牙周膜相关蛋白1在大鼠牙周组织及牙周膜细胞中表达的研究

目的研究牙周膜相关蛋白1（periodonta lligament-associated protein-1，PLAP-1）在正常牙周组织及牙周膜细胞中的分布和表达，为进一步研究PLAP-1在牙周组织中的作用奠定基础。方法用免疫组织化学、免疫细胞化学和反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术，对5只正常成年雄性SD大鼠磨牙牙周组织中PLAP-1的组织分布和牙周膜细胞mRNA的表达进行分析。结果免疫组织化学结果表明，PLAP-1在牙周组织中强阳性表达于牙周膜，而在牙骨质、牙槽骨、牙龈中未见表达。免疫细胞化学结果显示，PLAP-1染色阳性细胞中着色定位于胞质中，胞核染色阴性。RT．PCR电泳结果显示350bp处出现一条目的条带，与PLAP-1mRNA表达的预期结果相同，表明牙周膜细胞在mRNA水平表达PLAP-1。结论在大鼠正常牙周组织中，PLAP-1在基因及蛋白水平均呈高表达且主要定位于牙周膜细胞中，PLAP-1是否参与调节胶原纤维的网络形成、牙周组织动态平衡等与牙周膜细胞密切相关的各种生理功能还有待进一步深入研究。

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的研究牙周膜相关蛋白1(PLAP-1)在人牙周膜细胞(PDLC)成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1在牙周组织中的作用奠定基础。方法酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN和OPN mRNA表达变化,Western blot检测PLAP-1、RUNX2和OCN蛋白表达变化并进行统计分析。结果培养的人PDLC来源于间充质;人PDLC矿化诱导21 d后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d时ALP活性较对照组明显增高(P<0.05),具有成骨分化能力;PLAP-1免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR和Western blot结果显示,人PDLC在mRNA和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA表达量随人PDLC成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d下调,较对照组有明显差异(P<0.05),Western blot检测蛋白表达显示类似的表达趋势。结论 PLAP-1在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究。

牙周组织自身稳定的分子机制研究进展

牙周膜相关蛋白(PLAP)-1为新确定的小分子富亮氨酸蛋白聚糖家族中的成员,是一种新的负性调节牙周膜矿化的因子,在牙周组织中特异性表达,在牙周组织动态平衡的自身稳定中起关键的作用。下面就PLAP-1的结构、组织分布和功能特点以及在牙周膜中的作用与调控机制等研究进展作一综述。

TNF-α对人牙周膜细胞表达Asporin的影响

目的:检测TNF-α对人牙周膜细胞Asporin表达的影响,初步探讨Asporin在牙周炎致病过程中扮演的角色,为牙周炎的发病机制研究提供线索。方法:改良酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞,qRT-PCR检测在不同浓度TNF-α(0.5、1、2、5、10 ng/mL)作用下牙周膜细胞Asporin的表达及使用1 ng/mL的TNF-α作用于牙周膜细胞3、6、24和48 h后,牙周膜细胞中Asporin的表达;应用免疫细胞化学检测Asporin在牙周膜细胞中表达定位和在TNF-α作用下的表达变化,其结果用Image-Pro Plus(IPP)软件分析。结果:qRT-PCR结果显示,1ng/mL TNF-α能最大程度降低人牙周膜细胞中Asporin的表达(P<0.05),TNF-α作用后3 h开始,Asporin表达下降,作用24 h,48 h后,其表达降低最为明显(P<0.05)。免疫细胞化学的检测结果与qRT-PCR一致。结论:TNF-α能显著下调人牙周膜细胞Asporin的表达,推测Asporin可能参与了牙周炎的发生发展过程。

真核表达质粒pBABE-hygro-PLAP-1的构建及鉴定

目的:构建并鉴定含有plap-1基因和已知FLAG序列的真核细胞表达载体pBABE-hygro-PLAP-1。方法:采用PCR扩增PLAP-1的目的片段,然后连接到已知FLAG序列的载体p3×FLAG-CMV-10上;再次通过PCR扩增出PLAP-1的目的片段及已知序列的FLAG,最后将其插入真核细胞表达载体pBABE-hygro的多克隆位点上。对该重组体进行酶切鉴定和测序验证。结果:通过对重组质粒进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达载体pBABE-hygro-PLAP-1构建成功。结论:成功构建plap-1基因的真核表达载体,为进一步研究plap-1基因的功能奠定了实验基础。

成骨细胞分化负性调控因子的研究进展

成骨细胞主要介导骨形成，维持骨骼结构，并调控骨矿化和破骨细胞的活性，其分化、成熟对于骨重建具有重要影响。成骨细胞分化负性调控机制的阐明有利于疾病的预防与治疗研究，能够为疾病的治疗提供新的思路。本文对近年来成骨细胞分化负性调节因子的研究进展作一综述。