MCP-1和ICAM-1在大鼠实验性牙周炎牙周纤维中的表达

目的:观察大鼠实验性牙周炎牙周纤维病变过程中MCP-1和ICAM-1的表达与分布。方法:选取24只3月龄健康SD大鼠,随机等分为4组(1个正常对照组和3个实验组,每组6只),正常对照组不作任何处理,3个实验组通过丝线结扎上颌左右第二磨牙牙颈部,并配合牙周炎食谱及接种Pg的方式建立牙周炎模型,分别于建模后2(P1)、4(P2)、6(P3)周处死各组大鼠,取实验部位组织块,用免疫组织化学染色法检测MCP-1和ICAM-1的表达与分布。结果:P1、P2、P3各实验组MCP-1和ICAM-1的表达水平均较正常对照组明显增多,差异有显著性(P<0.05)。其中P2组表达水平最高,与其他2组相比有统计学意义(P<0.05);P3组有所下降,与P1相比无明显性差异(P≥0.05)。结论:MCP-1和ICAM-1共同参与牙周纤维组织的炎症过程,其表达随时间呈现一定规律。

牙龈卟啉菌内毒素诱导人牙周纤维细胞释放细胞因子的实验研究

目的：研究牙龈卟啉菌内毒素诱导人牙周纤维细胞释放白细胞介素６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的影响。方法：放射免疫检测法。结果：表明人牙周纤维细胞在牙龈卟啉菌内毒素作用下释放ＩＬ－６，而不能释放ＴＮＦ。

GRP78-c-Src信号通路介导周期性牵张力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制研究

目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GRP78低表达细胞;采用基因转染技术敲减GRP78、c-Src的表达以及过表达c-Src;蛋白质印迹实验检测成骨转录因子Runt相关基因2(RUNX2)、锌指结构转录因子(Osterix)以及成骨标志蛋白骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达;免疫共沉淀实验检测GRP78与c-Src激酶的相互作用;茜素红染色实验检测细胞矿化结节的形成。结果GRP78在牙周膜成纤维细胞呈异质性表达,流式分选实验获得GRP78高表达和GRP78低表达细胞。周期性牵张力处理后,与GRP78低表达细胞相比,GRP78高表达细胞成骨分化能力及c-Src激酶磷酸化水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);GRP78与c-Src激酶存在相互作用;与对照组相比,过表达c-Src组细胞成骨分化能力升高(P<0.05),sic-Src组细胞成骨分化能力降低(P<0.05)。结论GRP78通过与c-Src激酶相互作用并上调其表达,进而促进周期性牵张力诱导的牙周膜成纤维细胞成骨分化。

利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和炎症反应的影响

目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)迁移、增殖和炎症反应的影响。方法体外培养牙周膜成纤维细胞,根据培养液成分设置为低糖对照组(L组,含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、低糖给药组(L+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)和高糖给药组(H+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)。采用CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室测定细胞迁移能力,应用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western blot法测定牙周膜成纤维细胞中Bax、Bcl-2表达水平,采用酶联免疫吸附法检测牙周膜成纤维细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、C反应蛋白(CRP)的表达水平。结果与L组相比,H组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移数量、胞内Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平升高(P<0.05)。H+G组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移细胞数量、胞内Bcl-2蛋白水平显著高于H组(P<0.05);而细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平则低于H组(P<0.05)。结论利拉鲁肽能够抑制高糖诱导的牙周膜成纤维细胞凋亡,通过调控Bax/Bcl-2表达和降低炎症反应,从而促进牙周组织愈合修复。

没食子水提物对人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微镜观察没食子水提物粉末的微观特征。采用MTT法检测细胞活力,XTT法检测细胞增殖水平,以划痕伤口愈合迁移试验考察细胞迁移情况,采用酶联免疫吸试验(ELISA)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 没食子水提物粉末大体检查及显微特征明显。没食子组细胞活力显著高于其他组(P <0.05)。给药后第3,5,7天,没食子组HPDLF增殖水平显著高于其他组(P <0.05)。与阴性对照组比较,没食子组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P <0.05)。没食子组细胞24 h划痕伤口几乎完全闭合。结论 没食子水提物可减轻HPDLF相关炎性反应。

高强纤维牙周夹板联合甲硝唑药膜治疗老年中重度牙周病疗效分析

目的:探讨高强纤维牙周夹板联合甲硝唑药膜对老年中重度牙周病牙周健康状况及牙齿美观满意度的影响。方法:选取2019年6月-2021年12月笔者医院老年中重度牙周病患者112例进行前瞻性随机对照研究,根据治疗方法的不同分为研究组(n=56)、对照组(n=56)。两组均给予基础治疗,在此基础上,对照组予以尼龙丝结扎,每周复诊1次,同时联合甲硝唑药膜治疗;研究组予以高强纤维牙周夹板治疗,每周复诊1次,在牙周袋内置入甲硝唑药膜。治疗后随访3个月,比较两组疗效、牙齿美观满意度与治疗前、治疗后3个月牙周指标[牙周袋深度(Periodontalpocketdepth,PD)、牙龈出血指数(Sulcusbleedingindex,SBI)、菌斑指数(Plaqueindex,PLI)]、龈沟液炎症因子指标[降钙素原(Procaicltonin,PCT)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α,TNF-α)]水平、咀嚼功能(咀嚼效率、咬合力)、老年人口腔健康生活质量评分(Geriatricoralhealthassessment index,GOHAI)。结果:治疗后3个月,研究组总有效率(94.64%)高于对照组(82.14%)(P<0.05);两组PD、SBI、PLI水平均较治疗前降低,且研究组低于对照组(P<0.05);两组龈沟液PCT、IL-1β、TNF-α水平均较治疗前降低,且研究组低于对照组(P<0.05)。研究组咀嚼效率、咬合力均高于对照组(P<0.05);研究组GOHAI评分低于对照组(P<0.05);研究组牙齿美观满意度高于对照组(P<0.05)。结论:高强纤维牙周夹板联合甲硝唑药膜治疗老年中重度牙周病,效果显著,可有效降低牙周炎症反应,改善牙周状况,增强咀嚼功能,从而进一步提高口腔健康质量,提升牙齿美观满意度。

胶原蛋白肽对人牙周膜成纤维细胞损伤的保护作用

文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能有效降低TLR4和NF-κB的表达量,对炎症因子的分泌产生明显的影响。作用机理可能是,CP作为一种信号分子作用于TLR4,通过抑制TLR4和NF-κB的表达来抑制LPS引起的炎症反应,从而促进hPDLFs增殖。

黄芪多糖调控AMPK⁃mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响

目的探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法原代培养HPLF细胞;免疫组织化学法鉴定HPLF细胞;设置对照组、0.1 mg·mL^(-1)组(0.1 mg·mL^(-1) APS)、0.2 mg·mL^(-1)组(0.2 mg·mL^(-1) APS)、0.4 mg·mL^(-1)组(0.4 mg·mL^(-1) APS),细胞增殖及毒性(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况;Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比细胞增殖抑制率与凋亡率则明显增多。与对照组相比,0.1 mg·mL^(-1)和0.2 mg·mL^(-1) APS显著抑制细胞自噬,而0.4 mg·mL^(-1) APS则促进细胞自噬;与对照组相比,Beclin⁃1、LC3⁃Ⅱ/LC3⁃Ⅰ、半胱氨酸蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)、bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、p⁃AMPK/AMPK在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比表达水平则显著增加;p62、survivin、Bcl⁃2、p⁃mTORC1/mTORC1表达水平与其呈现相反趋势。结论APS具有促进HPLF细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用,并可能通过调节AMPK⁃mTORC1通路抑制细胞自噬的发生。

bFGF对牙周膜成纤维细胞与骨髓间充质干细胞共育影响的体外研究

目的探讨碱性成纤维细胞(重组人型)生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)共育条件下BMSCs向PDLFs分化的影响。方法体外培养大鼠BMSCs和PDLFs,并进行细胞鉴定。采用Millicell悬挂式细胞共育室建立BMSCs/PDLFs间接共培养模型。将实验分为5组:阴性对照组(单独BMSCs组);阳性对照组(单独PDLFs组);实验组:0 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组、1 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组和10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组。在细胞共育的第3天、第5天和第7天进行ALP活性测定。培育至2 w后,停止共育,RT-PCR法监测各组细胞的骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,COLⅢ)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和金属蛋白酶1(metalloproteinase 1,ADAMTS1)的mRNA含量。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果ALP活性测定显示第3天、第5天和第7天共培养后,在各个时间点,各实验组与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示阴性对照组与其余4组的OCN和OPN mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),后4组之间差异无统计学意义(P>0.05);单独BMSCs组与其余4组的COLⅢ和ADAMTS1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),其中10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组的COLⅢ、ADAMTS1 mRNA表达量高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF能诱导BMSCs向PDLFs分化,高浓度组(10 ng/mL)bFGF的诱导效果优于低浓度组(1 ng/mL)。

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200μmol/L及400μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF48h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和超微结构影响的实验研究

目的:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPLFS),观察缺氧对其生长增殖能力的影响。方法:分离培养HPLFS,随机分为21%O2对照组和10%、5%、2%O2缺氧组,采用四唑盐(MTT)比色法检测HPLFS增殖情况,透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果:MTT法检测,与对照组比,12h、24h,缺氧对细胞增殖随缺氧程度呈依赖性增强,但重度缺氧(2%O2)24h组具有统计学差异;48h、72h,重度缺氧组细胞增殖与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义。透射电镜下,重度缺氧24h细胞胞质内粗面内质网和线粒体明显增多,细胞突起增多;72h细胞发生退变,溶酶体增多。结论:长期重度缺氧条件下,牙周膜的改建和修复功能降低,可能是高原牙周疾病多发、牙周组织破坏较重的重要原因。

富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞的增殖、迁移和分化的影响

目的:体外研究不同浓度的富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对牙周膜成纤维细胞(periodontal ligamentfibroblasts,PDLFs)的增殖、迁移和分化的影响。方法:不同浓度PRP(10,50,100,200,300,500ml/L),加入到原代培养的人PDLFs,培养时间为3、5、7d,MTT法测定细胞增殖效果,transwell系统测定细胞迁移效果,AKP试剂盒测定碱性磷酸酶活性。结果:PRP有明显促进增殖作用,以200ml/L浓度PRP效果最好,更高浓度促进作用反而减低。细胞迁移效果中,各浓度组均比阴性对照组效果好,尤其是100ml/L的效果最佳。对于碱性磷酸酶活性,也具有明显的促进作用,以300ml/L的效果最佳。结论:PRP在一定浓度范围内对人PDLFs功能有明显促进效果,但是在更高浓度下,这种促进效果反而减低。

氯化钴化学模拟低氧对牙周膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究低氧对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)的增殖及低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Caspase-3表达的影响。方法:采用二氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟低氧作用于人PDLCs,用MTT法检测人PDLCs的活力,并通过荧光定量PCR和Western印迹观察低氧处理后人PDLCs中HIF-1α和Caspase-3的表达变化。采用SAS6.12软件包对所得数据进行统计学分析。结果:低氧使人PDLCs存活率降低,并呈浓度和时间依赖;低氧促进HIF-1α蛋白的表达,而HIF-1α mRNA的水平未见影响(P>0.05);低氧使Caspase-3 mRNA及Caspase-3蛋白表达均上调。结论:低氧抑制人PDLCs增殖,这与低氧诱导HIF-1α表达,促进细胞凋亡有关。提示低氧在牙周炎发生和发展中起一定调控作用。

间歇性机械牵张力对人牙周膜成纤维细胞增殖动力学的影响

目的观察间歇性机械牵张力作用下,人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖动力学的变化,探究机械力介导的牙周组织改建的可能机制.方法体外培养hPDLFs,取第4～7代细胞,通过四点弯曲细胞力学加载仪对细胞加载不同力值大小的间歇性机械牵张力(1 000,2 000,3 000 μstrain),分别在不同时间点收集细胞,流式细胞仪测定细胞DNA含量,计算增殖指数(PI).结果机械牵张力影响hPDLFs增殖活性.1 000 μstrain和2 000 μstrain机械牵张力组与对照组相比,均能促进细胞增殖,hPDLFs DNA含量增多(P＜0.05),增殖指数升高(P＜0.05);3 000 μstrain机械牵张力组与对照组比较,增殖指数无差异(P＞0.05),但抑制细胞DNA合成(P＜0.05).结论一定力值范围的机械牵张力能促进hPDLFs的增殖活性,过大力值的机械牵张力反而抑制细胞增殖.

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的 :探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法 :分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察 ,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果 :消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短 ,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论 :组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形 。

中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖(LPS)抑制人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响,并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐(MTT)比色试验和透射电子显微镜技术(TEM)。结果LPS浓度为100μg/ml时明显抑制细胞活性,同时加入LPS和黄芩苷后,细胞活性明显增强(P<0.05)。100μg/mlLPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤,特别是线粒体损伤严重,同时加入LPS和黄芩苷(10μg/ml)后,与LPS组比较,超微结构损伤减轻,细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖,对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用,其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同程度缺氧对人牙周膜成纤维细胞(HPLFS)增殖、分化的影响。方法:随机将HPLFS分为4组:210mL/LO2对照组、100、50、20mL/LO2缺氧组(轻中重缺氧组),用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒分别检测HPLFS的增殖和碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:第24小时,重度缺氧可促进HPLFS细胞增殖,第48、72小时,重度缺氧则明显抑制了细胞增殖;中、重度缺氧对细胞碱性磷酸酶活性表达随缺氧时间则明显受到抑制。结论:缺氧时间、程度对HPDLFs增殖和ALP活性表达存在效应关系,长期中、重度缺氧不利HPLFS的生长及向成骨分化能力,提示牙周组织改建修复功能降低。

尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的实验研究

目的:了解在体外培养环境中,尼古丁对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响。方法:将尼古丁作用于培养至第6代的人牙周膜成纤维细胞后,通过四唑盐比色法、流式细胞仪研究尼古丁能否诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡。结果:四唑盐比色法证实当尼古丁浓度在0.05～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的抑制呈浓度依赖性,流式细胞仪分析提示,当尼古丁浓度在0.5～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的凋亡率呈浓度依赖性。结论:尼古丁对人牙周膜成纤维细胞有一定的毒性作用,通过抑制牙周膜成纤维细胞增殖和诱导凋亡加重对周膜的破坏。

中药黄芩苷对脂多糖刺激人牙周膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的研究中药黄芩苷对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法采用原代培养HPLFs技术和酶联免疫检测方法(ELISA),检测培养上清液中TNF-α的水平。结果0．001～10μg／ml黄芩苷和2μg／ml地塞米松均可显著抑制LPS刺激HPLFs分泌TNF-α的活性(P＜0．01),而不同浓度组之间比较,抑制作用无显著性差异(P＞0．05)。结论黄芩苷对LPS刺激HPLFs合成和分泌TNF-α有显著抑制作用,与地塞米松抗炎效果相近,作用机制与抑制TNF-α等炎性细胞因子过度产生有关,揭示了黄芩苷可能的抗炎作用机制。