GRP78-c-Src信号通路介导周期性牵张力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制研究

目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GRP78低表达细胞;采用基因转染技术敲减GRP78、c-Src的表达以及过表达c-Src;蛋白质印迹实验检测成骨转录因子Runt相关基因2(RUNX2)、锌指结构转录因子(Osterix)以及成骨标志蛋白骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达;免疫共沉淀实验检测GRP78与c-Src激酶的相互作用;茜素红染色实验检测细胞矿化结节的形成。结果GRP78在牙周膜成纤维细胞呈异质性表达,流式分选实验获得GRP78高表达和GRP78低表达细胞。周期性牵张力处理后,与GRP78低表达细胞相比,GRP78高表达细胞成骨分化能力及c-Src激酶磷酸化水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);GRP78与c-Src激酶存在相互作用;与对照组相比,过表达c-Src组细胞成骨分化能力升高(P<0.05),sic-Src组细胞成骨分化能力降低(P<0.05)。结论GRP78通过与c-Src激酶相互作用并上调其表达,进而促进周期性牵张力诱导的牙周膜成纤维细胞成骨分化。

利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和炎症反应的影响

目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)迁移、增殖和炎症反应的影响。方法体外培养牙周膜成纤维细胞,根据培养液成分设置为低糖对照组(L组,含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、低糖给药组(L+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)和高糖给药组(H+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)。采用CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室测定细胞迁移能力,应用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western blot法测定牙周膜成纤维细胞中Bax、Bcl-2表达水平,采用酶联免疫吸附法检测牙周膜成纤维细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、C反应蛋白(CRP)的表达水平。结果与L组相比,H组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移数量、胞内Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平升高(P<0.05)。H+G组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移细胞数量、胞内Bcl-2蛋白水平显著高于H组(P<0.05);而细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平则低于H组(P<0.05)。结论利拉鲁肽能够抑制高糖诱导的牙周膜成纤维细胞凋亡,通过调控Bax/Bcl-2表达和降低炎症反应,从而促进牙周组织愈合修复。

没食子水提物对人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微镜观察没食子水提物粉末的微观特征。采用MTT法检测细胞活力,XTT法检测细胞增殖水平,以划痕伤口愈合迁移试验考察细胞迁移情况,采用酶联免疫吸试验(ELISA)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 没食子水提物粉末大体检查及显微特征明显。没食子组细胞活力显著高于其他组(P <0.05)。给药后第3,5,7天,没食子组HPDLF增殖水平显著高于其他组(P <0.05)。与阴性对照组比较,没食子组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P <0.05)。没食子组细胞24 h划痕伤口几乎完全闭合。结论 没食子水提物可减轻HPDLF相关炎性反应。

bFGF对牙周膜成纤维细胞与骨髓间充质干细胞共育影响的体外研究

目的探讨碱性成纤维细胞(重组人型)生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)共育条件下BMSCs向PDLFs分化的影响。方法体外培养大鼠BMSCs和PDLFs,并进行细胞鉴定。采用Millicell悬挂式细胞共育室建立BMSCs/PDLFs间接共培养模型。将实验分为5组:阴性对照组(单独BMSCs组);阳性对照组(单独PDLFs组);实验组:0 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组、1 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组和10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组。在细胞共育的第3天、第5天和第7天进行ALP活性测定。培育至2 w后,停止共育,RT-PCR法监测各组细胞的骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,COLⅢ)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和金属蛋白酶1(metalloproteinase 1,ADAMTS1)的mRNA含量。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果ALP活性测定显示第3天、第5天和第7天共培养后,在各个时间点,各实验组与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示阴性对照组与其余4组的OCN和OPN mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),后4组之间差异无统计学意义(P>0.05);单独BMSCs组与其余4组的COLⅢ和ADAMTS1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),其中10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组的COLⅢ、ADAMTS1 mRNA表达量高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF能诱导BMSCs向PDLFs分化,高浓度组(10 ng/mL)bFGF的诱导效果优于低浓度组(1 ng/mL)。

黄芪多糖调控AMPK⁃mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响

目的探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法原代培养HPLF细胞;免疫组织化学法鉴定HPLF细胞;设置对照组、0.1 mg·mL^(-1)组(0.1 mg·mL^(-1) APS)、0.2 mg·mL^(-1)组(0.2 mg·mL^(-1) APS)、0.4 mg·mL^(-1)组(0.4 mg·mL^(-1) APS),细胞增殖及毒性(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况;Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比细胞增殖抑制率与凋亡率则明显增多。与对照组相比,0.1 mg·mL^(-1)和0.2 mg·mL^(-1) APS显著抑制细胞自噬,而0.4 mg·mL^(-1) APS则促进细胞自噬;与对照组相比,Beclin⁃1、LC3⁃Ⅱ/LC3⁃Ⅰ、半胱氨酸蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)、bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、p⁃AMPK/AMPK在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比表达水平则显著增加;p62、survivin、Bcl⁃2、p⁃mTORC1/mTORC1表达水平与其呈现相反趋势。结论APS具有促进HPLF细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用,并可能通过调节AMPK⁃mTORC1通路抑制细胞自噬的发生。

胶原蛋白肽对人牙周膜成纤维细胞损伤的保护作用

文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能有效降低TLR4和NF-κB的表达量,对炎症因子的分泌产生明显的影响。作用机理可能是,CP作为一种信号分子作用于TLR4,通过抑制TLR4和NF-κB的表达来抑制LPS引起的炎症反应,从而促进hPDLFs增殖。

EPA对P.gingivalis LPS诱导人牙周膜成纤维细胞炎症反应的影响

目的:分析二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid,EPA)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)分泌炎症因子的作用。方法:利用组织块法培养hPDLCs,MTT法检测不同浓度EPA对hPDLCs细胞活性的影响。根据MTT结果选择合适的EPA浓度,分别采用实时定量PCR和ELISA法检测EPA对P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、IL-8和IL-1β能力的影响,采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:25~100μmol/L EPA对hPDLCs细胞活性无影响,但可呈剂量依赖性下调P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌IL-6、IL-8和IL-1β的能力。结论:EPA有望在不影响细胞活性的情况下,抑制P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌炎症因子的能力,EPA可能成为牙周炎抗炎治疗的潜在靶点。

沉默Foxp3对牙周膜成纤维细胞在炎症环境下炎症因子的表达及增殖和迁移的影响

目的探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法使用小干扰RNA(siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)实验验证Foxp3沉默效率,筛选Foxp3基因沉默效果最佳的siRNA。使用牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)来源脂多糖(LPS)模拟体外炎症环境,CCK-8检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs增殖的影响;划痕实验及transwell细胞迁移实验检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs迁移的影响;RT-PCR、Western blotting实验检测炎症环境下hPDLFs炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8的表达。结果siRNA转染后,RT-PCR、Western blotting检测显示,Foxp3-si3组Foxp3的mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA表达,t=21.03,P<0.0001;蛋白表达,t=12.8,P<0.001)。在炎症环境下,Foxp3基因沉默对hPDLFs的增殖无显著影响(P>0.05);Foxp3基因沉默促进hPDLFs的迁移,IL-6、IL-8的表达升高(P<0.05)。结论在炎症环境下,Foxp3基因沉默可促进hPDLFs迁移和炎症因子表达升高,但对hPDLFs的增殖无明显影响。Foxp3基因在牙周炎中具有抑制炎症的作用。

TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。

在牙周膜成纤维细胞中过表达LncRNA-KAT7可抑制脂多糖诱导的炎症因子IL-17的表达

目的:探讨在牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中上调LncRNA-KAT7对脂多糖诱(LPS)诱导的白介素-17(IL-17)表达的影响。方法:纳入慢性牙周炎患者24例,健康志愿者17例为对照组。采集实验组和对照组的临床数据并采用qRT-PCR检测两组牙龈组织中LncRNA-KAT7和IL-17的表达水平,分析两者之间的相关性;分离培养hPDLFs,检测不同来源的hPDLFs中LncRNA-KAT7和IL-17的表达;使用LPS刺激hPDLFs,并过表达LncRNA-KAT7,观察炎症因子IL-17表达的变化。结果:在慢性牙周炎组织中,LncRNA-KAT7呈低表达,IL-17呈高表达,且两者为负相关性;不同组织来源的hPDLFs未经LPS处理时,LncRNA-KAT7和IL-17的表达无明显差异;未经LPS处理,过表达LncRNA-KAT7对IL-17的表达无统计学差异,但LPS处理后,上调LncRNA-KAT7可明显抑制IL-17的表达。结论:在hPDLFs中上调LncRNA-KAT7可抑制LPS诱导炎症因子IL-17的表达。

SOCS6通过JAK2/STAT3信号通路对人牙周膜成纤维细胞炎症及凋亡的影响

目的:探究SOCS6通过JAK2/STAT3信号通路对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症及凋亡的影响。方法:取对数生长期的hPDLFs,分组如下:对照组、0.1 mg/L LPS组、1 mg/L LPS组、5 mg/L LPS组,qRT-PCR观察LPS对hPDLFs中SOCS6 mRNA表达的影响,Western blot观察LPS对hPDLFs中SOCS6蛋白表达的影响,CCK-8法观察LPS对hPDLFs细胞活力的影响,ELISA法观察LPS对hPDLFs细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的含量的影响。慢病毒滴度检测、靶细胞感染预实验及细胞转染,并且qRT-PCR检测细胞SOCS6 mRNA表达。取对数生长期的hPDLFs,过表达转染SOCS6后,LPS诱导hPDLFs炎症细胞模型,用JAK2信号激活剂香豆霉素A1(CA1)处理过夜,分组如下:LPS组(5 mg/L LPS)、LPS+oe-NC组、LPS+oe-SOCS6组、LPS+oe-SOCS6+CA1组,CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,ELISA法检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,Western blot检测细胞SOCS6、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果:SOCS6在hPDLFs细胞表达,随着LPS刺激,SOCS6基因表达下调,并且LPS浓度越高,细胞中SOCS6基因表达下调越明显。而且,hPDLFs细胞过表达SOCS6基因后,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低,细胞炎症因子TNF-α、IL-1β含量减少,凋亡率下降。结论:SOCS6在LPS诱导的牙周炎细胞模型中表达下调,过表达SOCS6后细胞活力显著升高,凋亡率降低,此作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路及炎症因子IL-1β、TNF-α的表达有关。

美洲大蠊提取物对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞炎症的抑制作用

目的探究美洲大蠊提取物对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)炎症的抑制作用。方法采用原代培养法获得HPDLFs细胞,经免疫组化鉴定为牙周膜成纤维细胞。分别以600、300、150、75、37.5、18.25μg/mL美洲大蠊水提物和醇提物进行处理,采用MTT法检测12、24、36、48 h HPDLFs细胞存活率,选择合适的实验时间及剂量。建立LPS诱导牙周膜成纤维细胞炎症模型,相应剂量药物给药,RT-qPCR法检测IL-1β、IL-6 mRNA相对表达,ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS水平,Western blot法检测p-NF-κB、NF-κB、p-p38、p38蛋白表达。结果与对照组比较,在36 h、150μg/mL剂量以下,美洲大蠊水提物、醇提物组细胞存活率随剂量升高而增加(P<0.05,P<0.01)。与LPS组比较,美洲大蠊水提物和醇提物组细胞IL-6、IL-1βmRNA表达,TNF-α、IL-6水平,p-NF-κB、NF-κB、p-p38、p38蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论美洲大蠊提取物可能通过抑制NF-κB活化,从而抑制LPS诱导的HPDLFs细胞释放IL-6、TNF-α等炎症因子,进而抑制炎症反应,且美洲大蠊水提物效果优于醇提物。

周期性牵张力通过调控BMP2对人牙周膜成纤维细胞成骨分化的初步研究

目的探究周期性牵张力对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响及对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)成骨分化的作用。方法体外培养hPDLFs,分为3组(空白对照组、6 h组、12 h组),分别不加力、加力6 h和12 h。使用免疫荧光实验检测3组细胞骨架蛋白表达情况;使用Western Blot实验检测3组BMP-2表达情况;碱性磷酸酶染色试剂盒及茜素红染色实验分别用于检测3组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及骨钙结节形成情况。结果免疫荧光实验结果显示6 h组、12 h组hPDLFs骨架蛋白表达明显高于空白对照组;Western Blot实验结果显示6 h组、12 h组BMP-2蛋白表达明显高于空白对照组且具有统计学意义(P<0.05);ALP染色实验结果显示6 h组、12 h组中ALP活性明显高于空白对照组;茜素红染色实验结果显示6 h组、12 h组骨钙结节形成明显高于空白对照组。结论周期性牵张力的施加会促进hPDLFs中BMP-2的表达并促进hPDLFs成骨分化,可为临床口腔正畸进一步提供理论依据。

利拉鲁肽对高糖介导人牙周膜成纤维细胞的影响

目的研究利拉鲁肽(Lira)对高糖介导人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)凋亡及Wnt/连环蛋白β(CTNNB)1通路的影响及机制。方法体外复苏培养hPDLFs,取对数生长期的hPDLFs调整其密度为5×10^(8)个/L。对照组hPDLFs在常规培养基中培养〔含11 mmol/L葡萄糖(GLU)〕,甘露醇组hPDLFs在含有19.5 mmol/L甘露醇培养基中培养,高糖组在含40 mmol/L GLU的培养基中培养,Lira组在含有40 mmol/L GLU和100 nmol/ml Lira的培养基中培养。3 d后利用CCK-8法检测各组细胞活力,利用Hoechst染色检测细胞凋亡情况同时利用比色法检测各组hPDLFs凋亡相关指标含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、6、9活性,检测各组hPDLFs内游离Ca^(2+)浓度,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测测各组hPDLFs上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-3和MMP-9表达,采用实时荧光定量PCR及Western印迹检测各组hPDLFs中Wnt3a、CTNNB1、Bcl2相关X蛋白(Bax)、重组人B细胞淋巴瘤因子2XL(Bcl-xl)的mRNA和蛋白表达。结果与对照组和甘露醇组比较,高糖组hPDLFs凋亡率及细胞内游离Ca^(2+)浓度显著增加,细胞活力显著降低(P<0.05),Caspase3、6、9活性和细胞上清液中MMP-2、MMP-3和MMP-9浓度显著升高(P<0.05),Wnt3a、CTNNB1及Bax mRNA和蛋白水平均表达显著升高,Bcl-xl mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。与高糖组比较,Lira组hPDLFs凋亡细胞数目显著减少,细胞内游离Ca^(2+)浓度显著降低,细胞活力显著升高(P<0.05),Caspase3、6、9活性显著降低,细胞上清液中MMP-2、MMP-3和MMP-9浓度显著降低(P<0.05),Wnt3a、CTNNB1及Bax mRNA和蛋白表达显著降低,Bcl-xl mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论Lira对高糖介导的hPDLFs损伤具有保护作用,降低细胞凋亡率,促进细胞增殖,其机制可能通过抑制Wnt/CTNNB1通路激活,抑制下游靶基因Bax,促进Bcl-xl的表达实现的,并且抑制细胞Caspase活性及上清液中MMP相关蛋白的释放。

利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)凋亡的影响,为糖尿病合并牙周疾病的治疗提供依据。方法选取2019年12月广州医科大学附属惠州医院接受正畸治疗需拔出的前磨牙的5名志愿者,取牙周膜组织标本,体外培养PDLF,根据培养液成分设置为低糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、低糖给药组(5.5 mmol/L葡萄糖+1×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽)及高糖给药组(25 mmol/L葡萄糖+1×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽)。应用流式细胞仪测定细胞凋亡情况;采用Western Blot法测定牙周膜成纤维细胞中B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平;采用酶联免疫吸附法检测PDLF悬液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)的表达。结果低糖对照组、低糖给药组、高糖对照组和高糖给药组细胞凋亡率分别为(4.97±0.15)%、(3.07±0.12)%、(11.33±1.10)%、(5.87±0.49)%。与低糖对照组比,高糖对照组细胞凋亡率显著升高;且低、高糖给药组凋亡率显著低于低、高糖对照组;低糖对照组的Bax蛋白相对表达量低于高糖对照组,Bcl-2蛋白相对表达量高于高糖对照组;低、高糖给药组Bax蛋白相对表达量分别低于低、高糖对照组,低糖给药组均低于高糖给药组;Bcl-2蛋白相对表达量分别高于低、高糖对照组,低糖给药组均高于高糖给药组;低糖对照组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平低于高糖对照组;低、高糖给药组细胞中炎症因子水平分别低于低、高糖对照组,且低糖给药组低于高糖给药组(均P<0.05)。结论利拉鲁肽能够抑制高糖诱导的PDLF凋亡,调控Bax/Bcl-2表达,降低炎症反应,可促进牙周组织愈合修复。

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的 :探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法 :分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察 ,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果 :消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短 ,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论 :组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形 。

人牙周膜成纤维细胞增殖与压力关系的初步观察

目的 :在体外培养环境下观察压力对人牙周膜成纤维细胞 (HPLF)增殖的影响。方法 :取第 4～ 6代培养的HPLF ,应用可控压力细胞加载装置分别间断性施加 3 0、60、90kPa的压力 ,分别在培养 3、5、7d后用MTT法测定各组的A值。结果 :HPLF在 3 0、60、90kPa的压力培养环境下MTT反应的A值显著小于对照组 ,压力值越大 ,A值越小。结论 :3 0、60、90kPa间断性压力可显著抑制HPLF细胞增殖 ,该抑制作用随压力值增大而增强。

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的 :研究人牙周膜成纤维细胞 (PDLF)在机械拉伸应变作用下 ,细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况 ,探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法 :采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上 ,通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况 ,并进行统计分析。结果 :在 8%、12 %、16%力值组 ,细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增 ,肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗 ,排列更有规律 ;而在 2 0 %力值组 ,其结果则反之。结论

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF48h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200μmol/L及400μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。