46例非小细胞肺癌Westernblot与免疫组化神经内分泌表达的检测

目的 :探讨Western印迹法与免疫组化在非小细胞肺癌中神经内分泌 (NE)分化诊断中的价值。方法 :对4 6例非小细胞肺癌 (NSCLC)采用Western印迹法及免疫组化进行了神经特异性烯醇化酶 (NSE)、嗜铬粒素A(CgA)、突触素 (Syn)的检测。结果 :Western印迹法在非小细胞肺癌 (NSCLC)中检测NSE、CgA和Syn的阳性率分别为 6 3.0 %、6 5 .0 %、5 0 .0 % ,均高于免疫组化的阳性率 4 7.8%、2 6 .1%、34.7。Western印迹法和免疫组化的检测结果与肺癌的组织学类型和分化程度无明显关系。结论 :NSCLC中存在较高比例的神经内分泌分化。Western印迹法和免疫组化对诊断NSCLC中的神经内分泌分化均有重要帮助。

多效生长因子在牙周炎中的表达及意义

目的:研究多效生长因子(pleiotropin,PTN)在牙周炎中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学、West-ern免疫印迹方法,对雄性Wistar大鼠50只分为炎症组、恢复组和对照组分别检测PTN蛋白表达的情况。结果:PTN的阳性产物位于龈上皮、沟内上皮和结合上皮细胞胞浆中,呈棕黄色颗粒偶见胞核中亦有表达。炎症组中MK的表达主要集中于棘细胞层和颗粒细胞层,表达量为弱阳性和中强阳性。恢复组中PTN的表达主要集中于棘细胞层和基底细胞层,表达量为强阳性和中强阳性。对照组中PTN表达较少。Western免疫印迹显示PTN在炎症组和恢复组中表达有统计学意义(P<0.01)。Western免疫印迹与免疫组织化学检测结果基本一致(P<0.05)。结论:PTN同时具有致炎和促进组织修复的功能,但促进组织修复的作用更明显。

妊娠中期因子在牙周炎治疗前后的表达情况

目的:研究妊娠中期因子(midkine,MK)在牙周炎治疗前后的表达情况。方法:取雄性Wist-ar大鼠50只,随机抽取10只用于正常对照,另40只采用结扎法建立牙周炎模型后,再次分为炎症组、恢复组,炎症组不作任何处理立即处死并取材;恢复组进行牙周基础治疗,于术后6周处死,取材,应用免疫组织化学、Western免疫印迹方法分别检测MK蛋白表达的情况。结果:MK阳性产物位于牙龈上皮、沟内上皮和结合上皮细胞胞浆中,呈棕黄色颗粒,偶见胞核中亦有表达。炎症组MK的表达主要集中于棘细胞层和颗粒细胞层,表达量为弱阳性和中强阳性;恢复组中MK的表达主要集中于棘细胞层和基底细胞层,表达量为强阳性和中强阳性;对照组中MK的表达较少。Western免疫印迹显示:MK在恢复组中的表达量明显高于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05),与免疫组织化学检测结果基本一致。结论:MK同时具有致炎和促进组织修复的功能,在牙周炎治疗前以参与致炎为主,治疗后以促进组织修复为主。

survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达

目的:探讨survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化、RT-PCR和Western印迹法检测survivin和GRIM-19在正常前列腺(NP)组织、良性前列腺增生(BPH)组织和前列腺癌(PCa)组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示survivin在NP、BPH和PCa组织中的表达率分别为6.25%、18.18%和90.62%(P<0.01);GRIM-19的表达率分别为87.50%、81.82%和9.37%(P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,在NP和BPH组织未检测到survivinmRNA表达,而PCa组织可检测到survivinmRNA高表达。Western印迹结果证实,在NP和BPH组织中有微量的survivin蛋白表达;而PCa组织可检测到survivin蛋白高表达;在NP和BPH组织中GRIM-19蛋白表达强阳性,而PCa组织中只有微量表达,两者比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:survivin和GRIM-19的表达可能与PCa的发生密切相关。

肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达及临床意义

目的探讨肾细胞癌组织中Tat结合蛋白(TIP30)的表达及其临床意义。方法采用S-P免疫组织化学染色法对65例肾细胞癌组织及其癌旁组织中TIP30蛋白表达进行检测。同时采用Western印迹方法检测22例肾细胞癌及其癌旁新鲜标本中TIP30蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,TIP30蛋白阴性表达率在肾癌组中为49.2%(32/65),显著高于癌旁组织10.8%(7/65)(P<0.01)差异有统计学意义;TIP30蛋白的阴性表达在肾癌各病理类型中差异无统计学意义(P>0.05);TIP30蛋白在肾细胞癌中的阴性表达与浸润程度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)以及肾静脉癌栓有关(P<0.05)。Western印迹结果显示在77.3%(17/22)的肾细胞癌组织中有TIP30蛋白低表达。结论TIP30蛋白的阴性表达与肾细胞癌发生、发展有关;作为抑癌基因产物,TIP30蛋白可在蛋白质水平为临床估计病情及预后提供一个有意义的客观指标。

地奥司明对肾缺血/再灌注大鼠肾组织PECAM-1表达的影响

目的观察地奥司明(diosmin,DOSM)对肾缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠肾组织PECAM-1表达水平的影响,并探讨其对肾脏的保护机制。方法 150只SD大鼠随机分成3组:假手术(sham operation,SO)组、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。在再灌注不同时间点分别采用免疫组化及Western免疫印迹方法测定肾脏组织中PECAM-1的表达水平。结果在1 h、6 h、12 h、24 h和48 h不同时间点的肾组织中,I/R和DOSM+I/R两组PECAM-1的表达水平均随时间逐渐上调,并于48 h达最高。而在DOSM组显著低于I/R组(P<0.05或P<0.01)。Western免疫印迹与免疫组织化学检测结果基本一致。结论 DOSM可显著降低肾I/R病理过程中PECAM-1的表达,有助于减轻I/R时炎性细胞的浸润,从而减轻缺血再灌注损伤,保护肾功能。

健胎液对小鼠着床期子宫内膜孕激素受体及mRNA的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫孕激素受体(PR)的影响。方法:将受孕小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,采用米非司酮诱导小鼠胚泡着床障碍,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,观察子宫内膜形态学变化,采用免疫组化技术检测子宫 PR 的表达,Western 印迹和 RT-PCR 技术检测子宫 PR 及 PR mRNA 表达。结果:模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;中药组子宫内膜腺体、间质 PR 表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无显著性差异(P>0.05);中药组 PR 蛋白及基因表达均较模型组显著提高(P<0.05),与正常组无显著性差异(P>0.05)。结论:健胎液通过调节胚泡着床障碍小鼠子宫 PR 及 mRNA 的表达,促进子宫内膜发育,改善胚泡着床。

磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白_1在糖尿病大鼠肾小球中表达增强

目的探讨磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白1(P CREB1)在糖尿病大鼠肾组织中的表达特征及与细胞外基质积聚的关系。方法雄性Wistar大鼠切除右肾2周后随机分为对照组和糖尿病组,用链脲佐菌素复制糖尿病模型。分别于1、2、4、8和12周用免疫组化检测纤维黏连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及P CREB1的表达,Western印迹和RT PCR检测肾皮质CREB1磷酸化(活性)及mRNA的表达。结果糖尿病组FN与LN在4周时开始升高,并持续到12周。CREB1的活性及其mRNA在2、4和8周增高,在12周时降至正常。结论CREB1可能在糖尿病肾病细胞外基质积聚中发挥一定作用。

MCP-1 mRNA及其蛋白在尖锐湿疣表皮中的表达

目的:从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣表皮中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,探讨其在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制的作用。方法:采用原位杂交、免疫组化和Western免疫印迹的方法,检测30例尖锐湿疣表皮及20例正常包皮表皮中MCP-1 mRNA及其蛋白的表达水平。结果:MCP-1 mRNA及其蛋白表达部位主要在表皮基底层。MCP-1 mRNA在尖锐湿疣皮损组和对照组中原位杂交染色阳性单位值分别为10.7±5.1和11.2±4.6,差异无统计学意义(t=-8.70,P>0.05);MCP-1蛋白在尖锐湿疣皮损组和对照组中免疫组化染色阳性单位值分别为10.9±5.1和11.5±4.9,差异无统计学意义(t=-0.981,P>0.05);Western免疫检测结果显示尖锐湿疣皮损组和对照组表达的结合珠蛋白平均光密度值分别为0.18±0.06和0.20±0.06,两者差异无统计学意义(t=-0.721,P>0.05)。结论:尖锐湿疣患者皮损MCP-1无论是其mRNA水平还是蛋白水平均表达微弱,可能是导致尖锐湿疣免疫微环境异常的原因之一。

Ephrin-B2在人胶质瘤中的表达及意义

目的探讨Ephrin-B2基因在人胶质瘤中的表达规律及意义。方法分别用免疫组织化学和Western印迹法检测4例正常脑组织和21例人脑胶质瘤中Ephrin-B2基因的表达。结果Western印迹法检测显示,人正常脑组织中未见Ephrin-B2基因明显表达不同病理级别胶质瘤组织均有不同程度,Ephrin-B2蛋白表达,Ⅲ级、Ⅳ级表达较强,分别与Ⅰ、Ⅱ级比较,差异均有显著性(P<0.01),Ⅲ级与Ⅳ级之间以及Ⅰ与Ⅱ级之间比较,差异无显著性(P>0.05)。免疫组化检测显示,Ephrin-B2蛋白除在肿瘤细胞中有表达外在各级别胶质瘤中血管内皮细胞表达呈强阳性结论。Ephrin-B2在胶质瘤发生、发展和血管生成中可能有重要作用。

PI3K/AKT信号通路与骨肉瘤组织中脂肪酸合成酶过表达的相关性

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)与骨肉瘤组织中脂肪酸合成酶(FASN)过表达的相关性。方法采用免疫组化方法及Western印迹法检测30例骨肉瘤组织及30例骨巨细胞瘤组织中AKT,FASN的表达,并分析AKT,FASN与骨肉瘤临床病理特征的关系及二者的相关性。结果免疫组化结果显示,AKT在骨肉瘤中的阳性表达率为70%(21/30),显著高于骨巨细胞瘤中的表达[26.66%(8/30),P<0.05]。FASN在骨肉瘤中的阳性表达率为56.67%(17/30),显著高于骨巨细胞瘤中的表达[20%(6/30),P<0.05]。Western印迹结果显示,AKT在骨肉瘤组织中的相对表达量为(0.861±0.072),显著高于骨巨细胞瘤组织中的表达[(0.127±0.008),P<0.05],FASN在骨肉瘤中的相对表达量为(0.827±0.059),显著高于骨巨细胞瘤组织中的表达[(0.218±0.012),P<0.05]。AKT的表达与软组织浸润及转移密切相关(P<0.05),FASN的表达与软组织浸润相关(P<0.05)。AKT,FASN的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论 AKT的表达与软组织浸润及转移密切相关,FASN的表达与软组织浸润相关,且均在骨肉瘤中表达上调,提示两种基因可能与骨肉瘤的发生发展有关。

结直肠癌中HMGA2表达的意义与微卫星不稳定性的关系

目的探讨高迁移率族蛋白(HMG) A2在结直肠癌组织中表达意义及与微卫星不稳定性(MSI)的关系。方法结直肠癌手术标本70例,采用免疫组化法检测微卫星不稳定四种相关蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2及HMGA2的表达情况,分为高频微卫星不稳定组(MSI-H)、低频微卫星不稳定(MSI-L)/微卫星稳定组(MSS)两组,研究HMGA2与MSI的相关性及与结直肠癌临床特征之间的关系,进一步用Western印迹法验证免疫组化结果。结果结直肠癌中HMGA2阳性率为65. 71%(46/70),与正常肠黏膜相比差异显著(P<0. 001),低分化癌组高于中、高分化癌组,差异有意义(P<0. 05); TNMⅢ+Ⅳ期明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0. 05)。MSI-H发生率为17. 14%(12/70),右半结肠发生率高于左半结肠(P<0. 05),此外,MSI-H发生与患者年龄、肿瘤分化程度有关(P<0. 05)。MSI-H组、MSI-L/MSS组中HMGA2的表达差异无统计学意义(P>0. 05)。结论HMGA2高表达可能促进结直肠癌的发生与发展,作用机制与微卫星状态无关,需要进一步研究。

原发性肝细胞癌中EphA7蛋白的表达及其临床意义

目的探讨酪氨酸蛋白激酶EphA7蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化和Westernblot方法检测EphA7蛋白在40例原发性肝细胞癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达情况，并分析其与原发性肝细胞癌的临床病理因素之间的关系。结果EphA7蛋白的表达主要位于原发性肝细胞癌细胞或肝细胞的胞质，以及纤维间隔内的血管内皮细胞。原发性肝细胞癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中均有EphA7蛋白的表达，Westernblot分析结果显示EphA7蛋白在肝细胞癌组织（0．58±0．26）中的表达水平高于癌旁肝组织（0．40±0．22，P〈0．05）和正常肝组织（0．32±0．16，P〈0．05），而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）；EphA7蛋白的表达水平与原发性肝细胞癌细胞的分化程度、门静脉癌栓、淋巴结转移和甲胎蛋白水平等临床病理因素相关（P〈0．05）。结论EphA7蛋白的表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关，可能在原发性肝细胞癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用。

替米沙坦对糖尿病大鼠肾小球表达整合素α3β1的影响

目的观察整合素α3β1在糖尿病大鼠肾小球的表达以及替米沙坦对其影响。方法制备糖尿病大鼠模型,随机将动物分为糖尿病组、治疗组,另设对照组。治疗组给予替米沙坦3mg·kg--·d-1。6周后,检测各组24h尿白蛋白定量、肌酐清除率、血糖、血胰岛素、血压、肾重/体重;免疫组化法检测肾小球整合素α3β1表达部位及表达水平。分离肾小球,Western印迹法检测肾小球整合素α3β1蛋白表达水平。RT-PCR检测肾小球TGF-β1mRNA的表达。光镜下观察肾组织病理改变;电镜下观察肾组织超微结构变化。结果免疫组化结果显示,正常大鼠整合素α3β1主要沿肾小球血管袢呈线性表达,系膜区有少量表达。糖尿病组肾小球整合素α3β1表达比正常对照组明显减弱;替米沙坦治疗组整合素α3β1表达较糖尿病组明显增加,24h尿白蛋白定量及其它肾功能指标以及病理改变明显改善,血压无明显变化,肾小球TGF-β1mRNA表达比糖尿病组显著下降。结论替米沙坦可以减少糖尿病肾病大鼠早期的尿蛋白,改善病理变化,保护肾功能,其作用机制可能部分通过减少TGF-β1表达,上调整合素α3β1表达而实现。

血管紧张素Ⅰ型受体反义寡核苷酸对大鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统的阻断作用

目的 研究血管紧张素Ⅰ型受体(AT1)反义(AS)寡核苷酸(ODN)对大鼠肾脏局 部肾素-血管紧张素系统(RAS)的阻断作用。方法 采用单侧肾动脉注射+原位电穿孔的方法, 将AT1 AS-ODN导入到Wistar大鼠的一侧肾脏,观察以FITC荧光标记的ODN在肾脏的转移位 置,以AT1放射自显影定量分析的方法观察转移基因的时间-效应曲线。在基因转移3d后以 RT-PCR、Western印迹及免疫组织化学方法检测肾脏AT1的mRNA和蛋白表达与分布,并与正 义(Sen)ODN转移、假注射+肾脏原位电穿孔(Sham)作为对照。结果FITC标记的ODN在基因 转移10 min后主要定位于转移侧肾脏的肾小球,而对侧肾脏FITC荧光阴性。AT1放射自显影定 量分析显示在基因转移后的3 d内,结合有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的AT1较未转移的对侧肾脏 减少约70％。AT1 AS-ODN基因转移后3 d,转移侧肾脏AT1 mRNA水平较对侧肾脏下降约 43％,蛋白水平下降约67％,而与AT1 Sen-ODN和Sham组转移侧肾脏比较,AT1的mRNA水平 下降分别约47％和51％,蛋白水平下降分别约63％和71％。免疫组化检查发现AT1的阻断以系 膜区的表达减少为主。结论 本研究所用的单侧肾动脉注射+原位电穿孔的基因转移方法成功 地抑制了单侧肾脏的肾小球AT1受体的表达,为研究全身性疾病肾损害中肾脏局部RAS的短

人宫颈癌基因在胃癌中的表达及其意义

目的探讨人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)在人胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其与临床病理特征的关系,初步评价HCCR在胃癌发生中的作用及其意义,为寻找胃癌新的诊断标志物另辟新径。方法采用Western blot方法检测SGC-7901、BGC-823胃癌细胞系中HCCR蛋白表达;采用免疫组化法检测30例胃癌患者的癌组织和10例癌旁正常组织中HCCR蛋白表达。结果HCCR蛋白在两种不同分化程度的胃癌细胞株中均有阳性表达;胃癌组织中HCCR阳性表达率为73.3%(22/30),其表达位于细胞的胞膜和胞质,10例癌旁正常组织均为阴性表达,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。HCCR的表达与胃癌患者的年龄、性别、浸润深度、组织分型、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移均无显著相关性(P>0.05)。结论HCCR与胃癌的发生密切相关,可能是反映早期胃癌发生的重要生物学指标之一。

卵巢上皮性肿瘤黑色素瘤细胞黏附因子的表达与微血管密度和临床病理特征的关系

目的探讨卵巢上皮性肿瘤黑色素瘤细胞黏附因子(melanoma cell adhesion molecule,M-CAM)的表达与微血管密度(microvessel density,MVD)和临床病理特征之间的关系。方法 2007年1月至2008年1月在重庆医科大学附属第一医院应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、免疫组化检测8例正常卵巢组织、16例卵巢良性上皮性肿瘤(以下简称卵巢良性肿瘤)、40例卵巢上皮性癌(以下简称卵巢癌)组织及20例大网膜转移灶中M-CAM的表达。用CD34标记免疫组化法检测MVD。结果 M-CAM mRNA在卵巢癌细胞可见明显扩增条带,M-CAM mRNA表达值在癌组织和大网膜转移灶中高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织(P<0.05)。Westernblot显示M-CAM蛋白在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢癌组织、大网膜转移灶中M-CAM蛋白的表达值分别为0.314±0.162、0.349±0.135、0.603±0.093、0.636±0.102。免疫组化显示卵巢癌组织的MVD为42.53±8.15,卵巢良性肿瘤的MVD值为20.42±6.07,两者差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌组织中M-CAM阳性表达组的MVD高于M-CAM阴性表达组。M-CAM蛋白高表达与卵巢癌临床分期、淋巴结转移有关,而与年龄、病理类型、有无腹水、CA125水平等无关。结论 M-CAM的表达不仅与卵巢肿瘤的良、恶性有关,而且与卵巢癌的进展、转移有关;与卵巢癌血管形成有关。

HLA-Ⅱ类抗原在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

目的 检测人类白细胞分化抗原-Ⅱ（human leukocyte antigen-Ⅱ）HLA-Ⅱ类抗原在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其与甲状腺乳头状癌发病的关系,为进一步的预防及治疗奠定基础.方法 应用Western印迹和免疫组化SP法检测20例甲状腺乳头状癌组织及其癌旁正常甲状腺组织中HLA-Ⅱ类抗原的表达.结果 Western印迹和免疫组化结果均显示HLA-Ⅱ类抗原在甲状腺癌乳头状组织和正常甲状腺组织中都有表达,且Western印迹结果显示前者的表达高于后者,差异具有统计学意义（P〈0.05）.结论 HLA-Ⅱ类抗原可能在甲状腺乳头状癌免疫逃逸机制中发挥重要作用.