存期。结果,治疗后患者主要症状明显改善,瘤灶稳定率为13.33%,Kamofsky评分提高稳定率为90.0%,0.5年生存率为83.3%,1年的生存率为67.7%;回药爱康方在改善肺癌患者主要症状、稳定病灶、提高患者生存质量以及延长生存期等方面有一定疗效。

回药爱康方对Lewis肺癌小鼠血清VEGF、CD44V6表达的影响

目的观察回药爱康方及其协同化疗药对Lewis肺癌小鼠血清VEGF、CD44V6表达的影响。方法将50只C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺癌细胞,24h后随机分荷瘤模型组、单纯化疗药组、回药低剂量组、回药低剂量加化疗药组、回药高剂量加化疗药组。治疗后观察各组脾脏、胸腺和瘤体质量;用ELASA法检测各组VEGF、CD44V6的表达差异。结果①与荷瘤模型组比较,其余各组瘤质量差异均有统计学意义(P<0.01);与单纯化疗药组比较,回药低剂量组、回药低剂量加化疗药组、回药高剂量加化疗药组瘤质量差异均有统计学意义(P<0.01);与回药低剂量组比较,回药低剂量加化疗药组、回药高剂量加化疗药组瘤质量差异均有统计学意义(P<0.01)。②与单纯化疗组比较,各组脾脏指数差异均有统计学意义(P<0.01);除回药低剂量加化疗药组外,其余各组胸腺指数与单纯化疗组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。③各组VEGF、CD44V6与化疗组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论爱康方协同化疗抑瘤效果、降低血清VEGF、CD44V6表达效果优于单纯化疗,且爱康方可以降低化疗后免疫抑制。

回药爱康方含药血清抑制Lewis肺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的观察回药爱康方(HAKF)含药血清对Lewis肺癌细胞(LLC)增殖抑制作用,探讨回药爱康方抗Lewis肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法,用SD大鼠分为健康对照(NS)组,爱康方低剂量(AKL)组,爱康方中剂量(AKM)组,爱康方高剂量(AKH)组,环磷酰胺(CTX)组,爱康方低剂量联合环磷酰胺(AKL+CTX)组,爱康方中剂量联合环磷酰胺(AKM+CTX)组,爱康方高剂量联合环磷酰胺(AKH+CTX)组,共8组,制备含药血清,用各组含药血清培养LLC细胞,采用MTT法测各组血清对LLC增殖的影响,流式细胞(FCM)Annen V-FITC/PI标记法检测细胞凋亡率。结果回药爱康方含药血清能够抑制LLC增殖,且呈剂量和时间依赖性,爱康方高剂量组20%含药血清作用72 h抑制率达26.92%,高剂量联合CTX抑制率最高达54.71%;与对照组比较,各组血清均具诱导LLC细胞凋亡的作用,并与剂量和时间呈正相关,爱康方高剂量联合CTX作用最强,作用72 h时,细胞凋亡率下降,而坏死率升高。结论回药爱康方可抑制Lewis肺癌细胞增殖,并诱导其凋亡,爱康方可以增强环磷酰胺对细胞的抑制作用。

回药爱康方含药血清对Lewis肺癌细胞周期的影响

目的探讨回药爱康方含药血清对Lewis肺癌细胞(LLC)增殖及细胞周期的影响。方法雄性SD大鼠80只,按体重随机分为8组:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKL、AKM、AKH)组,环磷酰胺(CTX)组,回药爱康方低、中、高剂量联合环磷酰胺(AKL/AKM/AKH+CTX)组。各组同时相应给予回药爱康方低、中、高剂量浓缩水煎剂灌胃,连续5d;CTX组和联合组再按20mg·kg-1给予环磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射,NS组给予等量生理盐水。制备各含药血清,体外培养LLC。应用MTT法检测各组含药血清对LLC增殖的影响,流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果回药爱康方含药血清能够抑制LLC增殖,各含药血清组与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中高剂量联合CTX组的抑制率明显高于其他组,抑制程度呈时间和浓度依赖性;流式细胞仪检测结果显示,回药爱康方含药血清能使LLC细胞阻滞于G1期,随着药物浓度的增加,G1期细胞增多、S期细胞减少,高剂量以及联合组尤为明显(P<0.05)。结论回药爱康方含药血清可抑制LLC生长增殖,并使细胞阻滞于G1期,提示回药爱康方含药血清可能通过阻滞细胞周期,干扰DNA合成而抑制肺癌细胞的增殖。

回药爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

目的探讨回药爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞形态的影响。方法采用血清药理学方法,将SD大鼠分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺化疗组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,制备含药血清;培养人肺腺癌A549细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%、10%、20%浓度的相应各组含药血清,对照组给予等浓度的对照组大鼠血清,培养24、48、72h后观察细胞形态变化,采用MTT法测定各组含药血清对A549细胞的生长抑制率。结果光镜下观察到,与对照组相比,各剂量回药爱康方含药血清可使A549细胞有不同程度的胞膜回缩、胞核固缩、细胞间距增大和染色质边缘化现象,其中以爱康方高剂量联合环磷酰胺组作用72h最明显。MTT法检测细胞生长抑制率发现,各实验组各浓度抑制率与相应对照组比较,实验组72h抑制率均高于对照组(P<0.05);单纯环磷酰胺72h抑制率均高于爱康方低、中、高剂量(P<0.05);爱康方高剂量联合环磷酰胺72h抑制率高于爱康方低剂量联合环磷酰胺和单纯环磷酰胺(P<0.05)。结论回药爱康方可有效抑制A549细胞生长增殖,并增强环磷酰胺对A549细胞的抑制作用。

回药爱康方抗C57小鼠肺癌转移及影响bcl-2的表达

目的观察回药爱康方对C57小鼠Lewis肺癌细胞转移的影响,并检测各组小鼠瘤组织bcl-2的表达。方法将55只C57荷瘤小鼠随机分为荷瘤模型组,环磷酰胺(CTX)组,回药爱康方低剂量组、回药爱康方低剂量加化疗组、回药爱康方高剂量加化疗组。治疗后,观察各组小鼠肺表面转移灶和bcl-2蛋白的表达情况。结果 (1)肺转移灶的变化:与荷瘤模型组比较,其余各组小鼠肺转移灶差异有统计学意义(P<0.05)。(2)bcl-2表达情况:与荷瘤模型组比较,其余各组bcl-2的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论回药爱康方有抗小鼠肺癌转移和降低bcl-2表达的作用。

回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响

目的探讨回药爱康方(AKF)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响。方法雄性SD大鼠80只,按体重随机分为8组:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKFL、AKFM、AKFH)组,环磷酰胺(CTX)组,AKFL、AKFM、AKFH联合CTX组。分别给予相应AKFL、AKFM、AKFH浓缩水煎剂灌胃,连续5d;CTX组和联合组再按20mg·kg-1给予环磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射。NS组给予等量生理盐水。上述各组动物取血制备含药血清,体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞。应用MTT法检测各组含药血清对SK细胞增殖的影响,流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果 AKF含药血清作用不同时间对SKMES-1细胞生长有抑制作用(P<0.05)。AKF联合CTX含药血清能够抑制SK细胞增殖,其中AKFH联合CTX组的抑制率明显高于其他组,48h之内抑制程度呈时间和浓度依赖性。5%、10%、20%浓度组的含药血清作用SK-MES-1细胞24、48、72h后,与NS比较,除AKFL外,其余各组抑制率均有升高(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,AKF含药血清及联合CTX含药血清能使SK细胞阻滞于G1期,随着药物浓度的增加,G1期细胞增多、S期细胞减少,和NS组比较,高剂量以及联合组尤为明显(P<0.05)。10%、20%浓度含药血清组与NS组比较,各组的G0/G1期细胞增多、S期细胞逐渐减少(P<0.05);而与CTX组比较,G0/G1期细胞少于CTX组,S期细胞多于CTX组(P<0.05),各联合组G0/G1期细胞多于CTX组,S期细胞少于CTX组(P<0.05)。结论 AKF含药血清可抑制SK细胞增殖,并与CTX有协同作用,其机制可能与其阻滞细胞于G1期有关。

回药爱康方协同化疗对小鼠Lewis肺癌细胞超微结构的影响

目的观察回药爱康方协同化疗对小鼠Lewis肺癌细胞超微结构的影响。方法把55只C57小鼠接种Lewis肺癌细胞24h后随机分为模型组、化疗组、爱康方组、爱康方低剂量加化疗组、爱康方高剂量加化疗组。治疗14d后,观察小鼠一般情况,完整剥离肿瘤组织称瘤重,电镜取材、制作,观察各组肿瘤细胞结构的改变。结果与模型组比较,其余各组小鼠一般情况较好,高剂量加化疗组最佳,小鼠瘤重较模型组轻,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,其余各组的肺癌细胞形态都有不同程度的损伤,高剂量加化疗组细胞破坏最明显,出现大量细胞器坏死,染色质高度聚集。结论回药爱康方高剂量协同化疗可有效损伤肿瘤细胞。

回药爱康方对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞PCNA、SIL-2R表达的影响

目的:免疫细胞化学法检测不同组小鼠含药血清作用对肿瘤组织中PCNA的影响;ELISA方法检测鼠外周血s IL-2R。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药爱康方高剂量组(AKH);2荷瘤模型组(对照组);3回药爱康方中剂量组(AKM);4单纯化疗药组(CTX组);5回药爱康方中剂量组加化疗组(AKM+CTX);6回药爱康方低剂量加化疗药组(AKL+CTX);7回药爱康方低剂量组(AKL);8回药爱康方高剂量加化疗药组(AKH+CTX)。结果:与模型组比较高、中、低、高+环磷酰胺、中+环磷酰胺、低+环磷酰胺,组织中PCNA的表达都降低,差异具有显著统计学意义(P<0.05);血清中s IL-2R的表达都降低,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:本实验证明回药爱康方高中低剂量以及高中低剂量与环磷酰胺联合用药可以通过调节PCNA以及Sil-2的表达来抑制肿瘤细胞的增殖,对临床使用提供了更为可靠的实验依据。

爱康方含药大鼠血清对人肺腺癌A549细胞内Bad、Caspase-9蛋白及mRNA的作用

目的 探讨爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞内B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)、Caspase-9蛋白(Caspase-9蛋白)及mRNA的表达作用。方法 40只大鼠,采用随机分组法分为空白对照组(NS)、环磷酰胺组(CTX)、爱康方组(AKF)和爱康方联合环磷酰胺组(AC),每组10只。以人肺腺癌A549细胞为研究对象,依据前期研究结果选定20%的含药血清为最佳干预浓度,用各组含药血清分别干预细胞48、72 h后收集细胞用于检测。通过蛋白质印迹法(Western blot)测定干预后目的细胞中Bad、Caspase-9蛋白表达,实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)法测定Bad、Caspase-9 mRNA的表达。比较各组不同方法检测的Bad mRNA、Caspase-9 mRNA表达水平及Bad、Caspase-9蛋白表达水平。结果 48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于空白对照组,爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于环磷酰胺组和爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05);48 h时,环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于本组48 h,差异具有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于空白对照组,爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于环磷酰胺组和爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05);48 h时,环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于本组48 h,差异具有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad蛋白表达水平明显高于空白对照组,环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组高于爱康方组,爱康方联合环磷酰胺组高于环磷酰胺组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad蛋白表达水平高于本组48 h,差异有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9蛋白表达水平明显高于空白对照组,环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组高于爱康方组,爱康方联合环磷酰胺组高于环磷酰胺组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9蛋白表达水平高于本组48 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 爱康方能抑制肺癌肿瘤生长,与环磷酰胺合用抑癌效果更佳,可能是通过上调A549细胞中促凋亡蛋白Bad、Caspase-9,诱导肿瘤细胞凋亡而实现的。

回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨回药爱康方(HAKF)含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺(CTX)组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,药物低、中、高剂量15.0,30.0,45.0 g·kg-1,连续灌胃15 d,麻醉后心脏取血,制备含药血清。培养细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%,10%,20%3个体积分数的相应各组含药血清,对照组给予等体积分数的对照组大鼠血清,培养24,48,72 h后采用Annexin-VFITC/PI双染法测定各组含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,各时段5%,10%,20%浓度含药血清可提高A549的凋亡率(P<0.05),72 h时,各浓度回药爱康方低、中、高剂量含药血清对细胞的凋亡率的提高程度小于CTX(P<0.05);72 h 10%体积分数回药爱康方低剂量联合环磷酰胺血清提高细胞的凋亡率大于单纯CTX(P<0.05);各浓度爱康方中剂量和高剂量血清组,72 h与24 h比较,两组A549细胞的凋亡率均升高(P<0.05);随着血清体积分数的提高,各组细胞的凋亡率和坏死率呈增大趋势。结论:回药爱康方可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,且有一定的剂量和时间依赖性。

回药爱康方对Lewis肺癌抑制作用及突变型p53蛋白表达的影响

目的:观察回药爱康方对小鼠肿瘤生长的影响及对突变型p53蛋白(p53mt)表达的影响。方法:将55只C57小鼠常规接种Lewis肺癌细胞,24h后随机分为荷瘤模型组、化疗组、回药低剂量组、回药低剂量加化疗组、回药高剂量加化疗组。治疗后观察各组小鼠的脾脏、胸腺、瘤体质量,免疫组化法检测各组p53mt的表达差异。结果:①除化疗组外,其余各组小鼠体质量与荷瘤模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);②回药高剂量加化疗组抑瘤率为71.00%,与荷瘤模型组比较,各组瘤质量差异有统计学意义(P<0.05);③回药高剂量加化疗组p53mt表达阳性率为36.36%,与模型组比较有统计学意义(P<0.01);④与化疗组比较,各组小鼠脾脏指数及胸腺指数差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:回药协同化疗抑瘤效果及下调突变型p53的表达效果优于单纯化疗,且回药爱康方可以降低化疗后的免疫抑制,这可能是回族医药治疗肿瘤的新靶点。

爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞caspase-9和Bad表达水平的影响

目的观察爱康方(AKF)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bad mRNA及蛋白表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为生理盐水(NS)组、AKF组、环磷酰胺(CTX)组和AKF联合CTX(AKF+CTX)组,每组15只。参照本研究课题组前期采用方法制备含药血清,各实验组(AKF组、CTX组和AKF+CTX组)以20%最佳含药血清干预人肺鳞癌SK-MES-1细胞。空白对照组细胞仅用DEME完全培养液培养。干预24 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测caspase-9及Bad mRNA表达水平;采用Western blot检测caspase-9及Bad蛋白表达水平。结果与NS组相比,AKF组、CTX组和AKF+CTX组caspase-9、Bad mRNA及蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);各实验组组间比较,AKF+CTX组caspase-9、Bad mRNA及蛋白表达水平均明显高于CTX组及AKF组(P<0.05),CTX组caspase-9、Bad mRNA及蛋白表达水平均明显高于AKF组(P<0.05)。结论AKF促人肺鳞癌SK-MES-1细胞凋亡可能与调节caspase-9及Bad表达有关。

爱康方含药血清对Lewis肺癌细胞mTOR、Suvivin表达的影响

目的:观察爱康方含药血清对小鼠Lewis肺癌细胞mTOR、Suvivin蛋白表达水平的影响。方法:选择纯系SPF级雄性大鼠40只,分为生理盐水组(NS)、爱康方组(AKF)、环磷酰胺组(CTX)、爱康方联合环磷酰胺组(AKF+CTX)4组,每组10只。参照课题组前期实验方法制备含药血清。20%含药血清干预Lewis细胞48、72 h。实时荧光定量PCR技术检测mTOR、Suvivin mRNA水平,采用Western Blot法检测mTOR、Suvivin蛋白表达水平。结果:与NS组同期比较,AKF组、AKF+CTX组、CTX组mTOR、Suvivin mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.01);与CTX组同期比较,AKF+CTX组mTOR、Suvivin mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.05),随着干预时间的增加,72 h AKF+CTX组mTOR、Suvivin mRNA及蛋白表达水平下降优于本组48 h(P<0.05)。结论:爱康方含药血清能够诱导Lewis肺癌细胞凋亡可能与调控mTOR、Suvivin蛋白表达有关。

爱康方含药血清对小鼠Lewis细胞PI3K和AKT mRNA水平的影响研究

目的观察爱康方含药血清对小鼠Lewis细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶(AKT)mRNA水平的影响。方法参照课题组前期制备含药血清方法,将SD大鼠分为生理盐水对照组(NS组),爱康方低、中、高剂量组,环磷酰胺组(CTX组),爱康方低、中、高剂量联合CTX组(低剂量+CTX组、中剂量+CTX组、高剂量+CTX组),每组10只,制备含药血清。20%最佳含药血清干预细胞,实验组为低、中、高剂量组,CTX组,低、中、高剂量+CTX组,对照组为NS组,空白对照组只加DEME培养基,干预24、48 h后采用RT-qPCR法检测PI3K、AKT mRNA水平。结果24 h时各实验组PI3K mRNA水平明显降低,低剂量+CTX组最为明显。48 h时NS组PI3K mRNA水平高于空白对照组,低剂量、CTX组仅稍低于空白对照组,余实验组PI3K mRNA水平明显降低。24 h时除低剂量组,各实验组AKT mRNA水平均明显低于空白对照组,48 h各实验组AKT mRNA水平亦降低。结论爱康方使Lewis细胞PI3K、AKT mRNA水平降低,且与CTX联合发挥协同作用,推测该作用可能与PI3K/AKT信号通路有关。

回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白表达的影响

目的探讨回药爱康方(AKR)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白表达的影响。方法将80只大鼠分为8组,每组10只:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKRL、AKRM、AKRH)组,环磷酰胺(CTX)组,回药爱康方低、中、高剂量联合环磷酰胺(AKRL/AKRM/AKRH+CTX)组。制备含药血清。MTT法检测各组含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖的影响,免疫细胞化学法检测细胞Bcl-2以及p53蛋白的表达。结果和NS组比较,回药爱康方对SK-MES-1细胞生长增殖有抑制作用(P<0.05)。回药爱康方高剂量联合CTX组的抑制率最高(P<0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示,在不同浓度的含药血清作用下,和NS组相比,各实验组细胞的IOD值逐渐减小,差异有统计学意义(P<0.05);20%浓度的含药血清各实验组IOD值低于5%、10%浓度的含药血清组(P<0.05)。分别干预细胞24h、48h、72h后,与NS组比较,各实验组细胞的IOD值逐渐减小(P<0.05);20%浓度含药血清干预细胞72h,各实验组的阳性表达逐渐减弱,IOD值较低(P<0.05),AKRH+CTX组细胞的抑制率最高,故阳性表达最弱,IOD值最低。结论回药爱康方可以降低人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白的表达,抑制SK-MES-1细胞增殖。

爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞PI3K、Akt及p-Akt表达的影响

目的初步观察爱康方20%浓度最佳含药血清对A549细胞PI3K、Akt及p-Akt表达的影响,探讨其细胞的凋亡作用是否与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路有关。方法参照课题组前期制备含药血清方法制备爱康方含药血清,将SD大鼠40只分为4组:生理盐水对照组(NS组),爱康方低、中、高剂量组,每组10只,制备含药血清。将SD大鼠分组对应所制备的含药血清,调配成20%最佳含药血清一一对应干预A549细胞,再补充只加DMEM培养基的细胞作为空白对照组。采用Western blot检测各组细胞PI3K、Akt、p-Akt表达。结果对于PI3K,培养24 h后,与NS组和空白对照组比较,除低剂量组,中、高剂量PI3K蛋白表达水平下调(P<0.05);培养48 h后,与空白对照组和NS组比较,低、中、高剂量组PI3K蛋白表达水平均下调(P<0.05)。对于Akt,培养24 h后,与空白对照组和NS组比较,中、高剂量组Akt蛋白表达水平下调(P<0.05);培养48 h后,与空白对照组和NS组比较,中、高剂量组Akt蛋白表达水平下调(P<0.05)。对于p-Akt,培养24 h后,与空白对照组和NS组比较,高剂量组p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论爱康方含药血清能下调A549细胞PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达,推测其发挥的凋亡作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。