猪圆环病毒2型片状载体悬浮培养生产工艺研究

为了提高猪圆环病毒2型(PCV2)抗原的病毒含量,对PCV2片状载体悬浮培养生产工艺进行了试验。将PCV2接种到PK-15细胞悬液中,在转瓶上培养,第2次带毒传代后,接种到片状载体上悬浮培养,当培养液中耗糖量稳定时,换维持液,每48 h收获1次,可以连续收获5次以上,有效抗原含量比传统转瓶生产工艺提高了5~10倍。

片状载体固定化胰蛋白酶的研究

以片状载体作为固定化载体,戊二醛为交联剂,制备固定化胰蛋白酶。以固定化时间、固定化温度、固定化pH值和固定化酶质量分数对固定化效果进行评估。结果表明,在固定化时间1.5 h,固定化温度40℃,固定化pH值8.0,胰蛋白酶质量分数2%时,固定化效果最好,回收率最高。在最佳固定化条件下,固定化酶活力回收率可达46.89%,固定化胰蛋白酶表现出较好的热稳定性和酸碱稳定性。

动物细胞培养用片状载体特性分析

目的探讨不同片状载体的表面特性及对不同细胞的培养效果。方法选择3种片状载体(A、B、C),对其材料进行化学元素组成分析,对经0.1 mol/L NaOH溶液预处理前后的载体进行接触角检测。通过测定Vero、MDCK和MRC-5细胞在3种载体上的贴附效果和葡萄糖消耗量,并利用荧光染色法观察细胞生长状态,比较3种载体的细胞贴附率和培养效果。结果3种载体均主要由C、H、O 3种元素组成,且含有少量的N和S元素。预处理前,载体B的接触角为0°,显著低于载体A[(109±3.13)°]和C[(121±6.82)°](F均为709.1,P均<0.0001),亲水性较强,载体A和C亲水性较差;预处理后,3种载体表面的接触角均为0°,差异无统计学意义(F=0.0694,P>0.05),均亲水。培养3 h内,3种载体的细胞贴附率均在80%以上,细胞在载体纤维上均致密,长势均匀,葡萄糖消耗量曲线均趋于“S”型,细胞连续培养效果良好。葡萄糖消耗总量载体A与C基本一致,载体B低于A和C。结论对3种片状载体的化学元素组成和亲疏水特性关系进行了分析,并对Vero、MDCK和MRC-53种细胞的贴附率及培养效果进行了评价,为片状载体的后续研究及生产应用提供了参考。

动物细胞培养基质片状载体的研究及应用进展

以聚酯纤维为基质的片状载体具有良好的耐酸碱性、耐热性、生物相容性以及不可生物降解、促进细胞黏附和生长等优点。片状载体无动物源性成分,生物安全性高,是细胞培养基质的首选载体之一。近年来,随着生物技术的发展,广泛应用于细胞基质生物制品等研发及生产中。本文对片状载体的结构和细胞培养特点以及在疫苗生产、细胞治疗和组织工程等中的应用作一综述,为片状载体技术后续的进一步研发和应用提供理论依据。

微载体与片状载体培养MDCK-G1细胞的比较

目的比较微载体与片状载体培养MDCK-G1细胞的效果。方法在7. 5 L生物反应器中,分别使用微载体和片状载体培养MDCK-G1细胞,比较细胞的贴壁效率,并对搅拌转速、初始细胞接种密度、载体量进行优化。结果微载体最适培养条件为搅拌转速55 r/min,初始细胞接种密度3×10^5个/mL,载体量8 g/L,在此条件下最高细胞密度为(5. 03±0. 12)×10^6个/mL;片状载体最适培养条件为搅拌转速120 r/min,初始细胞接种密度2×10^5个/mL,载体量200 g,在此条件下最高细胞密度为(10. 22±0. 69)×10^6个/mL。结论片状载体能够用于MDCK-G1细胞的培养,且相对于微载体可获得更高的细胞密度,但有不易放大的缺点,作为细胞培养系统进一步开发具有很大的应用潜力。

固定床式生物反应器在293T细胞高密度培养中的应用

目的:研究悬浮和贴壁293T细胞在生物反应器内的高密度培养工艺。方法:分别在2个3.5 L固定床生物反应器中加入150 g片状载体,接种贴壁293T细胞和驯化为悬浮的293T细胞,根据葡萄糖消耗情况调整灌流量进行连续灌流培养6天。结果:贴壁293T细胞和悬浮293T细胞均能在固定床生物反应器片状载体上生长,细胞密度最终分别达到2.5×10^(7)cells/mL和2.3×10^(7)cells/mL,6天增殖约50倍。结论:固定床式生物反应可以用于贴壁和悬浮293T细胞的高密度培养。

胰蛋白酶在两种载体上的固定化效果比较

以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化最适条件大致相同,最适交联剂浓度为2%,胰蛋白酶浓度为3%,最佳交联时间为10h,交联温度和固定化温度均为10℃.纤维素微球和片状载体在相同条件下酶固载量分别达到145mg/g和112.6mg/g,活力回收率分别为17.3%和14%.两种载体相比,纤维素微球作为固定胰蛋白酶的载体效果更佳.

Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究

目的:建立一种应用于片状载体培养的Vero细胞计数方法。方法:Vero细胞于细胞瓶内培养,分别于24 h、48 h、72 h、96 h和120 h取样检测上清液中葡萄糖含量,同时消化细胞并计数。以葡萄糖累计消耗量为X轴,以细胞收获数量为Y轴,获得葡萄糖累计消耗量和细胞数量的关系方程,从而建立一种细胞计数的方法。通过计算反应器中细胞生长消耗的葡萄糖量来计算细胞数量,从而优化控制细胞生长。结果:得到葡萄糖消耗量与细胞数量线性方程为Y=4.107×10~8X;Vero细胞在反应器内培养6 d,累计消耗葡萄糖71.28 g,所获得细胞数量为2.93×10^(10)个。结论:建立了葡萄糖消耗量与细胞数量的线性关系,即每消耗1 g葡萄糖对应的细胞数量为4.107×10~8个,可作为片状载体细胞培养过程中细胞计数的参考。

应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究

应用15L生物反应器,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养、制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液,经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。采用15L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验,收获高毒力滴度的狂犬病毒收获液并制备人用冻干狂犬病疫苗。结果表明:Vero细胞在接种狂犬病毒后可以连续收获病毒液达到25d以上,冻干狂犬病疫苗的效价可以达到5.54IU/剂。本工艺可以用于进行大规模的人用冻干狂犬疫苗的生产。

动物细胞生物反应器大规模培养技术研究进展

生物反应器大规模培养技术在生物制剂领域和医学领域发挥着至关重要的作用,生物反应器大规模培养动物细胞的方法有微载体培养、片状载体培养和全悬浮培养等,与传统的动物细胞大规模培养工艺相比有明显的技术优势。本文主要分析了动物细胞生物反应器大规模培养技术的研究进展,以供参考。

篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的建立篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。方法利用7.5L篮式生物反应器和片状载体培养Vero细胞,接种乙型脑炎病毒P3V2株毒种,根据葡萄糖的消耗量,分析细胞的生长情况及调节病毒培养时的灌流速度,每24h取样,检测病毒滴度。收获的病毒液经纯化后,制备乙脑灭活疫苗,检测各项指标。结果Vero细胞培养至96h,葡萄糖消耗量达高峰,细胞密度达峰值;接种病毒后72h,葡萄糖消耗量达高峰,灌流量为7L/d,连续收获7～9d,共可收获(40±5)L病毒液;96h病毒滴度达高峰,为10.0LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到《中国药典》三部(2005版)要求。结论已建立了篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。

篮式反应器发酵PCV过程中连续收获病毒的可行性研究

应用NBS篮式细胞反应器高密度培养PK-15细胞，接种PCV病毒后，采取边补加维持液边收获病毒液的方式，最终收获相当于反应器约3倍体积的高滴度病毒抗原，生产效率明显提升，证明该工艺具备可行性。

“艺术瓜果”生产技术

目前,瓜果品种繁多,产量高,有的品种出现了“卖难”现象。因此,选择一些适宜制作字画的瓜果生产“艺术瓜果”,可以促进瓜果的销售,增加经济效益。现将生产技术及销售技艺简介如下: 一、适合制作字画的瓜果 适合制作字画的瓜果有西瓜、香瓜、沙田柚、梨等表皮光滑的大中型瓜果,而桃、李、梅、葡萄等小型水果和菠萝等表皮粗糙宜制作字画。

应用150 L篮式反应器培养Vero细胞制备脊髓灰质炎病毒的工艺

目的探索应用基于片状载体的150 L篮式反应器培养Vero细胞制备脊髓灰质炎(脊灰)病毒的工艺条件.方法按照不同的细胞接种密度,将146代Vero细胞消化传代并接种至150 L篮式反应器中,在相同条件下培养,分时间段取样后,通过检测葡萄糖含量间接监测细胞代谢情况,绘制细胞生长曲线,确定150 L篮式反应器最佳细胞接种密度及反应器最佳培养条件.在150 L篮式反应器内接种Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型Sabin株脊灰病毒培养,分别通过生化分析仪、微量细胞病变法、ELISA检测一定条件下病毒培养12~96 h的葡萄糖含量、病毒滴度、抗原含量等参数,确定病毒最佳收获时间.结果在基于片状载体的150 L篮式反应器细胞中培养Vero细胞的最佳细胞接种密度为1.5×10^(5)ml^(-1);Vero细胞葡萄糖代谢量在培养120~168 h达到峰值(≥225 g/24 h),细胞密度最高且生长状态稳定.脊灰病毒接种48 h后,随着Vero细胞病变程度的增加,葡萄糖代谢逐渐下降;各型脊灰病毒滴度和D抗原峰值均出现在72 h左右.结论确定了应用基于片状载体的150 L篮式反应器大规模制备脊灰病毒(Vero细胞)的工艺条件.

应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗

目的应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗。方法以人用狂犬病疫苗株aGV为毒种,Vero细胞为培养基质,利用14 L生物反应器(500 g片状载体置于载体篮内)灌流式培养,连续收获的病毒液经超滤浓缩、灭活、柱层析纯化后,加入冻干保护剂,制备冻干人用狂犬病疫苗,检测冻干前后及37℃放置28 d后的疫苗效价。结果细胞密度最高可达1.0×107个/ml;病毒收获液毒力为7.5×106～3.4×108 FFU/ml;纯化后总蛋白质含量小于80μg/0.5 ml,Vero细胞蛋白质残留量≤3.5μg/0.5 ml,Vero细胞DNA残留量小于100 pg/0.5 ml,疫苗效价大于5.0 IU/0.5 ml。结论应用篮式生物反应器可制备高质量的人用狂犬病疫苗。