EB病毒核抗原1对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究EB病毒核抗原1（Epstein—Barr virus nuclear antigen1，EBNAI）对人鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响。方法构建特异性的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）EBNA1慢病毒干扰载体，包装慢病毒后感染过表达EBNA1的鼻咽癌细胞C666－EBNA1（简写为CE）。应用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）和细胞计数法检测细胞增殖状态，流式细胞术、荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测细胞周期及相关调控因子变化。结果成功构建含shRNA EBNA1的重组慢病毒，其感染可显著下调CE细胞中EBNA1表达。细胞计数和MTF均证明CE—shRNA细胞的增殖能力较CE-对照组显著下降（P值均〈0．05）。细胞周期提示干扰EBNAl后cE细胞G0．G1期比例由（62．43±6．62）％升高到（89．66±0．64）％，两者比较差异有统计学意义（t=-7．091，P=0．002），S期比例由（34．93±7．36）％下降为（7．824-2．44）％，两者比较差异有统计学意义（t=6．095，P=0．004），G2-M期无明显变化（t=0．090，P=0．933）。抑制EBNA1后，c—myc、CDK4、CDK6、pRb的mRNA水平分别下调65．60％、34．06％、41．05％、55．29％。蛋白免疫印迹法证实抑制EBNA1后4种蛋白的表达亦下凋。结论沉默EBNA1基因可抑制鼻咽癌细胞增殖，其机制之一可能是通过影响c—myc、CDK4、CDK6、pRb等基因的表达使鼻咽癌细胞阻滞于G0-G1期。

2005-2010年北京地区儿童原发性EBV感染流行株EBNA1与LMP1基因特征分析

目的分析2005-2010年北京地区儿童原发性EBV感染流行株EBNA1与LMP1基因特征，为研究EBV变异株与疾病临床表型间是否存在相关性提供背景资料。方法应用PCR方法扩增EBV的EBNA3C、EBNA1和LMP1基因片段，测序后应用BioEdit 7．0．9和Mega 4．0．2软件进行序列分析。结果62例进行了EBV分型，以EBV-Ⅰ型为主，检出率为98％。62例EBNA1基因扩增阳性，其中V—val亚型（均是Vvvl变异株）为98％。50例LMP1基因羧基段扩增阳性，以China1为主，其检出率为90％。Vvv1变异株和China1变异株在EBV—IM与EBV—HLH中的检出率差异均无统计学意义（P=1．00）。40例进行了多基因连锁分析，其中EBV—Ⅰ型、EBNA1-Vvv1变异株和LMP1-China1变异株高度连锁，其连锁检出率为90％。35例患儿LMP1基因全长扩增阳性，CG1-CG4的检出率分别为85％、6％、6％和3％。结论北京地区儿童原发性EBV感染疾病中，EBV亚型以EBV-Ⅰ型为主，Vvv1变异株和China1变异株分别是EBNA1和LMP1变异株中的优势变异株，且二者高度连锁。儿童原发性EBV感染流行株可以分为CG1-4组，其中以CG1为主。