EB病毒特异性T细胞克隆的建立及其对不同浓度重组白细胞介素-2的反应

以辐射灭活的EB病毒类淋巴母细胞株作为刺激抗原,培养液中加入10％MLA-144上清液(含IL-2),用限制性稀释法建立EB病毒特异性T细胞克隆.在用含不同浓度的重组IL-2(rIL-2)培养后,检测T细胞克隆特性的改变,结果显示,特异性T细胞克隆的建立依赖于特异性抗原的刺激及少量IL-2的存在.T细胞克隆形成后,其特异性、HLA限制性及T细胞表型等特性是相对稳定的,不受培养液中rIL-2浓度变化的影响.

定量和定位检测EB病毒在鼻咽癌组织中的感染状态

背景与目的EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)与鼻咽癌密切相关,但EBV是鼻咽癌的致瘤因素还是仅仅是伴随关系有待进一步研究,而且EBV在鼻咽癌发生过程中的潜伏状态也不明确,本研究通过检测EBV在不同鼻咽组织中的表达变化,为进一步阐明EBV与鼻咽癌发生的关系提供线索。方法应用荧光定量PCR(real-timePCR)技术定量检测47例鼻咽低分化鳞癌患者癌、癌旁及相对正常鼻咽粘膜组织中的平均EBV拷贝数;并采用原位杂交技术(地高辛标记的EBER-1探针)对鼻咽癌、癌旁、对侧正常鼻咽粘膜中的EBV进行定位检测。以10例正常人鼻咽粘膜组织作对照。结果正常人鼻咽粘膜EBV检出率为80%(8/10),平均拷贝数为6.7×102/滋gDNA;100%(47/47)鼻咽癌和癌旁组织以及72.3%(34/47)的对侧正常鼻咽粘膜组织检出EBV,平均拷贝数分别为6.9×105/滋gDNA、1.5×105/滋gDNA、9.8×103/滋gDNA。正常人鼻咽粘膜、鼻咽癌患者对侧正常鼻咽粘膜之间感染EBV的几率、潜伏感染EBV的数量没有显著性差异(P>0.05);鼻咽癌及其癌旁、对侧正常粘膜组织三者之间,鼻咽癌与癌旁组织之间,癌旁和对侧正常粘膜组织之间EBV拷贝数存在显著性差异(P<0.01)。EBER-1原位分子杂交发现,对侧正常粘膜上皮细胞未检测到EBER-1的表达信号,癌旁靠近癌一侧的部分不典型增生细胞检测到EBER-1弱阳性信号,而在癌组织中的所有癌细胞均有EBER-1强阳性信号。结论无论是鼻咽癌患者还是健康人,EBV在鼻咽组织中的潜伏感染是一种普遍现象,但从鼻咽癌患者对侧正常鼻咽粘膜到癌旁再到癌组织EBV感染的量发生了改变,说明鼻咽上皮细胞中EBV感染量和表达信号的改变很可能是EBV致鼻咽癌的重要环节。

鼻咽癌组织LMP-1表达与外周血EBV-IgA/VCA的关系

目的研究鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者Epstein-Barr病毒(EBV)感染及潜伏膜蛋白1(la-tent membrane protein-1,LMP-1)表达的情况。方法采用免疫组化实验技术对62例鼻咽癌活检组织及33例慢性鼻咽炎组织中LMP-1的表达进行检测,同时采用免疫酶标法对这些患者外周血EBV的IgA/VCA抗体进行检测。结果外周血EBV-IgA/VCA检出总阳性率在NPC患者中为90.32%(56/62),在慢性鼻咽炎患者中为3.03%(1/33),两者之间差异具有显著性意义(P<0.05);LMP-1在NPC组织中表达的总阳性率为59.68%(37/62),在慢性鼻咽炎组织中表达的阳性率为6.06%(2/33),两者之间差异具有显著性意义(P<0.05);EBV-IgA/VCA与LMP-1共表达的患者占NPC患者总数的62.5%(35/56)。结论NPC患者外周血EBV-IgA/VCA表达与肿瘤组织中LMP-1阳性表达具有明显相关性;鼻咽癌发病与EBV感染明确相关。

鼻咽癌组织p53蛋白积聚与血清EB病毒抗体ⅠgA/VCA的关系

目的 :研究鼻咽癌活检组织中p5 3积聚与患者血清EB病毒抗体ⅠgA/VCA滴度水平的相关关系。材料和方法 :用免疫组化方法检测取自 3 6例鼻咽癌组织中p5 3表达和细胞增生情况 ;用免疫酶标法检测患者血清ⅠgA/VCA滴度。结果 :鼻咽癌活检组织中p5 3蛋白表达与患者血清ⅠgA/VCA几何平均滴度 (geometricmeantitre ,GMT)和细胞增生核抗原 (PCNA)表达程度正相关。 10例p5 3高积聚 ( )患者的ⅠgA/VCAGMT( 5 19 88± 2 5 3 )明显高于 12例无p5 3积聚患者 ( 2 2 6± 2 84 )。PCNA表达强度与ⅠgA/VCAGMT亦呈正相关。结论 :p5 3积聚强度与PC NA呈正相关提示鼻咽癌组织中积聚的p5 3已丧失阻止细胞从G1期进入S期的生理功能。而p5 3积聚强度与患者血清ⅠgA/VCAGMT升高呈正相关提示 。

组织细胞性坏死性淋巴结炎中EBV-LMP-1、Fas/Fas-L的表达

目的探讨EB病毒、Fas/Fas-L在组织细胞性坏死性淋巴结炎(histiocytic necrotizing lymphadenitis,HNL)发生、发展中的作用及相互关系。方法应用免疫组化SP法检测40例HNL和10例反应性增生淋巴结组织中的CD8、EB病毒编码的隐伏膜蛋白(EBV-LMP-1)、Fas、Fas-L蛋白的表达状况。结果LMP-1、Fas/Fas-L在HNL的表达均比对照组明显增高(P<0·05)。EBV-LMP-1的表达与Fas/Fas-L呈正相关(P<0·05)。结论EB病毒是HNL的发病原因之一,Fas/Fas-L介导的细胞毒性反应为引起EB病毒感染淋巴细胞凋亡的主要原因之一。

EB病毒基因BARF1在鼻咽癌中的表达及其意义

目的 EB病毒与鼻咽癌 (特别是低分化鳞癌 )密切相关。BARF1基因是EBV裂解期中的早期基因 ,本研究通过检测BARF1基因在鼻咽癌组织中的表达 ,希望能进一步揭示EB病毒与鼻咽癌的关系及致癌的可能机制。方法 对经病理确诊的 4 7例鼻咽低分化鳞癌病人分别取癌组织、癌旁组织及相对正常鼻咽黏膜和 13例其他头颈部恶性肿瘤癌组织及 8例正常人鼻咽黏膜组织 (均证实有EB病毒潜伏感染 ) ,采用巢式 -PCR技术检测BARF1在这些组织中的表达情况。结果 鼻咽癌组织BARF1基因表达率为 91.5 % (43/ 4 7) ,其中 39例相对强表达 ,4例弱表达 ;癌旁组织BARF1基因表达率为 4 6 .8% (2 2 / 4 7) ,其中 11例相对强表达 ,11例弱表达 ;相对正常黏膜BARF1基因表达率为 6 .4 % (3/ 4 7) ,3例均为弱表达 ;携带EB病毒的其他头颈部恶性肿瘤组织、正常人鼻咽黏膜组织均未检测到BARF1基因表达。结论 从相对正常鼻咽黏膜到癌旁组织再到鼻咽癌组织BARF1基因的表达趋势为从不表达到表达 ,从弱表达到强表达。说明EB病毒与鼻咽癌的发生确实存在密切相关性 ;提示启动BARF1基因的表达有可能是EB病毒致鼻咽癌的重要条件之一。

科学新闻

(2021-08-13)The Cover封面故事在25年探索火星的时间里,火星车是如何发展的:25年来,遥控火星车揭示出火星之水的历史,并且还在继续寻找生命曾经存在的证据。Features特写多样硬化存在一种常见的病毒元凶,这为新疗法开启了一扇大门:对于普通的爱波斯坦-巴尔病毒可能引发多样硬化的了解,或有助于专家设计出更好的医疗方法,甚至终结这种疾病。

EB病毒LMP2A在鼻咽癌患者肿瘤组织中的表达及意义

目的:观察EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)在鼻咽癌(NPC)患者肿瘤组织中的表达,探讨采用LMP2A作为靶抗原进行NPC免疫治疗的可行性。方法:采用SP免疫组织化学方法,检测40例NPC组织及38例鼻咽黏膜慢性炎症组织标本LMP2A的表达。结果:40例NPC标本中36例LMP2A表达阳性(90.0%);LMP2A的表达与NPC病理分化程度无明显相关性。38例鼻咽黏膜慢性炎症组织标本中33例LMP2A阴性反应,5例阳性反应。鼻咽黏膜慢性炎组织与NPC组织中LMP2A阳性表达率间差异存在统计学意义。结论:在不同病理分化程度的NPC肿瘤组织中LMP2A均可广泛表达,在正常鼻咽组织细胞中基本不表达。采用LMP2A作为靶抗原诱导机体特异性细胞免疫反应杀伤NPC肿瘤细胞具一定可行性。

EB病毒在鼻咽癌发生中的作用

目的 :探讨鼻咽癌 (NPC)组织及患者外周血白细胞和血清中EB病毒DNA的分布及其与NPC的关系。方法 :采用多聚酶链反应 (PCR)检测 39例NPC组织 (NPC组 1)中EB病毒DNA ,2 4例NPC患者 (NPC组 2 )外周血白细胞及血清中EB病毒DNA ,2 0例慢性鼻咽炎组织 (对照组 1)中EB病毒DNA ,10例头颈部其他部位肿瘤患者 (对照组 2 )和 10例慢性鼻咽炎患者 (对照组 3)外周血白细胞及血清中EB病毒DNA ;同时采用免疫酶法检测NPC组 2、对照组 2和对照组 3血清中EB病毒VCA IgA抗体效价。 结果 :NPC组 1EB病毒DNA阳性率为 71.8% (2 8/ 39) ,对照组 1阳性率为 15 .0 % (3/ 2 0 ) ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;NPC组 2外周血白细胞中EB病毒DNA阳性率为 4 1.6 7% (10 / 2 4 ) ,对照组 2阳性率为 10 .0 0 % (1/ 10 ) ,对照组 3外周血白细胞中EB病毒DNA为阴性 ,NPC组 2分别与对照组 2和对照组 3比较 ,差异均有统计学意义 (均P <0 .0 5 ) ;NPC组 2、对照组 2和对照组 3血清中EB病毒DNA均为阴性 ;NPC组 2血清中EB病毒VCA IgA抗体效价分别与对照组 2和对照组 3比较 ;差异均有统计学意义 (均P <0 .0 1)。结论 :NPC组织中检测出EB病毒DNA的阳性率较高 ,外周血白细胞中阳性率较低 ,血清中未能检测出EB病毒DNA 。

原发性EB病毒感染后特异性T细胞免疫功能的研究进展

原发性EB病毒（EBV）感染后机体产生针对裂解期和潜伏期病毒抗原特异性CD8^＋／CD4^＋细胞毒性T细胞（CTL），清除病毒控制EBV感染。EBV原发感染后临床表现多样，造成这一现象的原因尚不明确，其特异性T细胞对控制病毒感染起到关键作用。随访研究发现EBV原发感染后针对裂解期和潜伏期病毒抗原特异性T细胞功能变化不同，同时对EBV特异性T细胞亚群的分析发现，T细胞的迁移活化在EBV感染机制中亦起到重要作用。