利用扩增片断长度多态性技术分析长江刀鲚的遗传多样性

利用AFLP技术对我国长江南京潜州江段捕获的野生刀鲚（Coilia nasus）资源的遗传多样性进行了分析．筛选出扩增片段多、条带清晰的3对EcoRI／Mse I引物组合，在34尾个体中共扩增出118条清晰的片段，分子量大小在200～1500bp之间，其中多态位点67个，多态性比例为56．78％．种群Nei基因多样性指数为0．2183，Shannon多样性指数为0．3204；种群内遗传距离在0．1263～O．4012之间，显示目前长江刀鲚野生群体的遗传多样性比较丰富．

隔指孢属rDNA ITS区间限制性片断长度多态性(RFLP)分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌隔指孢属进行了系统发育研究。以 ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对该属８种８个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了 ＰＣＲ扩增， ４种内切酶（ ＡｌｕⅠ、 Ｈａｅ Ⅲ、 Ｈｐａ Ⅱ、 ＴａｑⅠ）酶切。结果表明该属的 ＩＴＳ区长度没有明显差异，其长度范围在５６４～５９５之间，酶切图谱能体现不同种 间的多态性。根据４种内切酶酶切结果，利用ＵＰＧＭＡ法构建的隔指孢属分子系 统树，基本体现了属内不同种间的亲缘关系，从分子水平证明了隔指孢属形态分类 上的合理性。

烟草根结线虫生防菌限制性片断长度多态性(RFLP)分析

利用PCR RFLP方法对烟草根结线虫生防菌单顶孢属进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4 为引物对该属 12种14个菌株的核糖体DNA转录间区 (ITS)进行了PCR扩增 ,4种内切酶 (AluⅠ、HaeⅢ、HpaⅡ、TaqⅠ )酶切。结果表明 ,该属的ITS区长度没有明显差异 ,其长度范围在 60 8～ 675之间。酶切图谱能体现不同种间的多态性 ,根据 4种内切酶酶切结果 ,利用UPGMA法构建的单顶孢属分子系统树 ,基本体现了属内不同种间的亲缘关系 。

人血红蛋白β-链基因AvaⅡ位点扩增片断长度多态性

目的：为了研究日本人群β-链基因AvaⅡ酶切位点的遗传多态性以及该位点等位基因频率的分布。方法：采用PCR- RFLP技术,对35例无血缘关系的健康日本大学生的70条染色体进行检测,然后用X^2检验进行统计学处理。结果：等位基因B_1频率为0．4715,等位基因B_2频率为0．5287,杂合度H=0．5429,期望杂合度h=0．4986,多态信息量PIC=0．7635；B_1、B_2的传递规律和理论上预计的完全符合,认为日本人群β-链基因AvaⅡ酶切位点也具有遗传多态性,表明β-链基因AvaⅡ酶切位点具有适合信息,并且与国外报道的无显著性差异。结论：这对遗传制图、基因分离、疾病的关联研究,法医学个体识别和双生子的卵性鉴定有一定的价值。

不同癌细胞株放射敏感性与端粒长度的关系

目的:研究人类不同癌细胞株放射敏感性与端粒长度的关系,寻求放射敏感性预测的可行指标。方法:以不同层次的人类癌细胞株为实验对象,既包括鳞癌(Hep-2)、腺癌(ZR-75-30、MCF-7、MDA-MB-435S、T-47-D、F539-1590)、胶质瘤U251,又含有同一病理类型的不同亚株(5种不同的乳腺癌细胞株),还包括辐射诱导建立的放射抗拒细胞株(Hep-2R),用克隆形成实验拟合细胞存活曲线测定8株细胞的放射生物学参数,Southernblotting法测量各细胞株的端粒限制片断长度(TRF),分析放射敏感性与端粒限制片断长度的关系。结果:8株细胞的放射敏感性各不相同,Hep-2(人喉鳞癌细胞株)的SF2=0.4148,U251(人恶性胶质瘤细胞株)的SF2=0.7520,腺癌细胞株介于二者之间;端粒长度在放射抗拒细胞株Hep-2R中达11.12kb,数倍长于鳞癌亲本株或腺癌细胞株。端粒长度与放射敏感性参数SF2(r=0.786,P<0.05)、D0(r=0.905,P<0.01)均成正相关关系。结论:端粒长度与人癌细胞株的放射敏感性描述参数SF2、D0成正相关关系,故端粒长度与人癌细胞株的放射敏感性成负相关关系,它可以作为放射敏感性预测指标之一。

PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中复发易感性的关系研究

目的分析血小板内皮聚集受体1(PEAR1)基因多态性与缺血性脑卒中复发的相关性,为防治缺血性脑卒中复发提供依据。方法选取该院神经内科门急诊和住院确诊为急性缺血性脑卒中的150例患者作为研究对象,根据是否为脑卒中复发分为初发脑卒中组(127例)和复发脑卒中组(23例)。应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性,并测序验证基因型。结果初发脑卒中组和复发脑卒中组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发脑卒中组的年龄较初发脑卒中组高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、PEAR1基因rs12041331位点AA基因型与缺血性脑卒中复发有关,是缺血性脑卒中复发的危险因素(P<0.05)。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点多态性与缺血性脑卒中复发相关。PEAR1基因纯合突变可能是缺血性脑卒中复发的危险因素,PEAR1基因可能是缺血性脑卒中复发风险预测的候选基因。

PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中的相关性研究

目的分析PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中相关性,为缺血性脑卒中发病机制的进一步研究提供科学依据,为疾病防治提供新的思路。方法收集昆明医科大学附属延安医院神经内科门急诊或住院确诊为急性缺血性脑卒中患者150例作为实验组,同期150例健康体检者作为对照组,应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性(SNP),并测序验证基因型。结果卡方检验显示缺血性脑卒中组和正常对照组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率间的差异有统计学意义(P<0.05);缺血性脑卒中组的糖尿病、高血压比例较正常对照组多,同型半胱氨酸(HCY)水平较正常对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示PEAR1基因rs12041331G>A位点突变可能是缺血性脑卒中发生的危险因素。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点基因多态性与缺血性脑卒中发生相关。rs12041331G>A位点基因可作为缺血性脑卒中风险预测的候选基因。

RFLP和AFLP分析白菜型油菜和甘蓝型油菜遗传多样性及其在油菜改良中的应用价值(英文)

采用RFLP和AFLP标记对来自中国和欧美的7份甘蓝型油菜和22份白菜型油菜进行了遗传多样性分析。在这29份材料中,166个酶-探针组合和2对AFLP引物共检测到1477个RFLP标记和183个AFLP标记。RFLP数据显示以拟南芥EST克隆作探针比用油菜基因组克隆做探针能检测到更多的多态性位点,且采用EcoRⅠ或BamHⅠ酶切比HindⅢ酶切多态性好,白菜型油菜和甘蓝型油菜中基因的拷贝数平均都为3个左右。UPGMA聚类分析表明中国白菜型油菜的遗传多样性比甘蓝型油菜和欧美白菜型油菜丰富,欧美甘蓝型油菜与欧美白菜型油菜聚为一类,而与中国甘蓝型油菜差异更大。中国白菜型油菜丰富的遗传多样性为中国甘蓝型油菜的改良提供了宝贵的资源,揭示了利用白菜型油菜A基因组和甘蓝型油菜A基因组间亚基因组杂种优势的可能性。

四种方法获取DNA用于检测IL-1基因多态性的比较分析

目的 :寻求一种能方便、简捷、有效地获取患者DNA的方法 ,以用于检测患者基因多态性。方法 :采用 4种方法获取患者DNA ,即静脉血中用酚 -氯仿法抽提 ,指尖血血痕中用Chelex 10 0法抽提 ,颊粘膜拭子中用Chelex 10 0法抽提及直接用干燥血痕作为PCR扩增的DNA模板。对同一个体分别用 4种来源的DNA检测其IL 1基因多态性 ,比较结果的特异性和敏感性。结果 :颊粘膜拭子抽提DNA作基因多态性分析特异性高、敏感性强 ,优于静脉血酚 -氯仿法抽提DNA ,且取颊粘膜拭子无创、方便。Chelex 10 0法抽提DNA比酚 -氯仿法更简单、快速。结论 :颊粘膜拭子结合Chelex 10

我国引进条斑星鲽群体遗传多样性的AFLP分析

应用AFLP技术对我国条斑星鲽引进群体（烟台、大连和莱州）共63尾个体的遗传多样性及遗传变异进行分析，计算了3个群体间的遗传相似性指数和遗传距离，并构建了UPGMA系统发生树。10个引物组合在3个群体中共扩增到827个位点，大小位于50-700bp。每个引物组合扩增到的多态性条带在8到37条之间不等，平均为17．9个。3个群体的多态性位点比例分别为29．14％、15．60％和20．31％；Shannon多样性指数分别为0．1799、0．0949和0．1231；Nei基因多样性指数分别为0．1225、0．0658和0．0848。3个条斑星鲽引进群体的遗传多样性水平，烟台引进群体最高，莱州引进群体次之，大连引进群体最低，但总体水平均较低。烟台引进群体与大连引进群体间的遗传距离最大为0．0230，莱州引进群体与大连引进群体间的遗传距离最小为0．0129。3个引进群体间的遗传分化系数（Gst）为0．219，表明3个引进群体之间发生了一定程度的分化。

湖北人群Toll样受体4基因多态性研究

目的 研究湖北人群Toll样受体 4 (TLR4 )Asp2 99Gly和Thr399Ile基因多态性分布特征。 方法 采用等位基因特异性聚合酶链反应 (ASPCR) 限制酶片断长度多态性 (RFLP)检测TLR4Asp2 99Gly和Thr399Ile基因多态性。结果 在所有的 2 5 3例中国湖北人群样本中 ,没有检测到TLR4Asp2 99Gly和Thr399Ile基因多态性存在。 结论 TLR4基因多态性在不同地区和人群发生的频率是不同的 ,与白种人相比 ,中国湖北人群的TLR4Asp2 99Gly和Thr399Ile的基因多态性非常罕见。

DNA分子标记技术

综述了不同类型的DNA分子标记技术 ,对各技术的优、缺点及其应用进行了详细的介绍 。

广东地区乙型肝炎病毒基因型研究

目的了解广东地区乙型肝炎病毒慢性感染者基因型。方法采用限制性片段长度多态性(RFLP)及序列测定法检测广东地区27例HBV携带者和173例慢性乙肝患者的HBV基因型。结果B型105例(52.5%),C型94例(47%),D型1例,未发现其他基因型。B型中ASC所占比例(18.1%)显著高于C型中ASC所占比例(8.5%),χ2=3.89,P<0.05。C型中肝硬化所占比例(23.4%)显著高于B型中肝硬化所占比例(7.6%),χ2=8.46,P<0.01。C型在ASC、慢性乙肝轻度、中度、重度及重型肝炎、肝硬化的比例依次增高,分别为29.6%(8/27),35.5%(11/31),44.2%(23/52),45.8%(11/24),52%(13/25),71%(23/31),提示广东地区C基因型与较重肝病有关。C型较B型年龄大。105例B型与94例C型无性别差异。结论广东地区HBV基因型有B,C,D型构成,以B型为主。C型较B型年龄大,与较重肝病有关。B,C型间无性别差异。

CYP1A1 MspI多态性与子宫内膜癌易感性的病例对照研究

自20世纪60年代以来，上海市区子宫内膜癌发病率逐年上升，且发病年龄有年轻化的趋势。子宫内膜癌的发病机制目前还不十分明确，多数流行病学研究显示子宫内膜癌的危险因素都与雌激素有关，雌激素水平升高导致的内膜增生及DNA损伤被认为是子宫内膜癌发生的主要机制。

红花檵木的AFLP分析及分类

采用荧光AFLP技术，对所收集的22个红花檵木材料和变异类型进行分类与亲缘关系研究．从64对引物组合中筛选出8对引物组合进行扩增，共扩增出1226条带，多态条带1085条，多态性比率为88．5％．冬艳紫红、大圆叶双面红的多态性比率最高，达100％，其同源性最低．基于AFLP分析的UPGMA聚类分析得到，供试材料的遗传相似系数为0．7442～0．9207．以0．8171的相似系数为阈值，所有供试材料被分为6大组群，第一组群内以0．8484为阈值，又可分为4组．通过AFLP标记发现冬艳红5个类型中冬艳玫红、冬艳亮红、冬艳卷瓣玫聚类在一起，冬艳紫红、冬艳卷瓣红与其他类型存在的遗传差异通过分子标记可以鉴定出来．通过标记发现大圆叶双面红并没有与大叶玫红、大叶红、大叶卷瓣红、大红伏划分在双面红类型中，其外部形态相似，但遗传距离有较大差异．与形态标记相比，基于AFLP标记的红花檵木分类体系更能反映红花橙木品种间的亲缘关系．

吉林市结核分支杆菌IS6110 DNA指纹图谱特征分析

目的 分析吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征。方法 对 5 3株结核分支杆菌分离株进行IS6 110基因分型 ,得到IS6 110RFLP图谱 ;按菌株指纹特征的同源性高低予以分组 ,并进行分析。结果 吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征为 :(1)IS6 110拷贝数目平均为 13个 ;(2 )A、B两组同源性很高 ,具有“北京基因型”特征 ,C组多态性较强 ;(3)IS6 110RFLP图谱特征分布无地域差异 ;(4)耐药菌株与敏感菌株图谱特征无明显差异 ,但初治耐药菌株成簇率较高。结论 吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征以“北京基因型”为主 ;但还具一些独有的特征。

胰岛素受体底物1基因Gly972Arg多态性与2型糖尿病不相关

目的 探讨中国汉族人群胰岛素受体底物 1(IRS- 1)基因 Gly972 Arg多态性与 2型糖尿病的关系。 方法 选取 10 2例 2型糖尿病患者及 10 2例糖耐量正常的患者配偶进行对照研究 ,应用聚合酶链反应——限制性片断长度多态性的方法进行胰岛素受体底物 1基因 Gly972 Arg多态性位点基因型检测。 结果 IRS- 1基因 Gly972 Arg突变频率在病例组和对照组均为 2 % ,明显低于白人。 结论 在中国汉族人群中 ,IRS- 1基因 Gly972 Arg突变不是

载脂蛋白E和脂肪结合蛋白-2基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨载脂蛋白E(Apo- E)基因、脂肪酸结合蛋白 2(FABP -2)基因 Ala54Thr的多态性与 2 型糖尿病肾病(DN)的相关性。方法 对65例2型糖尿病(DM)患者与 30 例健康对照者进行血清生化指标检测,并采用多聚酶链反应限制性片断长度多态性(PCR -RFLP)技术,观察Apo -E、FABP -2 Ala54Thr基因多态性,研究其与 DN的关系。结果 正常对照组与糖尿病组的 Apo- E、FABP- 2 等位基因和基因型频率存在差异(P<0.01)。DM3 组的Apo E2等位基因频率、FABP 2 Thr/Thr基因型频率高于正常对照组(P<0.01)。携ε2 等位基因的 DM患者胰岛素抵抗的稳态模式评估指数(HOMA)、甘油三酯(TG)水平高于携ε3、ε4者,胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)则低于两者,但无统计学意义。携 FABP- 2 Thr/Thr基因型患者的尿微量白蛋白(UAER)明显高于携Ala/Ala,Ala/Thr基因型者(P<0.05)。Apo- E2 与 FABP- 2 Thr/Thr基因型共显的患者,85.7%出现在 DM3组。结论 Apo -E、FABP- 2 Ala54Thr基因多态性与DN的发生有关,当Apo -E2与 FABP -2 Thr/Thr基因型共显时,可能会加重DN的病情。Apo- E2等位基因与FABP -2 Thr/Thr基因型是预测DN发生和发展有用的指标。