父系表达基因10蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究父系表达基因10(PEG10)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法收集2006年3月至2011年5月52例肝细胞癌组织,采用免疫组织化学法检测组织中PEG10表达,分别以31例癌旁组织、10例正常肝组织标本和10例胎盘组织作为对照。回顾52例肝细胞癌患者各项指标检测结果,并分析各项指标与PEG10表达的关系。结果 PEG10在肝细胞癌组织中阳性表达率为90.38%(47/52),显著高于癌旁正常组织[67.74%(21/31)]和正常肝组织(0),差异有统计学意义(P<0.01)。PEG10表达的阳性程度与肝细胞的分化程度呈正相关(r=0.441,P<0.01)。PEG10表达在肿瘤大小、不同年龄和性别患者间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PEG10在肝细胞癌组织中表达的阳性程度与肿瘤分化程度有关,对肝细胞癌的敏感性好,但其特异性不强。

父系表达基因10(PEG10)单克隆抗体的制备和鉴定

目的获得印记基因父系表达基因10(PEG10)单克隆抗体(mAb),为进一步研究PEG10的功能以及肝癌的实验室诊断奠定基础。方法采用细胞融合技术,以PEG10抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合,通过多次阳性筛选和有限稀释,建立了抗人PEG10 mAb杂交瘤细胞株。采用间接ELISA和Southern biotech试剂盒对mAb的特性进行鉴定,采用Western blot法及免疫组织化学染色验证mAb与肝癌细胞内源性PEG10蛋白的结合。结果成功建立2株稳定分泌抗PEG10蛋白的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为3E8和3F3,均属IgG1亚类,κ型,且无交叉反应。Western blot法及免疫组织化学实验证实,mAb 3E8均能特异性结合肝癌细胞内源性PEG10蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的PEG10 mAb,该抗体有可能用于肝癌的实验室诊断。

C-Kit、父系表达基因10在原发性肝癌患者中的表达及与临床特征和预后的关系

目的探讨C-Kit、父系表达基因10(PEG10)在原发性肝癌(PLC)患者中的表达及与临床特征和预后的关系。方法收集PLC患者的PLC组织90例及癌旁正常组织90例,采用免疫组织化学染色法检测C-Kit和PEG10的表达情况。比较PLC组织和癌旁正常组织中C-Kit和PEG10蛋白的表达情况,比较不同临床特征PLC患者PLC组织中C-Kit和PEG10蛋白的表达情况。采用Logistic回归模型分析PLC患者预后的影响因素。结果PLC组织中C-Kit和PEG10蛋白的高表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、甲胎蛋白(AFP)水平﹥200 ng/ml的PLC患者PLC组织中C-Kit和PEG10蛋白高表达率分别明显高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、AFP水平≤200 ng/ml的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,90例PLC患者的3年生存率为51.11%(46/90)。单因素分析结果显示,临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、预后评分﹤7分、C-Kit蛋白高表达、PEG10蛋白高表达、AFP水平﹥200 ng/ml的PLC患者的3年生存率分别明显低于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、预后评分≥7分、C-Kit蛋白低表达、PEG10蛋白低表达、AFP水平≤200 ng/ml的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、预后评分﹤7分、C-Kit蛋白高表达和PEG10蛋白高表达均是PLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论C-Kit和PEG10在PLC组织中高表达,其表达情况与患者的临床特征及预后有关,C-Kit和PEG10蛋白有可能作为理想的PLC预后标志物。

腹腔镜下射频消融联合静脉化疗对肝癌患者血清肿瘤标志物甲胎蛋白、细胞角蛋白19、父系表达基因10表达的影响

目的探讨腹腔镜下射频消融联合静脉化疗对肝癌患者血清肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK19)、父系表达基因10(PEG10)表达的影响。方法选取原发性肝癌患者86例,随机分为对照组43例,予临床常规静脉化疗治疗;实验组43例,在对照组静脉化疗的基础上联合应用腹腔镜下射频消融治疗。观察2组患者治疗前后血清肿瘤标志物AFP、CK19、PEG10、肿瘤组织相关基因mRNA表达量,以及治疗后4个月复发率及生存时间水平变化。结果与治疗前相比,治疗后2组患者的血清AFP、CK19、PEG10水平均比治疗前明显降低;与对照组比较,实验组患者治疗后血清AFP、CK19、PEG10水平、HIF-1、VEGF mRNA、β-catenin、Cyclin D1、c-myc及MMP-7 mRNA表达量水平均低于对照组,PTEN mRNA表达量水平高于对照组;实验组中位生存期(28.3个月)显著高于对照组(13.7个月),上述差异均有统计学意义(P<0.05)。结论腹腔镜下射频消融联合静脉化疗能有效降低肝癌患者血清肿瘤标志物AFP、CK19、PEG10水平,通过PTEN通路、Wnt通路抑制肝癌细胞生长,延长生存时间。

父系表达基因10(PEG10)在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:检测父系表达基因10(PEG10)在肝细胞癌组织中的表达,分析PEG10与肝细胞癌生物学行为及预后的相关性。方法:应用免疫组化方法检测88例肝细胞癌组织与癌旁组织中PEG10的表达情况,并分析PEG10阳性表达与癌组织生物学行为及患者预后的相关性。结果:PEG10阳性与低分化等级、Ki67(+)及mDFS缩短具有明显相关性(P<0.05)。结论:PEG10阳性表达提示肝细胞癌预后较差。

人肝癌父系表达基因10的遗传印记状态

目的研究人肝癌组织及肝癌细胞株中父系表达基因10（PEG10）的遗传印记状态。方法从40例肝癌及其癌旁组织、15例正常肝组织、5株肝癌细胞（PLC／PRF／5、SMMC7721、HepG2、Hep3B、SK—HEP—1）、2株正常肝细胞（changliver、HL7702）中提取基因组DNA，针对PEG10基因单核苷酸多态性位点设计引物进行PCR，扩增片段经测序分析基因型，从杂合样本中提取总RNA进行RT—PCR，对扩增产物测序以检测等位基因表达状态，同时进行实时荧光定量RT—PCR检测PEGl0表达水平。计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，组间比较用t检验与方差分析；两组率的比较用x2检验。结果40例肝癌及其癌旁组织中16例呈杂合状态，15例正常肝组织中3例呈杂合状态，肝癌细胞HepG2扩增片段测序检测到一杂合突变位点，其余组织及细胞株均为纯合状态。杂合样本中，82．4％（14／17）肝癌样本（包括组织及肝癌细胞株）中PEG10基因呈双等位基因表达，发生印记丢失；17．6％（3／17）肝癌样本呈单等位基因表达，提示印记存在。PEG10在癌旁及正常肝组织中几乎不表达。发生印记丢失的肝癌组织与印记存在的肝癌组织相比，PEG10表达水平的差异无统计学意义（t=1．311，P〉0．05）。结论大多数肝癌组织中存在PEG10印记丢失现象，PEG10印记状态与其在肝癌组织中的表达水平无明确关系。

miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响

目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。

人肝癌细胞遗传印记基因PEG10印记状态不受DMR甲基化调控

目的探讨人肝癌细胞遗传印记基因(genetic imprinted gene)PEG10差异性甲基化区(differntially DNA methylated region,DMR)甲基化状态在其印记调控中的作用。方法以单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点为等位基因标记,分析人肝癌HepG2细胞PEG10印记状态;采用RT-PCR、免疫组化及Western-blot检测PEG10表达水平;重亚硫酸盐修饰DNA测序法分析PEG10-DMR甲基化状态;再应用甲基基团供体S-腺苷蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)及DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azaC)在体外及荷瘤裸鼠体内调控HepG2细胞PEG10-DMR甲基化状态,观察PEG10-DMR甲基化状态改变对PEG10印记状态及表达水平的影响。结果遗传印记基因PEG10在HepG2细胞呈双等位基因表达的印记丢失。与正常肝细胞HL7702相比,其PEG10-DMR甲基化水平显著升高。调控PEG10-DMR甲基化水平可改变PEG10的表达水平,但对其印记状态无影响。结论 PEG10-DMR甲基化不参与人肝癌细胞PEG10的印记调控,但可调控其表达水平。

长链非编码RNA PEG10在结直肠癌中表达的临床意义和生物学功能

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)父系表达遗传印记基因10(paternally expressed 10,PEG10)在人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达、临床意义及生物学作用。方法利用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)的方法检测66例CRC肿瘤组织及正常癌旁对照组织中lncRNA PEG10 mRNA的表达水平,分析lncRNA PEG10的表达与CRC患者临床病理资料及预后之间的相关性。在体外,利用CCK-8实验、Transwell迁移和侵袭实验检测lncRNA PEG10的表达对CRC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁正常对照组织相比,lncRNA PEG10在CRC肿瘤组织中的表达显著升高(P<0.01),并且与CRC患者的肿瘤浸润深度(P=0.017)、淋巴结转移情况(P=0.009)及TNM分期(P<0.001)显著相关。此外,lncRNA PEG10高表达是CRC患者预后的独立危险因素,与CRC患者总生存期(P=0.0037)和无进展生存期(P=0.0019)的减少密切相关。CCK-8细胞活性实验表明,lncRNA PEG10表达干扰能够抑制CRC细胞系HCT-116和DLD-1的增殖能力(均P<0.01);Transwell细胞侵袭实验表明,lncRNA PEG10表达干扰能够抑制CRC细胞系HCT-116和DLD-1的浸润能力(P<0.05或P<0.01);Transwell细胞迁移实验表明,lncRNA PEG10表达干扰能够抑制CRC细胞系HCT-116和DLD-1的转移能力(P<0.05或P<0.01)。结论lncRNA PEG10与CRC患者预后不良密切相关,并且促进CRC细胞的增殖、浸润和转移。lncRNA PEG10靶向治疗或许能够为CRC患者预后的改善带来巨大的益处。